張 潔, 慶 寧*, 易祖盛, 王英勇, 江曉汕, 盧文華, James Lazell

(1.華南師范大學(xué) 生命科學(xué)學(xué)院, 廣東省高等學(xué)校生態(tài)與環(huán)境科學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室, 廣東省水產(chǎn)健康安全養(yǎng)殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室, 廣州 510631；2.廣州大學(xué) 生命科學(xué)學(xué)院, 廣州 510006；3.中山大學(xué) 生命科學(xué)學(xué)院生物博物館, 廣州 510275；4.華南農(nóng)業(yè)大學(xué) 生命科學(xué)學(xué)院, 亞熱帶農(nóng)業(yè)生物資源保護(hù)與利用國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣州 510642；5.美國(guó)羅德島州生物保護(hù)所, RI 02835，美國(guó))

瞼虎屬(Goniurosaurus)動(dòng)物隸屬爬行綱(Reptilia)有鱗目(Squamata)蜥蜴亞目(Sauria)瞼虎科(Eublepharidae), 原隸屬壁虎科(Geckonidae). 多生活于溪流或河流岸邊的石縫或洞中, 晝伏夜出, 行動(dòng)遲緩, 以小型無(wú)脊椎動(dòng)物為食. 目前全世界瞼虎屬(Goniurosaurus)共有14種, 主要分布于東亞南部, 中國(guó)現(xiàn)已命名的瞼虎有6種[1]. 依據(jù)李德俊等[2]的報(bào)道, 中國(guó)動(dòng)物志[3]上僅記載里氏瞼虎Goniurosauruslichtenfelderi(Mocquard)[4]一種. 但是, 近年來(lái)在中國(guó)境內(nèi)分布的瞼虎種類(lèi)研究有所進(jìn)展[5], 不僅證實(shí)海南瞼虎G.hainanensisBarbour[6]不同于G.lichtenfelderi, 而且又相繼發(fā)現(xiàn)了4個(gè)新種: 憑祥瞼虎G.luii[7]、霸王嶺瞼虎G.bawanglingensis[8]、英德瞼虎G.yingdeensis[9]、荔波瞼虎G.liboensis[1]. 之前發(fā)現(xiàn)的廣東新記錄的瞼虎屬未定種Goniurosaurusindet.[10]和英德瞼虎G.yingdeensis的發(fā)現(xiàn)地點(diǎn)距離不遠(yuǎn), 僅以珠江水系北江的最大支流連江一河相隔, 體色、花紋以及背部橫紋的數(shù)目也相似, 但在生境和其它形態(tài)上卻有明顯的差異. 前者生活于洞穴, 后者生活于靠近村落建筑物的隙縫; 特別是前者成年雌性沒(méi)有肛前孔而后者卻有, 背部橫紋的顏色和寬窄不同, 以及第四趾下瓣數(shù)量不同等. 因此, 本文重點(diǎn)研究這兩者之間的遺傳差異和它們與瞼虎屬其它種類(lèi)的親緣關(guān)系.

