楊智勇+楊林+鐘麗芳

[摘要] 目的 探討Rho激酶抑制劑對大鼠慢性低灌注腦損傷腦組織的保護(hù)作用。 方法 選擇SD大鼠，隨機分為假手術(shù)組、腦損傷組、法舒地爾組，檢測腦組織功能、梗死面積及炎癥因子水平。 結(jié)果 腦損傷組的腦組織功能評分高于假手術(shù)組和法舒地爾組，腦組織損傷面積大于假手術(shù)組和法舒地爾組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。腦損傷組的IL-8、TNF-α水平高于假手術(shù)組和法舒地爾組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。IL-8、TNF-α水平與腦組織功能評分及損傷面積呈正相關(guān)。 結(jié)論 Rho激酶抑制劑能控制炎癥反應(yīng)水平、改善慢性低灌注損傷的腦組織功能，具有積極的應(yīng)用價值。

[關(guān)鍵詞] 腦組織損傷；低灌注；Rho激酶；法舒地爾

[中圖分類號] R742[文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A[文章編號] 1674-4721（2014）05（a）-0011-03

Protective effect of Rho kinase inhibitor on brain tissue of rat with chronic hypoperfusion injury

YANG Zhi-yong YANG Lin ZHONG Li-fang

Department of Neurosurgery,People′s Hospital of Huidong County in Guangdong Province,Huidong516300,China

[Abstract] Objective To explore protective effect of Rho kinase inhibitor on brain tissue of rat with chronic hypoperfusion injury. Methods SD rats were enrolled and randomly divided into three groups,including sham operation group,cerebral injury group,fasudil group.Then brain function,infarct size and the level of inflammatory factors were detected. Results Brain function score of cerebral injury group was higher than that of sham operation group and fasudil group respectively,brain tissue damage area of cerebral injury group was larger than that of sham operation group and fasudil group respectively,with statistical difference(P＜0.05).The level of IL-8 and TNF-α of cerebral injury group was higher than that of sham operation group and fasudil group respectively,with statistical difference(P＜0.05).The level of IL-8 and TNF-α were positively correlated with brain function score,brain tissue damage area. Conclusion Rho kinase inhibitor has positive application value for controlling inflammatory reaction and improving the level of chronic hypoperfusion injury of brain function.

[Key words] Brain tissue injury;Hypoperfusion;Rho kinase;Fasudil

腦組織缺血性疾病是臨床上的常見疾病，會對患者的生命安全和生活質(zhì)量造成嚴(yán)重影響。在疾病的發(fā)生、發(fā)展過程中，腦組織低灌注損傷持續(xù)存在，采取有效的手段解決低灌注所造成的腦組織損傷具有積極的臨床價值[1]。目前研究認(rèn)為，Rho激酶在腦組織缺血性損傷中發(fā)揮了重要價值[2]。本研究主要分析Rho激酶抑制劑輔助治療對腦慢性低灌注損傷腦組織保護(hù)作用的影響。

1 材料與方法

1.1 材料

選取健康雄性SD大鼠（由廣東省醫(yī)學(xué)實驗動物中心提供）30只，體重200～230 g，平均（219.3±25.2） g，隨機分為假手術(shù)組、腦損傷組、法舒地爾組，每組10只。

1.2 方法

1.2.1 假手術(shù)組假手術(shù)組僅做手術(shù)切口，分離頸總動脈、頸外動脈、頸內(nèi)動脈的操作，分別于術(shù)前1 h和術(shù)后1 h給予等量生理鹽水腹腔注射。

1.2.2 腦損傷組術(shù)前1 h，給予等量生理鹽水，腹腔注射，參照Longa等[3]的方法進(jìn)行大腦中動脈線栓法制備大鼠腦組織慢性低灌注損傷模型：水合氯醛麻醉后，擺放仰臥位，做頸部正中切口，分離皮膚、皮下組織和肌肉，暴露氣管，于氣管右側(cè)尋找頸動脈鞘并切開，分離頸總動脈、頸外動脈、頸內(nèi)動脈，結(jié)扎頸外和頸總動脈，于頸內(nèi)動脈處做一個小切口，緩慢插入直徑為0.23 mm的尼龍栓線。術(shù)后1 h，再次給予等量生理鹽水，腹腔注射。

