馮鎖民，宋 琳，翟西峰，張存勞，李惠民，王 寧，徐 璐

(1 西安醫(yī)學院 藥學院，西安 710021；2 商洛職業(yè)技術學院，商州 726000)

化瘀止痛散是由血竭、三七、冰片、乳香、沒藥、紅花、兒茶等十多味中藥經(jīng)粉碎混合制成的正在使用的醫(yī)院制劑，具有活血化瘀、止痛止血的作用.臨床用于跌打損傷、血瘀止痛、外傷出血、瘡瘍不斂等疾病的治療.為了加強該制劑的質量控制，按照新的醫(yī)院制劑再注冊管理辦法要求，我們重點對處方中的藥材血竭、冰片、三七進行了薄層色譜鑒別方法的研究.

1 實驗部分

1.1 儀器與材料

電子天平(ALC-210.4,賽多利斯科學儀器(北京)有限公司)；超聲波清洗器(KQ5200E型，昆山市超聲儀器有限公司)；三用紫外分析儀(ZF-7型，上海嘉鵬科技有限公司)；旋轉蒸發(fā)器(RE-2000A，鞏義市予華儀器有限責任公司)；電熱鼓風干燥箱(DHG-9140B，上海安亭科學儀器有限公司).

甲醇、乙酸乙酯、正丁醇、環(huán)己烷、乙醚、氨水(均為天津市東河紅巖試劑廠生產(chǎn)，AR)；硅膠G(青島海浪硅膠干燥劑廠，薄層層析用)；羧甲基纖維素鈉(上海山浦化工有限公司).

化瘀止痛散(規(guī)格：3g×6瓶，西安航天醫(yī)院制劑室生產(chǎn))；龍血竭(批號：090702，西雙版納藥業(yè)有限責任公司).三七皂苷R1(批號：110745-200617)、人參皂苷Rg1(批號：0703-200119),人參皂苷Re(批號：110754-200822)，以上對照品均由中國藥品生物制品檢定院提供.

1.2 方法與結果

1.2.1 化瘀止痛散中血竭的薄層鑒別

(1) 供試品溶液的制備.取化瘀止痛散粉末約3 g，加乙醚30 mL于帶塞錐形瓶中，密塞，振搖10min，濾過，作為供試品溶液.

(2) 對照藥材溶液的制備.取血竭對照藥材0.1g，制法同(1).

(3) 陰性對照液的制備.按化瘀止痛散處方,制備不含血竭的陰性對照3g，提取方法同(1).

(4) 薄層方法.照薄層色譜法(附錄Ⅵ B)[1]試驗，吸取供試品溶液、對照藥材溶液、陰性對照溶液各10 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇(99∶1)為展開劑[2]，飽和15 min，上行展開6 cm，取出，晾干.

(5) 薄層結果.化瘀止痛散中血竭的薄層色譜結果如圖1.從圖1可以看出，供試品色譜中,在與對照藥材色譜相應位置上分別顯粉紅色的斑點，陰性對照在相應位置無干擾斑點.

1 供試品;2 血竭對照藥材; 3 陰性對照圖1 化瘀止痛散中血竭的薄層色譜圖Fig.1 TLC of the Draconis Sanguis in Huayuzhitong Powders 1 sample; 2 draconis sanguis; 3 negative sample

1.2.2 化瘀止痛散中冰片的薄層鑒別

(1) 供試品溶液的制備.取化瘀止痛散粉末約3 g，加乙醚30 mL于帶塞錐形瓶中；密塞，振搖10min，濾過，作為供試品溶液.

(2) 對照藥材溶液的制備.取冰片對照藥材0.1g，方法同(1).

(3) 顯色劑的配制.取5 g香草醛，用10%硫酸乙醇(取硫酸2.85 mL，加乙醇稀釋至50 mL,即得)100 mL溶解[2].

(4) 薄層方法.照薄層色譜法(附錄Ⅵ B)[1]試驗，吸取供試品溶液、對照藥材溶液各10 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯(20∶1)為展開劑[3]，飽和15 min，上行展開6 cm，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸乙醇溶液,吹干.

(5) 薄層結果.化瘀止痛散中冰片的薄層結果如圖2，從圖中可以看出供試品與對照品色譜相應位置上顯相同顏色的熒光斑點，陰性對照無干擾.

1 供試品;2 冰片對照藥材;3 陰性對照圖2 化瘀止痛散中冰片的薄層色譜圖Fig.2 TLC of the Borneolum Syntheticum in Huayuzhitong Powders 1 sample; 2 borneolum syntheticum; 3 negative sample

1.2.3 化瘀止痛散中三七的薄層鑒別

(1) 供試品溶液的制備[4-6].取化瘀止痛散粉末3 g，加氯仿30 mL，超聲處理30 min，濾過，藥渣揮去氯仿，加30 mL甲醇，超聲處理30 min，濾過，濾液蒸干，加水20 mL溶解，轉移至分液漏斗中，加水飽和的正丁醇溶液30 mL萃取，取正丁醇層，加氨試液洗三次(20 mL，15 mL，10 mL)，取正丁醇層蒸干，殘渣加水5 mL使溶解，過D-101型大孔樹脂，靜態(tài)吸附1 h，用純化水洗脫至無顏色，棄去洗脫液.再用40%乙醇洗脫至無顏色，收集40%乙醇洗脫液，蒸干，殘渣加2 mL甲醇溶解，作為供試品溶液.

