辛 穎

子宮內(nèi)膜腺癌中熱休克蛋白70、90的表達及其臨床意義

辛 穎

目的 分析子宮內(nèi)膜腺癌組織中的熱休克蛋白70、90的表達和其臨床意義。方法 使用免疫組化Envision法和圖像分析儀，檢測正常子宮內(nèi)膜、增生過長子宮內(nèi)膜以及子宮內(nèi)膜腺癌中的熱休克蛋白70、90的表達。結(jié)果 子宮內(nèi)膜腺癌中的熱休克蛋白70表達灰度值為（209．05±5．35），比正常內(nèi)膜（145．20±4．08）明顯更高，差異顯著，具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0．05）。其與增生過長內(nèi)膜（148．58±4．22）相比也有顯著性差異（P＜0．05）；子宮內(nèi)膜腺癌中熱休克蛋白90其表達灰度值為（166．87±5．70），與正常子宮內(nèi)膜（208．56±3．13）和增生過長子宮內(nèi)膜（249．72±4．62）差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0．05）。結(jié)論 熱休克蛋白70、90與子宮內(nèi)膜腺癌的發(fā)生有密切關(guān)系，并對子宮內(nèi)膜腺癌的診斷及判斷腫瘤的惡性程度以及治療有參考價值。

子宮內(nèi)膜腺癌；熱休克蛋白；免疫組織化學(xué)

子宮內(nèi)膜癌是發(fā)生于子宮內(nèi)膜的一組上皮性惡性腫瘤，以來源于子宮內(nèi)膜腺體的腺癌最常見[1]。為女生生殖道三大惡性腫瘤之一，出現(xiàn)概率最高的年齡段是58～61歲，分為雌激素依賴性和非雌激素依賴性兩種發(fā)病機制[2]。但是關(guān)于子宮內(nèi)膜病變的分子病理學(xué)機制的了解還非常少。熱休克蛋白體系中熱休克蛋白(heat shock protein， HSP) 70、90與腫瘤的發(fā)生具有相關(guān)性。本次研究中使用免疫組織化學(xué)法以及圖像分析儀對子宮內(nèi)膜腺癌組織當(dāng)中的熱休克蛋白70、90表達方式以及臨床意義進行了探討。

1 資料與方法

1.1 一般資料 隨機選取大連大學(xué)附屬中山醫(yī)院2013年10月～2014年5月入院進行子宮切除或者內(nèi)膜刮除的正常子宮內(nèi)膜、增生過長子宮內(nèi)膜與子宮內(nèi)膜腺癌標(biāo)本的蠟塊，正常內(nèi)膜50例，年齡34～63歲，平均年齡（54.00±5.39）歲；增生過長內(nèi)膜55例，平均年齡（52.00±6.77）歲，子宮內(nèi)膜腺癌45例，年齡33～64歲，平均年齡（53.00±6.80）歲。所有研究標(biāo)本全部經(jīng)過HE染色，經(jīng)過病理學(xué)檢測確診，子宮內(nèi)膜腺癌患者在手術(shù)前均未經(jīng)化療，所有患者手術(shù)前半年均未使用過雌激素藥物，也無合并任何其他惡性腫瘤。

1.2 方法 所有檢測標(biāo)本當(dāng)中的熱休克蛋白70、90表達，全部使用Envision免疫組化染色法做檢測，把石蠟切片經(jīng)過二甲苯做脫蠟操作、梯度酒精入水和PSB沖洗之后，將其放在微波爐中加入0.01 mol/L的枸櫞酸鈉緩沖液做抗原修復(fù)操作，每次持續(xù)時間5 min，一共進行2次。待其自然冷卻之后，再另外加入30 mL/L的過氧化氫放置在常溫環(huán)境中0.5 h，封閉內(nèi)源性過氧化物酶。之后再使用20 mL/L的正常指標(biāo)山羊血清將非特異性抗原封閉10 min。

使用濾紙將血清吸去，各加入兔抗人熱休克蛋白70、90抗體her山羊抗兔IgG，之后使用DAB做顯色，同時還有蘇水精復(fù)染、脫水、透明以及樹膠封片等。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 結(jié)果選擇LeicaQ 500 Mc當(dāng)成圖像分析儀，對其做半定量操作分析，另外一種灰度值對結(jié)果的差異進行判定。本組數(shù)據(jù)采用SPSS 18.0統(tǒng)計學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進行處理與分析，正態(tài)計量資料結(jié)果用“x±s”表示，組間比較采用t檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