1.2.3 法舒地爾組[4]術(shù)前1 h，給予甲磺酸法舒地爾10 mg/kg，腹腔注射；按模型組相同的方式制備大鼠腦組織慢性低灌注損傷模型，并于術(shù)后1 h，再次給予甲磺酸法舒地爾10 mg/kg，腹腔注射。

1.3 觀察指標(biāo)

1.3.1 腦組織功能術(shù)后24 h，參考Longa等[3]的方法對3組大鼠的腦組織功能進(jìn)行評價：無神經(jīng)損傷癥狀為0分，對側(cè)前爪不能完全伸展為1分，對側(cè)前爪轉(zhuǎn)向另一側(cè)為2分，對側(cè)前爪向另一側(cè)傾倒為3分，不能行走為4分，昏迷或死亡為5分。

1.3.2 腦組織損傷面積處死大鼠，取右側(cè)腦組織，用切片機切取視交叉部位的腦片，厚度約2 mm，2% TTC溶液染色、37℃、15 min，分析梗死腦組織（染色后為白色）和正常腦組織（染色后為紅色）的面積，計算梗死腦組織面積/（梗死腦組織面積＋正常腦組織面積）。

1.3.3 血清炎癥因子處死大鼠時采集血液，離心后取血清檢測炎癥因子水平，包括腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）和白細(xì)胞介素-8（interleukin，IL-8）。檢測方法為酶聯(lián)免疫吸附法[5]：將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，輕輕晃動混勻，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，37℃反應(yīng)120 min；棄去液體，甩干，不用洗滌；每孔加標(biāo)記抗體工作液100 μl（取1 μl生物素標(biāo)記抗體加99 μl生物素標(biāo)記抗體稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前1 h內(nèi)配制），37℃，60 min；溫育60 min后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，浸泡1～2 min/次，甩干；每孔加過氧化物酶標(biāo)記親和素工作液（同生物素標(biāo)記抗體工作液）100 μl，37℃，60 min；溫育60 min后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，浸泡1～2 min/次，350 μl/每孔，甩干；依序每孔加底物溶液90 μl，37℃避光顯色（30 min內(nèi)肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3～4孔有明顯的梯度藍(lán)色，后3～4孔梯度不明顯，即可終止）；依序每孔加終止溶液50 μl，終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同；用酶聯(lián)儀在450 nm波長依序測量各孔的光密度。檢測材料：Roche酶聯(lián)免疫吸附試劑盒。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS 18.0軟件進(jìn)行分析，計量資料以x±s表示，采用方差分析，兩兩比較采用LSD法，相關(guān)性分析采用單因素回歸分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 3組大鼠腦組織功能及損傷面積的比較

腦損傷組的腦組織功能評分高于假手術(shù)組和法舒地爾組，腦組織損傷面積大于假手術(shù)組和法舒地爾組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）（表1）。

表13組大鼠腦組織功能及損傷面積的比較（x±s）

與腦損傷組比較，*P＜0.05

2.2 3組大鼠血液炎癥因子水平的比較

腦損傷組的IL-8、TNF-α水平高于假手術(shù)組和法舒地爾組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）（表2）。

表2 3組大鼠血液炎癥因子水平的比較（μg/L，x±s）

與腦損傷組比較，*P＜0.05

2.3 炎癥因子水平與腦組織功能評分及腦組織損傷面積的相關(guān)性

IL-8、TNF-α水平與腦組織功能評分及損傷面積呈正相關(guān)（P＜0.05）（表3）。

表3 炎癥因子水平與腦組織功能評分及腦組織損傷面積的相關(guān)性

3 討論

近年來，缺血性腦損傷的臨床發(fā)病率逐年升高，已成為危害人類生命安全和生存質(zhì)量的重要疾病，具有致死率和致殘率高、預(yù)后差的特點[6-7]。臨床上，引起腦組織缺血性損害的疾病包括高血壓、動脈粥樣硬化、腦血管栓塞、痙攣等，可在造成腦血管狹窄、腦組織血管減少或中斷的基礎(chǔ)上引起神經(jīng)功能損害[8]，并伴發(fā)頭痛、嘔吐、感覺和運動功能受損等臨床癥狀及體征[9]。多數(shù)患者在疾病的發(fā)生、發(fā)展過程中，可持續(xù)存在腦組織的慢性低灌注損傷[10]，因此，針對該情況探尋有效的治療方法，對臨床治療工作具有指導(dǎo)意義。