在系統(tǒng)發(fā)育研究中, 常用貝葉斯演繹法(bayesian inference, BI)[11]、最大似然法(maximum likelihood, ML)[12]、最大簡(jiǎn)約法(maximum parsimony, MP)[13-14]、鄰接法(neighbor-joining, NJ)[15]來(lái)分別構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù). Ota等[16]依據(jù)線(xiàn)粒體(mtDNA: 12S rRNA及16S rRNA)分子數(shù)據(jù)建立了瞼虎科的NJ系統(tǒng)樹(shù), 認(rèn)為所有日本種類(lèi)聚為一支并形成G.kuroiwae單系群. Grismer等[7]基于形態(tài)學(xué)，初步建立了當(dāng)時(shí)已知瞼虎種類(lèi)的親緣關(guān)系，4條背部橫紋(包含nuchal loop)是祖征(pleisiomorphic), 具此特征的種類(lèi)形成單系群(monophyletic), 其中里氏瞼虎G.lichtenfelderi與海南瞼虎G.hainanensis形成單系之后, 再與日本的G.kuroiwae單系形成一支; 具有5條背部橫紋的憑祥瞼虎G.luii與蛛紋瞼虎G.araneus形成單系之后, 再與海南島的霸王嶺瞼虎G.bawanglingensis形成另一支. 在這些基礎(chǔ)上, 利用形態(tài)學(xué)數(shù)據(jù)、生理學(xué)特征、分子數(shù)據(jù)(12S rRNA及16S rRNA)所得到的瞼虎科MP系統(tǒng)樹(shù)[17]與早期的結(jié)果基本一致. 利用4種mtDNA基因片段(12S rRNA、16S rRNA、完整ND2及其側(cè)翼基因)對(duì)瞼虎科已知物種及壁虎科部分物種進(jìn)行分析所得的BI系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)[18]則不盡相同, 其中G.luii與G.araneus先聚成單系后再與G.lichtenfelderi聚成一支, 最后才與G.kuroiwae單系聚成瞼虎科的整個(gè)分支. Wang等[1]最近利用16S rRNA所得的BI、ML、MP系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)與早期的形態(tài)學(xué)及分子數(shù)據(jù)的結(jié)果存在重要的分歧, 完全不同于上述所有研究，認(rèn)為具有4條背部橫紋的種類(lèi)形成單系群的結(jié)論.

本文結(jié)合前人研究的結(jié)果, 利用mtDNA的12S rRNA和16S rRNA基因片段序列差異進(jìn)行分析, 比較BI、ML、MP、NJ四種系統(tǒng)發(fā)育分析方法的結(jié)果,探討Goniurosaurusindet.是否為有效種, 建立了我國(guó)瞼虎屬的系統(tǒng)發(fā)育樹(shù), 為世界瞼虎屬的系統(tǒng)發(fā)育和分類(lèi)研究補(bǔ)充了基礎(chǔ)資料和理論依據(jù), 也為物種保護(hù)和瀕危評(píng)估提供了重要的參考數(shù)據(jù).

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

共有8個(gè)瞼虎樣品用于檢測(cè)mtDNA的12S rRNA和16S rRNA基因片段序列, 包括廣東省瞼虎屬新記錄Goniurosaurusindet.的3個(gè)個(gè)體、英德瞼虎G.yingdeensis的3個(gè)個(gè)體、華南師范大學(xué)(SCNU)動(dòng)物標(biāo)本室收藏的海南瞼虎G.hainanensis的2個(gè)個(gè)體(表1). 從Genbank上獲取了含12S rRNA和16S rRNA的僅有的9個(gè)瞼虎mtDNA序列, 并以大壁虎Gekkogecko作為外類(lèi)群(表1).

表1 瞼虎屬及其外類(lèi)群樣品信息及Genebank線(xiàn)粒體基因片段登錄號(hào)

1.2 基因組DNA擴(kuò)增和測(cè)序

采用上海生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司購(gòu)買(mǎi)的基因組DNA抽提試劑盒及其所示方法進(jìn)行DNA的提取. 用于擴(kuò)增12S rRNA及16S rRNA序列的特異引物[18]分別是Gec12S-1L (5′-CCTAGAGGAGCCTGTCCTATAA-3′), 12SB-H (5′-CAGAGGGTGACG-GGCGGTGTGT-3′)和16S-5L (5′-GGTMMYGCCTGCCCAGTG-3′), 16SBR-H (5′-CCGGTCTGAACTCAGATCACGT-3′). 用于擴(kuò)增12S rRNA及16S rRNA基因片段序列的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)的25 μL體系包括PCR Master Mix 12.5 μL (含MgCl2、dNTP Mix、Taq 酶)、上下游引物各1.0 μL (ng/μL)、DNA樣品1.0 μL, 用ddH2O補(bǔ)足25 μL. 反應(yīng)程序包括94 ℃預(yù)變性4 min, 然后進(jìn)行35個(gè)循環(huán), 每個(gè)循環(huán)包括94 ℃變性30 s, 55 ℃退火30 s, 72 ℃延伸1 min, 最后72 ℃延伸8 min, 4 ℃保存. PCR產(chǎn)物用1%瓊脂糖電泳檢測(cè)樣品擴(kuò)增情況, 然后送至上海生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司完成純化和測(cè)序.