子宮內(nèi)膜腺癌中，HSP 70的表達相比正常子宮內(nèi)膜以及增生過長子宮內(nèi)膜明顯更強，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；子宮內(nèi)膜腺癌中HSP 90表達和正常內(nèi)膜以及增生過長子宮內(nèi)膜相比明顯減弱，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05，見表1）。

表1 不同子宮內(nèi)膜中熱休克蛋白70、90的表達

3 討論

熱休克蛋白是機體細胞在一些理化因素刺激后高效表達的一組蛋白質(zhì)，又稱為應(yīng)激蛋白(stress protein，CSP)或分子伴侶(Chaperones)。HSP是生物細胞（包括原核細胞及真核細胞）在受熱、生物應(yīng)激、理化因素等應(yīng)激原刺激后，發(fā)生熱休克反應(yīng)時所產(chǎn)生的一類在生物進化中最保守并由熱休克基因編碼的伴隨細胞蛋白。因最先發(fā)現(xiàn)于果蠅唾液腺的熱應(yīng)激反應(yīng)中而得名?，F(xiàn)在已經(jīng)有研究結(jié)果顯示，熱休克蛋白和腫瘤的出現(xiàn)以及腫瘤細胞的增殖和調(diào)亡有密切聯(lián)系[3-4]。熱休克蛋白70是進化上高度保守的一種的蛋白質(zhì)，具有細胞保護及抗細胞凋亡功能，并參與免疫調(diào)節(jié)。熱休克蛋白90參與細胞中眾多信號蛋白的構(gòu)象成熟和功能穩(wěn)定的調(diào)控，而這些信號蛋白的過度表達或突變能促進腫瘤細胞的增殖及存活。

子宮內(nèi)膜腺癌中熱休克蛋白70的表達對于腫瘤細胞的損傷保護性明顯，內(nèi)膜腺癌組織中的熱休克蛋白90表達有明確的抗腫瘤活性，并與腫瘤細胞有高親和力，可選擇性地殺傷腫瘤細胞。研究表明，當(dāng)子宮內(nèi)膜腺癌中的熱休克蛋白HSP 70表達越高時，相應(yīng)的熱休克蛋白90表達就會越弱，其細胞分化程度也更低，臨床表現(xiàn)的惡性程度也相應(yīng)的越高[5]。所以熱休克蛋白70、90可以作為對子宮內(nèi)膜腺癌的診斷及判斷腫瘤的惡性程度的一項重要生物學(xué)指標(biāo)。對控制熱休克蛋白70、90的表達能夠有效的抑制腫瘤細胞增生和促進腫瘤細胞的凋亡，將其和腫瘤化療藥物結(jié)合能夠有效提升子宮內(nèi)膜腺癌的臨床治療效果[6]。

本研究中，正常子宮內(nèi)膜和增生過長子宮內(nèi)膜中均有熱休克蛋白70、90表達，與前期的報道一致[8]，提示熱休克蛋白70、90對維持正常子宮內(nèi)膜的生長和功能具有積極作用。與正常子宮內(nèi)膜和增生過長子宮內(nèi)膜相比，熱休克蛋白70在子宮內(nèi)膜腺癌中表達量增加，熱休克蛋白90表達量下降，提示熱休克蛋白70、90表達對內(nèi)膜腺癌細胞的生長的作用不同。目前有研究表明，熱休克蛋白90在膽囊癌及乳腺癌組織中高表達[7-8]，但本研究中，子宮內(nèi)膜腺癌組織中熱休克蛋白90表現(xiàn)為低表達，其機制仍有待進一步研究。

本次研究結(jié)果顯示，在子宮內(nèi)膜腺癌中，熱休克蛋白70高表達，而熱休克蛋白90低表達。說明熱休克蛋白70、90與子宮內(nèi)膜腺癌的發(fā)生有密切聯(lián)系，對子宮內(nèi)膜腺癌的診斷、判斷腫瘤惡性程度以及治療有一定參考價值。在今后的研究中，可以針對熱休克蛋白70、90表達與子宮內(nèi)膜腺癌的臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及預(yù)后的相關(guān)性進行進一步分析。

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10.3969/j.issn.1009-4393.2014.35.046

遼寧 116001 大連大學(xué)附屬中山醫(yī)院（辛穎）