Rho激酶作為小G蛋白Rho下游的重要底物之一，能通過磷酸化的方式激活下游信號通路，并參與炎癥細(xì)胞的黏附、遷移及炎癥因子的合成和釋放[11-12]。法舒地爾作為一種Rho激酶抑制劑，能通過抑制Rho激酶的生物學(xué)作用來發(fā)揮腦組織保護(hù)作用[13]。本研究通過建立大鼠腦組織慢性低灌注損傷模型并給予法舒地爾治療，分析Rho激酶抑制劑對腦組織的保護(hù)作用。研究結(jié)果顯示，腦損傷組的腦組織功能評分高于假手術(shù)組和法舒地爾組，腦組織損傷面積大于假手術(shù)組和法舒地爾組，說明模型老鼠建立成功，腦損傷組術(shù)后的腦組織功能下降、梗死面積增加；法舒地爾治療能有效保護(hù)腦組織，改善術(shù)后腦組織功能，減小梗死面積。

目前研究認(rèn)為，在腦組織慢性低灌注損傷過程中，炎癥反應(yīng)發(fā)揮了重要作用[14]。中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等炎癥細(xì)胞向腦組織內(nèi)大量募集并產(chǎn)生TNF-α及IL-1、IL-2、IL-6等炎癥因子，直接介導(dǎo)腦組織損傷[15-16]。本研究結(jié)果顯示，腦損傷組的IL-8、TNF-α水平高于假手術(shù)組和法舒地爾組，說明法舒地爾治療能有效控制腦組織損傷后的炎癥水平。

本研究結(jié)果顯示，IL-8、TNF-α水平與腦組織功能評分、腦組織損傷面積呈正相關(guān)，說明炎癥因子水平越高、腦組織損傷越嚴(yán)重，兩者具有較好的相關(guān)性，也能反映法舒地爾可通過控制炎癥反應(yīng)水平來改善腦組織功能。

綜上所述，Rho激酶抑制劑能控制炎癥反應(yīng)水平、改善慢性低灌注損傷的腦組織功能，具有積極的應(yīng)用價值。

[參考文獻(xiàn)]

[1]于宗良，陳樂，楊向軍.缺血后適應(yīng)聯(lián)用粒細(xì)胞集落刺激因子對心肌急性缺血再灌注損傷的保護(hù)作用[J].東南大學(xué)學(xué)報·醫(yī)學(xué)版，2013，32（1）；51-55.

[2]楊坤軍.急性腦梗死神經(jīng)功能惡化的研究進(jìn)展[J].醫(yī)學(xué)綜述，2010，16（20）；3098-3011.

[3]Longa EZ，Weinstein PR，Carlson S，et al.Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats[J].Stroke，1989，20（1）：84-91.

[4]馮治國，何潤源，侯玉立.法舒地爾治療缺血性腦卒中的系統(tǒng)評價[J].中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志，2012，10（4）：424-427.

[5]王建軍.大腸癌血清腫瘤壞死因子α，白細(xì)胞介素8和可溶性白細(xì)胞介素2受體水平的檢測及其臨床意義[J].中國腫瘤臨床與康復(fù)，2012，19（3）：241-243.

[6]涂獻(xiàn)坤，楊衛(wèi)忠，石松生.炎癥反應(yīng)介導(dǎo)缺血性腦損傷的機制研究進(jìn)展[J].中華神經(jīng)醫(yī)學(xué)雜志，2011，10（3）：322-324.

[7]孫海蛟.法舒地爾配合電針療法治療急性缺血性腦血管病的臨床觀察[J].中國醫(yī)學(xué)創(chuàng)新，2012，9（36）：137-138.

[8]Petrinovic MM，Duncan CS，Bourikas D，et al.Neuronal Nogo-A regulates neurite fasciculation,branching and extension in the developing nervous system[J].Development，2010， 137（15）：2539-2550.

[9]李雙鳳，王丹，王亞平，等.MPTP參與硫化氫對大鼠心肌缺血再灌注損傷的延遲性保護(hù)作用[J].東南大學(xué)學(xué)報·醫(yī)學(xué)版，2010，29（6）：648-651.

[10]王莉.奧扎格雷聯(lián)合法舒地爾對短暫性腦缺血發(fā)作患者腦氧代謝及炎性指標(biāo)的影響研究[J].吉林醫(yī)學(xué)，2013， 34（19）：3770-3772.