1.3 數(shù)據(jù)處理

使用DNABASER 2.91.5軟件(http://www.dnabaser.com)和CLUSTAL X 1.81軟件[19]對(duì)序列進(jìn)行比對(duì), 輔以人工校正. 利用MEGA 5.0軟件[20]計(jì)算分子多樣性參數(shù)(如多態(tài)位點(diǎn)個(gè)數(shù)、轉(zhuǎn)換顛換比例), 并利用其中的雙參數(shù)法[21]計(jì)算種間、種內(nèi)遺傳距離. 使用PAUP 4.0b10軟件[22]中的ML、MP、NJ分別構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù). ML、MP、NJ均采用啟發(fā)式搜索(heuristic search), TBR (tree bisection reconnection)枝長(zhǎng)交換, 1 000次抽樣自展(bootstrap)來(lái)分析評(píng)估系統(tǒng)發(fā)育各分支的支持率, 對(duì)其中所有核苷酸位點(diǎn)不進(jìn)行加權(quán)處理, 位點(diǎn)空位亦視為缺失狀態(tài). 在構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)前, 還對(duì)兩個(gè)mtDNA基因片段進(jìn)行分劃同質(zhì)性檢驗(yàn)(partition homogeneity test)[23], 評(píng)價(jià)片段序列聯(lián)合分析的可靠性, 結(jié)果(p=0.124)顯示兩個(gè)基因片段可以進(jìn)行聯(lián)合分析. 采用MRBAYES 3.1.2軟件[11]構(gòu)建BI樹(shù), 其中MCMC(Markov Chain Monte Carlo)算法以隨機(jī)樹(shù)為起始樹(shù), 運(yùn)行1 000 000代, 每100代取樣1次, 開(kāi)始的2 500個(gè)樣本作為老化樣本(burn-in)舍棄. 在用BI、ML、NJ法構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)之前, 先用MRMODELTEST 3.7軟件[24]獲得最適合本研究序列矩陣的核苷酸替代模型及相關(guān)參數(shù), 在AIC標(biāo)準(zhǔn)下(Akaike information criterion)[25], 12S rRNA和16S rRNA基因片段聯(lián)合數(shù)據(jù)的模型為GTR+G.

2 結(jié)果與分析

2.1 DNA序列特征

經(jīng)軟件比對(duì)輔以人工校正后, 共獲得瞼虎屬Goniurosaurus和大壁虎Gekkogecko17個(gè)樣品的12S rRNA序列共385 bp, 16S rRNA序列共477 bp, 2個(gè)基因片段合并后序列共為862 bp; 其中核苷酸變異位點(diǎn)388, 簡(jiǎn)約信息位點(diǎn)269. 堿基T、C、A和G的平均含量分別為21.8%、24.9%、35.0%和18.3%, 轉(zhuǎn)換顛換比為1.07.

2.2 遺傳距離特征

依據(jù)Kimura雙參數(shù)法所得的凈遺傳距離(表2)顯示瞼虎屬Goniurosaurus種間遺傳距離為0.011～0.295, 其中瞼虎屬未定種Goniurosaurusindet.與英德瞼虎G.yingdeensis之間的遺傳距離為0.044～0.046, 而內(nèi)外類(lèi)群之間的遺傳距離則較遠(yuǎn), 均介于0.302～0.412. 海南瞼虎G.hainanensis與瞼虎屬其它物種的種間遺傳距離較大, 均介于0.250～0.295, 接近外類(lèi)群大壁虎Gekkogecko與瞼虎屬Goniurosaurus之間遺傳距離的下限.