(2) 對照藥材溶液的制備.取三七對照藥材0.5 g,加水5滴，拌勻，再加以水飽和的正丁醇5 mL，密塞，振搖10 min，放置2 h，濾過，濾液加三倍量以正丁醇飽和的水，搖勻，放置使分層，取正丁醇層，蒸干，殘渣加甲醇2 mL使溶解，作為對照藥材溶液.

(3) 陰性對照溶液的制備.取按化瘀止痛散處方制備的不含三七的陰性對照3g，制備方法同(1).

(4) 對照品溶液的制備.取人參皂苷Rg1及三七皂苷R1對照品，加甲醇各制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作為對照品溶液.

(5) 顯色劑的配制.取1 mL硫酸溶液,緩緩加入9 mL純化水中,即得.

(6) 薄層色譜法.照薄層色譜法(附錄Ⅵ B)[1]試驗，吸取上述6種溶液各1 μL ，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-水(65∶35∶10)10 ℃以下放置12 h后的下層溶液為展開劑，飽和15 min，上行展開8 cm，取出，晾干，噴以上述顯色劑，在105 ℃加熱至斑點顯色清晰.

(7) 薄層結果.化瘀止痛散中三七的薄層色譜如圖3.從圖3可以看出供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應位置上分別顯相同顏色的斑點，陰性對照在相應位置無斑點干擾.

1 供試品;2 三七皂苷R1;3 人參皂苷Rg1;4 三七對照藥材;5 陰性對照 圖3 化瘀止痛散中三七的薄層鑒別圖Fig.3 TLC of the Panax Notoginseng in Huayuzhitong Powders1 sample;2 notoginseng saponins R1; 3 ginsenosides Rg1;4 Panax Notoginseng; 5 negative sample

2 討論

2.1 化瘀止痛散中血竭的展開系統(tǒng)和點樣方式的選擇

為了獲得理想的薄層效果，對化瘀止痛散中的血竭的點樣方式分別按表1進行了兩種點樣方式的比較，結合薄層結果，最終篩選出條帶狀點樣為化瘀止痛散中血竭的點樣方式.

同時對化瘀止痛散中血竭的薄層展開溶劑系統(tǒng)分別按表1進行了實驗，從3種展開劑的薄層結果中可以看出以氯仿-甲醇(99∶1)做為展開劑展開后，供試品在對照品相應位置上斑點清晰可見，無干擾，因此最終選用氯仿-甲醇(99∶1)作為化瘀止痛散中血竭的薄層展開系統(tǒng).

2.2 化瘀止痛散中三七樣品處理方法選擇

為了獲得理想的薄層效果，對化瘀止痛散中三七樣品的處理方法分別按表2進行3種方法的比較，結合薄層結果最終選出正文方法1.2.3中(1)為化瘀止痛散中三七樣品的最佳處理方法.該方法制得的供試品溶液薄層斑點圓整，清晰，分離度好.

表1 化瘀止痛散中血竭的展開系統(tǒng)和點樣方式選擇Tab.1 selection developing system and sample mode of draconis sanguis

表2 化瘀止痛散中三七樣品處理方法的選擇

3 結論

本實驗所用的化瘀止痛散由于藥味較多，相互干擾的因素較多，經(jīng)多次試驗，試用了多種供試品制備方法和展開系統(tǒng)，摸索出了化瘀止痛散中血竭、三七、冰片專屬性較高的薄層鑒別方法，該方法簡便，專屬性強、重現(xiàn)性好，可用于化瘀止痛散的定性質量控制.

參 考 文 獻

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[S].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010:附錄34，133,136,11.

[2] 中華人民共和國衛(wèi)生部藥典委員會.中藥薄層色譜彩色圖集[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,1993.

[3] 秦華珍,鄧家剛,陳 勇,等.黃龍肝脂消顆粒質量標準的實驗研究[J].中成藥, 2004,26(7): 535-538.

[4] 孟 瓊,陳治宇.三七總皂苷提取分離及分析方法研究進展[J].承德醫(yī)學院學報,2010,27(2):198-199.

[5] 許 梅,郭 敏.舒心絡膠囊薄層色譜定性鑒別研究[J].中國藥業(yè),2012,21(5):24-25.

[6] 于 建,陸繼偉,王 珂,等.復方丹參片和復方丹參顆粒中三七薄層色譜鑒別的研究[J].中國藥品標準,2012,13(4):249-251.