[11]徐悅，汪健，鄧曉玲，等.法舒地爾對大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷后HMGB1表達(dá)的影響[J].中國老年保健醫(yī)學(xué)，2013，11（3）：23-25.

[12]Okada T，Teranishi K，Chen Y，et al.Reversal of postischemic hypoperfusion by tempol:endothelial signal transduction mechanism[J].Neurochem Res，2012，37（4）：680-688.

[13]范鵬濤.鹽酸法舒地爾聯(lián)合辛伐他汀治療短暫性腦缺血發(fā)作療效觀察[J].中國社區(qū)醫(yī)師·醫(yī)學(xué)專業(yè)，2010，12（12）：26.

[14]Ishiquro M，Kawasaki K，Suzuki Y，et al.A Rho kinase(ROCK)inhibitor,fasudil,prevents matrix metalloproteinase-9-related hemorrhagic transformation in mice treated with tissue plasminogen activator[J].Neuroscience，2012， 220：302-312.

[15]梁燕，婁季宇，白宏英，等.法舒地爾對大鼠腦缺血再灌注后Rho激酶、Nogo-A表達(dá)的影響[J].中國實用神經(jīng)疾病雜志，2011，14（3）：27-29.

[16]陳美惠，劉安民，巢曉娟，等.Rho激酶抑制劑法舒地爾對中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病作用及其結(jié)構(gòu)改造的研究進(jìn)展[J].中國新藥雜志，2013，22（1）：59-67.

（收稿日期：2014-03-13本文編輯：李亞聰）

[基金項目] 廣東省惠州市科技立項項目（2013Y216）

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS 18.0軟件進(jìn)行分析，計量資料以x±s表示，采用方差分析，兩兩比較采用LSD法，相關(guān)性分析采用單因素回歸分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 3組大鼠腦組織功能及損傷面積的比較

腦損傷組的腦組織功能評分高于假手術(shù)組和法舒地爾組，腦組織損傷面積大于假手術(shù)組和法舒地爾組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）（表1）。

表13組大鼠腦組織功能及損傷面積的比較（x±s）

與腦損傷組比較，*P＜0.05

2.2 3組大鼠血液炎癥因子水平的比較

腦損傷組的IL-8、TNF-α水平高于假手術(shù)組和法舒地爾組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）（表2）。

表2 3組大鼠血液炎癥因子水平的比較（μg/L，x±s）

與腦損傷組比較，*P＜0.05

2.3 炎癥因子水平與腦組織功能評分及腦組織損傷面積的相關(guān)性

IL-8、TNF-α水平與腦組織功能評分及損傷面積呈正相關(guān)（P＜0.05）（表3）。

表3 炎癥因子水平與腦組織功能評分及腦組織損傷面積的相關(guān)性

3 討論

近年來，缺血性腦損傷的臨床發(fā)病率逐年升高，已成為危害人類生命安全和生存質(zhì)量的重要疾病，具有致死率和致殘率高、預(yù)后差的特點[6-7]。臨床上，引起腦組織缺血性損害的疾病包括高血壓、動脈粥樣硬化、腦血管栓塞、痙攣等，可在造成腦血管狹窄、腦組織血管減少或中斷的基礎(chǔ)上引起神經(jīng)功能損害[8]，并伴發(fā)頭痛、嘔吐、感覺和運動功能受損等臨床癥狀及體征[9]。多數(shù)患者在疾病的發(fā)生、發(fā)展過程中，可持續(xù)存在腦組織的慢性低灌注損傷[10]，因此，針對該情況探尋有效的治療方法，對臨床治療工作具有指導(dǎo)意義。

Rho激酶作為小G蛋白Rho下游的重要底物之一，能通過磷酸化的方式激活下游信號通路，并參與炎癥細(xì)胞的黏附、遷移及炎癥因子的合成和釋放[11-12]。法舒地爾作為一種Rho激酶抑制劑，能通過抑制Rho激酶的生物學(xué)作用來發(fā)揮腦組織保護(hù)作用[13]。本研究通過建立大鼠腦組織慢性低灌注損傷模型并給予法舒地爾治療，分析Rho激酶抑制劑對腦組織的保護(hù)作用。研究結(jié)果顯示，腦損傷組的腦組織功能評分高于假手術(shù)組和法舒地爾組，腦組織損傷面積大于假手術(shù)組和法舒地爾組，說明模型老鼠建立成功，腦損傷組術(shù)后的腦組織功能下降、梗死面積增加；法舒地爾治療能有效保護(hù)腦組織，改善術(shù)后腦組織功能，減小梗死面積。