表2 瞼虎屬線(xiàn)粒體基因片段12S rRNA和16S rRNA聯(lián)合數(shù)據(jù)的種間和種內(nèi)遺傳距離(下三角)及標(biāo)準(zhǔn)誤差(上三角)

2.3 系統(tǒng)發(fā)育和物種親緣關(guān)系

以2個(gè)基因片段的聯(lián)合數(shù)據(jù)采用MP和NJ法分別構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)的拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)基本一致(圖1A). 瞼虎屬Goniurosaurus的17個(gè)個(gè)體由3個(gè)主分支構(gòu)成; 主分支a僅包含海南瞼虎G.hainanensis;G.kuroiwae類(lèi)群形成單系后與在地理上相距較遠(yuǎn)的里氏瞼虎G.lichtenfelderi共同聚成主分支b; 主分支c由2個(gè)單系構(gòu)成, 瞼虎屬未定種Goniurosaurusindet.與英德瞼虎G.yingdeensis形成單系后, 再與由憑祥瞼虎G.luii和蛛紋瞼虎G.araneus形成的單系聚成主分支c. 具有4條背部橫紋的G.hainanensis、G.lichtenfelderi和日本的G.kuroiwae類(lèi)群位于樹(shù)的根部, 表現(xiàn)祖征性狀.

以2個(gè)基因片段的聯(lián)合數(shù)據(jù)采用ML法所建的系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)(圖1B)與MP和NJ法所建的系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)的結(jié)果略有不同. 雖然也形成3個(gè)主分支, 其中主分支a與MP和NJ樹(shù)相似, 均僅由海南瞼虎G.hainanensis個(gè)體構(gòu)成, 但是主分支b和c不盡相同. 日本的G.kuroiwae類(lèi)群獨(dú)自構(gòu)成主分支b; 里氏瞼虎G.lichtenfelderi脫離MP和NJ樹(shù)的主分支b, 構(gòu)成主分支c的2個(gè)亞分支之一; 另一個(gè)亞分支與MP和NJ樹(shù)的主分支c基本一致. 系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)也顯示具4條背部橫紋是祖征.

以2個(gè)基因片段的聯(lián)合數(shù)據(jù)采用BI法所建的系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)(圖1C)與其它3種方法構(gòu)建樹(shù)的拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)也不盡相同. MP和NJ樹(shù)的主分支c中的2個(gè)單系關(guān)系保持不變, 其中瞼虎屬未定種Goniurosaurusindet.與英德瞼虎G.yingdeensis這一單系在此構(gòu)成主分支c, 而憑祥瞼虎G.luii和蛛紋瞼虎G.araneus這一單系在此構(gòu)成主分支b. 主要不同于上述ML、MP、NJ結(jié)果的是具有4條背部橫紋類(lèi)群的親緣關(guān)系; 海南瞼虎G.hainanensis沒(méi)有單獨(dú)構(gòu)成一個(gè)主分支, 而是同里氏瞼虎G.lichtenfelderi和日本的G.kuroiwae類(lèi)群共同聚為主分支a, 但是系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)也顯示具4條背部橫紋的種類(lèi)形成單系群.

3 討論

3.1 廣東新紀(jì)錄的瞼虎屬未定種Goniurosaurus indet.及其親緣關(guān)系

由BI、ML、MP、NJ 4種方法所構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)(圖1)均顯示瞼虎屬未定種Goniurosaurusindet.與英德瞼虎G.yingdeensis構(gòu)成姐妹支, 首次揭示二者親緣關(guān)系最近. 這2個(gè)廣東新種類(lèi)[9-10]分布區(qū)域相同, 環(huán)境地貌相似, 均為喀斯特石灰熔巖, 多巖洞和石縫, 利于瞼虎生存和隱藏. 但是, 它們兩者之間的遺傳距離(0.044～0.046)遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于各自種內(nèi)個(gè)體間的遺傳距離(0.000～0.002), 并且與分類(lèi)地位已經(jīng)明確的蛛紋瞼虎G.araneus與憑祥瞼虎G.luii兩種之間的遺傳距離(0.051)接近(表2), 也接近新種荔波瞼虎G.liboensis與G.luii兩種之間的遺傳距離(0.043)[1]. 雖然Goniurosaurusindet.與英德瞼虎G.yingdeensis兩者的地理分布距離較近, 采集地僅相距約62 km, 但是兩地之間有寬闊的連江干流相隔. 連江是珠江水系中北江的最大支流, 珠江及其主要支流的形成可以追溯到至今約1億年前的中生代上白堊紀(jì)[26]. 我們推測(cè)寬闊的水域可能造成地理屏障, 致使瞼虎長(zhǎng)時(shí)間不能沿著山嶺擴(kuò)散, 彼此隔離不能進(jìn)行基因交流, 逐漸適應(yīng)了不同的生境, 導(dǎo)致連江兩岸的瞼虎發(fā)生分化. 再結(jié)合兩者在形態(tài)上已有的顯著差異(體色、第四趾下瓣數(shù)量、雌性肛前孔有或無(wú))[9-10], 我們認(rèn)為Goniurosaurusindet.有可能是瞼虎屬新種, 與英德瞼虎G.yingdeensis構(gòu)成姐妹種, 成為G.luii類(lèi)群的新成員.

圖1 基于瞼虎屬Goniurosaurus線(xiàn)粒體基因片段12S rRNA及16S rRNA聯(lián)合數(shù)據(jù)而構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)及其3個(gè)主分支a、b、c內(nèi)外的支持率

3.2 地理親緣關(guān)系

Grismer等[7-8]將瞼虎分為3個(gè)類(lèi)群(group), 分別是G.lichtenfelderi類(lèi)群、G.kuroiwae類(lèi)群和G.luii類(lèi)群; 前2個(gè)類(lèi)群的種類(lèi)在形態(tài)上均具有4條背部橫斑紋, 后一類(lèi)群的種類(lèi)則具有5條背部橫斑紋. 我國(guó)的瞼虎種類(lèi)中, 里氏瞼虎G.lichtenfelderi和海南瞼虎G.hainanensis屬于G.lichtenfelderi類(lèi)群;G.luii類(lèi)群包括憑祥瞼虎G.luii、霸王嶺瞼虎G.bawanglingensis、英德瞼虎G.yingdeensis、荔波瞼虎G.liboensis和未定種Goniurosaurusindet. 由BI、ML、MP、NJ 4種方法所得的系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)(圖1)均支持在G.luii類(lèi)群中, 憑祥瞼虎G.luii和蛛紋瞼虎G.araneus的關(guān)系較為密切, 新發(fā)現(xiàn)的英德瞼虎G.yingdeensis和瞼虎未定種Goniurosaurusindet.的關(guān)系同樣如此. 這2對(duì)姐妹種類(lèi)均分布于內(nèi)陸地區(qū)并彼此相鄰, 其親緣關(guān)系符合地理距離決定分化的規(guī)律.

由ML、MP、NJ三種方法所構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)(圖1)均支持具有4條背部橫紋是祖征(pleisiomorphic), 并且BI樹(shù)(圖1)也支持具有4條背部橫紋特征的種類(lèi)形成單系群(monophyletic)這一長(zhǎng)期的形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)結(jié)果[7,16-18]. 具有不同背部橫紋數(shù)目的種類(lèi)沒(méi)有分別形成單系群的矛盾結(jié)果[1]可能與檢測(cè)樣品數(shù)目、基因片段長(zhǎng)短、外類(lèi)群的選用等都有關(guān)系; 后者僅采用了一個(gè)序列較短的基因片段, 其選用的外類(lèi)群與瞼虎種間的遺傳距離重疊.