目前研究認(rèn)為，在腦組織慢性低灌注損傷過程中，炎癥反應(yīng)發(fā)揮了重要作用[14]。中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等炎癥細(xì)胞向腦組織內(nèi)大量募集并產(chǎn)生TNF-α及IL-1、IL-2、IL-6等炎癥因子，直接介導(dǎo)腦組織損傷[15-16]。本研究結(jié)果顯示，腦損傷組的IL-8、TNF-α水平高于假手術(shù)組和法舒地爾組，說明法舒地爾治療能有效控制腦組織損傷后的炎癥水平。

本研究結(jié)果顯示，IL-8、TNF-α水平與腦組織功能評分、腦組織損傷面積呈正相關(guān)，說明炎癥因子水平越高、腦組織損傷越嚴(yán)重，兩者具有較好的相關(guān)性，也能反映法舒地爾可通過控制炎癥反應(yīng)水平來改善腦組織功能。

綜上所述，Rho激酶抑制劑能控制炎癥反應(yīng)水平、改善慢性低灌注損傷的腦組織功能，具有積極的應(yīng)用價值。

[參考文獻(xiàn)]

[1]于宗良，陳樂，楊向軍.缺血后適應(yīng)聯(lián)用粒細(xì)胞集落刺激因子對心肌急性缺血再灌注損傷的保護(hù)作用[J].東南大學(xué)學(xué)報·醫(yī)學(xué)版，2013，32（1）；51-55.

[2]楊坤軍.急性腦梗死神經(jīng)功能惡化的研究進(jìn)展[J].醫(yī)學(xué)綜述，2010，16（20）；3098-3011.

[3]Longa EZ，Weinstein PR，Carlson S，et al.Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats[J].Stroke，1989，20（1）：84-91.

[4]馮治國，何潤源，侯玉立.法舒地爾治療缺血性腦卒中的系統(tǒng)評價[J].中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志，2012，10（4）：424-427.

[5]王建軍.大腸癌血清腫瘤壞死因子α，白細(xì)胞介素8和可溶性白細(xì)胞介素2受體水平的檢測及其臨床意義[J].中國腫瘤臨床與康復(fù)，2012，19（3）：241-243.

[6]涂獻(xiàn)坤，楊衛(wèi)忠，石松生.炎癥反應(yīng)介導(dǎo)缺血性腦損傷的機制研究進(jìn)展[J].中華神經(jīng)醫(yī)學(xué)雜志，2011，10（3）：322-324.

[7]孫海蛟.法舒地爾配合電針療法治療急性缺血性腦血管病的臨床觀察[J].中國醫(yī)學(xué)創(chuàng)新，2012，9（36）：137-138.

[8]Petrinovic MM，Duncan CS，Bourikas D，et al.Neuronal Nogo-A regulates neurite fasciculation,branching and extension in the developing nervous system[J].Development，2010， 137（15）：2539-2550.

[9]李雙鳳，王丹，王亞平，等.MPTP參與硫化氫對大鼠心肌缺血再灌注損傷的延遲性保護(hù)作用[J].東南大學(xué)學(xué)報·醫(yī)學(xué)版，2010，29（6）：648-651.

[10]王莉.奧扎格雷聯(lián)合法舒地爾對短暫性腦缺血發(fā)作患者腦氧代謝及炎性指標(biāo)的影響研究[J].吉林醫(yī)學(xué)，2013， 34（19）：3770-3772.

[11]徐悅，汪健，鄧曉玲，等.法舒地爾對大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷后HMGB1表達(dá)的影響[J].中國老年保健醫(yī)學(xué)，2013，11（3）：23-25.

[12]Okada T，Teranishi K，Chen Y，et al.Reversal of postischemic hypoperfusion by tempol:endothelial signal transduction mechanism[J].Neurochem Res，2012，37（4）：680-688.

[13]范鵬濤.鹽酸法舒地爾聯(lián)合辛伐他汀治療短暫性腦缺血發(fā)作療效觀察[J].中國社區(qū)醫(yī)師·醫(yī)學(xué)專業(yè)，2010，12（12）：26.