3.3 海南瞼虎Goniurosaurus hainanensis的特殊性

由BI、ML、MP、NJ 4種方法構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)(圖1)均顯示海南瞼虎G.hainanensis不但與瞼虎屬其它物種存在顯著的遺傳分化(沒(méi)有與其它任何瞼虎構(gòu)成姐妹支); ML、MP、NJ 3種方法所建的系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)(圖1)也均表明海南瞼虎G.hainanensis的系統(tǒng)發(fā)育地位最為原始(位于樹(shù)的底端); 其與瞼虎屬其它物種之間的遺傳距離之大甚至接近壁虎屬Gekko與瞼虎屬Goniurosaurus之間的遺傳距離(表2). 長(zhǎng)期以來(lái), 前人認(rèn)為G.hainanensis和里氏瞼虎G.lichtenfelderi形成單系[1,7,17]. 但是, 我們研究的結(jié)果與上述文獻(xiàn)不一致, 揭示了G.hainanensis獨(dú)特的系統(tǒng)發(fā)育和分類(lèi)地位, 暗示海南島在瞼虎屬起源研究上的地理重要性.

4 結(jié)論

廣東新紀(jì)錄的瞼虎屬未定種Goniurosaurusindet.可能是新種, 其與英德瞼虎G.yingdeensis組成姐妹種, 成為瞼虎屬G.luii類(lèi)群的一個(gè)新成員. 具4條背部橫紋是祖征, 具5條背部橫紋為衍征. 本文首次提出的“河流隔離”假說(shuō)可能對(duì)進(jìn)一步解釋全球瞼虎屬物種的親緣地理分布格局具有重要意義. 瞼虎屬Goniurosaurus種類(lèi)稀少, 分布較為狹窄, 中國(guó)境內(nèi)外相繼發(fā)現(xiàn)的部分新種和舊種之間的地理分布區(qū)重疊. 因此, 了解它們的地理親緣關(guān)系和系統(tǒng)地位十分必要, 也是瀕危評(píng)估、保護(hù)對(duì)策制定的基礎(chǔ). 同時(shí)由于非法寵物貿(mào)易的威脅, 國(guó)外大多數(shù)種類(lèi)已經(jīng)列入各國(guó)的物種紅色名錄, 而目前中國(guó)物種紅色名錄[27]僅將憑祥瞼虎G.luii列入近危(NT)保護(hù)級(jí)別. 由此可見(jiàn), 中國(guó)瞼虎屬研究在物種分化、生態(tài)學(xué)、親緣地理方面仍需進(jìn)一步深入, 為重點(diǎn)關(guān)注保護(hù)瞼虎奠定理論和應(yīng)用基礎(chǔ).

參考文獻(xiàn)：

[1] Wang Y Y, Yang J H, Grismer L L. A new species ofGoniurosaurus(Squamata: Eublepharidae) from Libo, Guizhou Province, China[J]. Herpetologica, 2013, 69(2): 214-226.

[2] 李德俊, 汪建, 趙執(zhí)桴. 貴州荔波喀斯特地貌中爬行動(dòng)物調(diào)查[J]. 兩棲爬行動(dòng)物學(xué)報(bào), 1985, 4(2): 140-143.

Li D J, Wang J, Zhao Z F. Reptilian survey of the karst in Libo, Guizhou[J]. Acta Herpetologica Sinica, 1985, 4(2): 140-143.

[3] 趙爾宓, 趙肯堂, 周開(kāi)亞, 等. 中國(guó)動(dòng)物志: 爬行綱. 有鱗目. 蜥蜴亞目[M]. 北京:科學(xué)出版社, 1999.

[4] Mocquard F. Notes herpétologiques[C]. Buletin du Muséum D′Histoirie Naturelle. Paris, 1897, 3(6): 211-217.

[5] Blair C, Orlov N L, Shi H T, et al. A Taxonomic re-evaluation ofGoniurosaurushainanensis(Squamata: Eublepharidae) from Hainan Island, China[J]. Russian Journal of Herpetology, 2009, 16: 35-40.

[6] Barbour T. Some new reptiles and amphibians[J]. Bulletin: Museum of Comparative Zoology, Harvard, 1908, 51(12):315-325.

[7] Grismer L L, Viets B E, Boyle L J. Two new continental species ofGoniurosaurus(Squamata: Eublepharidae) with a phylogeny and evolutionary classification of the Genus[J]. Journal of Herpetology, 1999, 33(3): 382-393.

[8] Grismer L L, Shi H T, Orlov N L, et al. A new species ofGoniurosaurus(Squamata: Eublepharidae) from Hainan Island, China[J]. Journal of Herpetology, 2002, 36: 217-224.

[9] Wang Y Y, Yang J H, Cui R F. A new species ofGoniurosaus(Squamata: Eublepharidae) from Yingde, Guangdong Province, China[J]. Herpetologica, 2010, 66(2): 208-219.

[10] Yi Z S, Li Z C, Wen W L, et al. Discovery ofGoniurosaurusgeckos (Squamata: Eublepharidae) in northwestern Guangdong, China[J]. IRCF Reptiles & Amphibians, 2010, 17: 47-49.

[11] Ronquist F, Huelsenbeck J. MrBayes 3: Bayesian phylogenetic inference under mixed models[J]. Bioinformatics, 2003, 19: 1572-1574.

[12] Felsenstein J. Maximum likelihood and minimum-steps methods for estimating evolutionary trees from data on discrete characters[J]. Systematic Biology, 1973, 22(3): 240-249.

[13] Fitch W M. Toward defining the course of evolution: Minimum change for a specific tree topology[J]. Systematic Zoology, 1971, 20: 406-416.

[14] Hartigan J A. Minimum mutation fits to a given tree[J]. Biometrics, 1973, 29(1): 53-65.

[15] Saitou N, Nei M. The neighbor-joining method: A new method for reconstructing phylogenetic trees[J]. Molecular Biology and Evolution, 1987, 4: 406-425.

[16] Ota H, Honda M, Kobayashi M, et al. Phylogenetic relationships of eublepharid geckos (Reptilia: Squamata): A molecular approach[J]. Zoological Science, 1999, 16: 659-666.

[17] Kratochvíl L S, Frynta D. Body size, male combat and the evolution of sexual dimorphism in eublepharid geckos (Squamata : Eublepharidae)[J]. Biological Journal of the Linnean Society, 2002, 76(2): 303-314.

[18] Jonniaux P, Kumazawa Y. Molecular phylogenetic and dating analyses using mitochondrial DNA sequences of eyelid geckos (Squamata: Eublepharidae)[J]. Gene, 2008, 407: 105-115.

[19] Thompson J, Gibson T, Plewniak F, et al. Clustal X windows interface: Flexible strategies for multiple sequence alignment aided by quality analysis tools[J]. Nucleic Acids Research, 1997, 22: 4876-4882.

[20] Tamura K, Peterson D, Peterson N, et al. MEGA5: Molecular evolutionary genetics analysis using maximum likelihood, evolutionary distance, and maximum parsimony methods[J]. Molecular Biology and Evolution, 2011, 28(10): 2731-2739.

[21] Kimura M. A simple method for estimating evolutionary rate of base substitutions through comparative studies of nucleotide sequences[J]. Journal of Molecular Evolution, 1980, 16: 111-120.

[22] Swofford D L. PAUP 4.0 beta version: Phylogenetic Analysis Using Parsimony (and Other Methods[EB/OL]. http://paup.csit.fsu.edu/order.html.

[23] Farris J, Kallersjo M, Kluge A, et al. Testing significance of incongruence[J]. Cladistics, 1995, 10: 315-319.

[24] Nylander J. MrModeltest 2.0[EB/OL]. Evolutionary Biology Centre, Uppsala University, Sweden. http://www.abc.se/～nylander/JHJuserconsentJHJ

[25] Luo A R, Qiao H J, Zhang Y Z, et al. Performance of criteria for selecting evolutionary models in phylogenetics: A comprehensive study based on simulated datasets[J]. BMC Evolutionary Biology, 2010, 10(1): 242.

[26] 薛建楓. 中國(guó)江河防洪叢書(shū)(珠江卷)[M]. 北京:水利電力出版社, 1995.

[27] 汪松, 解焱. 中國(guó)物種紅色名錄(第2卷)[M]. 北京：高等教育出版社, 2009.