[14]Ishiquro M，Kawasaki K，Suzuki Y，et al.A Rho kinase(ROCK)inhibitor,fasudil,prevents matrix metalloproteinase-9-related hemorrhagic transformation in mice treated with tissue plasminogen activator[J].Neuroscience，2012， 220：302-312.

[15]梁燕，婁季宇，白宏英，等.法舒地爾對大鼠腦缺血再灌注后Rho激酶、Nogo-A表達(dá)的影響[J].中國實用神經(jīng)疾病雜志，2011，14（3）：27-29.

[16]陳美惠，劉安民，巢曉娟，等.Rho激酶抑制劑法舒地爾對中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病作用及其結(jié)構(gòu)改造的研究進(jìn)展[J].中國新藥雜志，2013，22（1）：59-67.

（收稿日期：2014-03-13本文編輯：李亞聰）

[基金項目] 廣東省惠州市科技立項項目（2013Y216）

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS 18.0軟件進(jìn)行分析，計量資料以x±s表示，采用方差分析，兩兩比較采用LSD法，相關(guān)性分析采用單因素回歸分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 3組大鼠腦組織功能及損傷面積的比較

腦損傷組的腦組織功能評分高于假手術(shù)組和法舒地爾組，腦組織損傷面積大于假手術(shù)組和法舒地爾組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）（表1）。

表13組大鼠腦組織功能及損傷面積的比較（x±s）

與腦損傷組比較，*P＜0.05

2.2 3組大鼠血液炎癥因子水平的比較

腦損傷組的IL-8、TNF-α水平高于假手術(shù)組和法舒地爾組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）（表2）。

表2 3組大鼠血液炎癥因子水平的比較（μg/L，x±s）

與腦損傷組比較，*P＜0.05

2.3 炎癥因子水平與腦組織功能評分及腦組織損傷面積的相關(guān)性

IL-8、TNF-α水平與腦組織功能評分及損傷面積呈正相關(guān)（P＜0.05）（表3）。

表3 炎癥因子水平與腦組織功能評分及腦組織損傷面積的相關(guān)性

3 討論

近年來，缺血性腦損傷的臨床發(fā)病率逐年升高，已成為危害人類生命安全和生存質(zhì)量的重要疾病，具有致死率和致殘率高、預(yù)后差的特點[6-7]。臨床上，引起腦組織缺血性損害的疾病包括高血壓、動脈粥樣硬化、腦血管栓塞、痙攣等，可在造成腦血管狹窄、腦組織血管減少或中斷的基礎(chǔ)上引起神經(jīng)功能損害[8]，并伴發(fā)頭痛、嘔吐、感覺和運動功能受損等臨床癥狀及體征[9]。多數(shù)患者在疾病的發(fā)生、發(fā)展過程中，可持續(xù)存在腦組織的慢性低灌注損傷[10]，因此，針對該情況探尋有效的治療方法，對臨床治療工作具有指導(dǎo)意義。

Rho激酶作為小G蛋白Rho下游的重要底物之一，能通過磷酸化的方式激活下游信號通路，并參與炎癥細(xì)胞的黏附、遷移及炎癥因子的合成和釋放[11-12]。法舒地爾作為一種Rho激酶抑制劑，能通過抑制Rho激酶的生物學(xué)作用來發(fā)揮腦組織保護(hù)作用[13]。本研究通過建立大鼠腦組織慢性低灌注損傷模型并給予法舒地爾治療，分析Rho激酶抑制劑對腦組織的保護(hù)作用。研究結(jié)果顯示，腦損傷組的腦組織功能評分高于假手術(shù)組和法舒地爾組，腦組織損傷面積大于假手術(shù)組和法舒地爾組，說明模型老鼠建立成功，腦損傷組術(shù)后的腦組織功能下降、梗死面積增加；法舒地爾治療能有效保護(hù)腦組織，改善術(shù)后腦組織功能，減小梗死面積。

目前研究認(rèn)為，在腦組織慢性低灌注損傷過程中，炎癥反應(yīng)發(fā)揮了重要作用[14]。中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等炎癥細(xì)胞向腦組織內(nèi)大量募集并產(chǎn)生TNF-α及IL-1、IL-2、IL-6等炎癥因子，直接介導(dǎo)腦組織損傷[15-16]。本研究結(jié)果顯示，腦損傷組的IL-8、TNF-α水平高于假手術(shù)組和法舒地爾組，說明法舒地爾治療能有效控制腦組織損傷后的炎癥水平。

本研究結(jié)果顯示，IL-8、TNF-α水平與腦組織功能評分、腦組織損傷面積呈正相關(guān)，說明炎癥因子水平越高、腦組織損傷越嚴(yán)重，兩者具有較好的相關(guān)性，也能反映法舒地爾可通過控制炎癥反應(yīng)水平來改善腦組織功能。

綜上所述，Rho激酶抑制劑能控制炎癥反應(yīng)水平、改善慢性低灌注損傷的腦組織功能，具有積極的應(yīng)用價值。

[參考文獻(xiàn)]

[1]于宗良，陳樂，楊向軍.缺血后適應(yīng)聯(lián)用粒細(xì)胞集落刺激因子對心肌急性缺血再灌注損傷的保護(hù)作用[J].東南大學(xué)學(xué)報·醫(yī)學(xué)版，2013，32（1）；51-55.

[2]楊坤軍.急性腦梗死神經(jīng)功能惡化的研究進(jìn)展[J].醫(yī)學(xué)綜述，2010，16（20）；3098-3011.

[3]Longa EZ，Weinstein PR，Carlson S，et al.Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats[J].Stroke，1989，20（1）：84-91.

[4]馮治國，何潤源，侯玉立.法舒地爾治療缺血性腦卒中的系統(tǒng)評價[J].中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志，2012，10（4）：424-427.

[5]王建軍.大腸癌血清腫瘤壞死因子α，白細(xì)胞介素8和可溶性白細(xì)胞介素2受體水平的檢測及其臨床意義[J].中國腫瘤臨床與康復(fù)，2012，19（3）：241-243.

[6]涂獻(xiàn)坤，楊衛(wèi)忠，石松生.炎癥反應(yīng)介導(dǎo)缺血性腦損傷的機制研究進(jìn)展[J].中華神經(jīng)醫(yī)學(xué)雜志，2011，10（3）：322-324.

[7]孫海蛟.法舒地爾配合電針療法治療急性缺血性腦血管病的臨床觀察[J].中國醫(yī)學(xué)創(chuàng)新，2012，9（36）：137-138.

[8]Petrinovic MM，Duncan CS，Bourikas D，et al.Neuronal Nogo-A regulates neurite fasciculation,branching and extension in the developing nervous system[J].Development，2010， 137（15）：2539-2550.

[9]李雙鳳，王丹，王亞平，等.MPTP參與硫化氫對大鼠心肌缺血再灌注損傷的延遲性保護(hù)作用[J].東南大學(xué)學(xué)報·醫(yī)學(xué)版，2010，29（6）：648-651.

[10]王莉.奧扎格雷聯(lián)合法舒地爾對短暫性腦缺血發(fā)作患者腦氧代謝及炎性指標(biāo)的影響研究[J].吉林醫(yī)學(xué)，2013， 34（19）：3770-3772.

[11]徐悅，汪健，鄧曉玲，等.法舒地爾對大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷后HMGB1表達(dá)的影響[J].中國老年保健醫(yī)學(xué)，2013，11（3）：23-25.

[12]Okada T，Teranishi K，Chen Y，et al.Reversal of postischemic hypoperfusion by tempol:endothelial signal transduction mechanism[J].Neurochem Res，2012，37（4）：680-688.

[13]范鵬濤.鹽酸法舒地爾聯(lián)合辛伐他汀治療短暫性腦缺血發(fā)作療效觀察[J].中國社區(qū)醫(yī)師·醫(yī)學(xué)專業(yè)，2010，12（12）：26.

[14]Ishiquro M，Kawasaki K，Suzuki Y，et al.A Rho kinase(ROCK)inhibitor,fasudil,prevents matrix metalloproteinase-9-related hemorrhagic transformation in mice treated with tissue plasminogen activator[J].Neuroscience，2012， 220：302-312.

[15]梁燕，婁季宇，白宏英，等.法舒地爾對大鼠腦缺血再灌注后Rho激酶、Nogo-A表達(dá)的影響[J].中國實用神經(jīng)疾病雜志，2011，14（3）：27-29.

[16]陳美惠，劉安民，巢曉娟，等.Rho激酶抑制劑法舒地爾對中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病作用及其結(jié)構(gòu)改造的研究進(jìn)展[J].中國新藥雜志，2013，22（1）：59-67.

（收稿日期：2014-03-13本文編輯：李亞聰）

[基金項目] 廣東省惠州市科技立項項目（2013Y216）