薛振文，應(yīng)國(guó)華，呂明亮，李伶俐，高鳳娟

(1.麗水市林業(yè)科學(xué)研究院，浙江 麗水 323000；2.麗水學(xué)院，浙江 麗水 323000)

紅汁乳菇與馬尾松幼苗外生菌根合成研究*

薛振文1，應(yīng)國(guó)華1，呂明亮1，李伶俐1，高鳳娟2**

(1.麗水市林業(yè)科學(xué)研究院，浙江 麗水 323000；2.麗水學(xué)院，浙江 麗水 323000)

采用液體菌劑打孔接種無(wú)菌苗的方法，以菌根感染率為評(píng)價(jià)指標(biāo)研究了液體菌劑不同接種量、不同季節(jié)接種、是否添加營(yíng)養(yǎng)物對(duì)接種效果的影響。結(jié)果表明，接種馬尾松無(wú)菌苗液體菌劑量為500 mL·箱-1～1 000 mL·箱-1的處理能生產(chǎn)出理想的菌根苗；在春季接種苗木效果比秋季更好；在打孔接種后澆撒營(yíng)養(yǎng)液菌根感染率明顯高于不澆營(yíng)養(yǎng)液的處理。

紅汁乳菇；馬尾松；液體菌劑；菌根合成；菌根感染率

紅汁乳菇LactariushatsudakeTanaka是一種外生菌根食用菌，屬于紅菇科、乳菇屬，其味道鮮美，營(yíng)養(yǎng)豐富，市場(chǎng)上十分走俏。在浙江西南部山區(qū)尤其是低山灌叢與針葉林區(qū)[1]有子實(shí)體自然分布，繁殖季節(jié)處于春秋兩季，產(chǎn)量受濕度、溫度和雨量等因素影響，當(dāng)?shù)剞r(nóng)民有采食并市場(chǎng)上交易的習(xí)慣。目前紅汁乳菇市場(chǎng)供應(yīng)全依賴(lài)于野生采集，由于過(guò)度采摘，導(dǎo)致產(chǎn)地自然資源破壞嚴(yán)重，產(chǎn)量逐漸減少。培育出高質(zhì)量菌根苗是實(shí)現(xiàn)紅汁乳菇人工栽培的基礎(chǔ)，筆者已經(jīng)掌握了培育低成本、高質(zhì)量的牛肝菌菌根苗技術(shù)，并成功人工栽培出褐環(huán)粘蓋牛肝菌[2]，應(yīng)用該套研究方法繼續(xù)對(duì)紅汁乳菇菌根苗的合成技術(shù)進(jìn)行研究，報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 供試菌種

紅汁乳菇菌種為麗水市林業(yè)科學(xué)研究院食用菌研究所在麗水采集、分離、保藏，編號(hào)L 5，經(jīng)中國(guó)林業(yè)科學(xué)研究院熱帶林業(yè)研究所梁俊峰博士分子鑒定為紅汁乳菇。取發(fā)酵培養(yǎng)好的液體種過(guò)濾菌球150 mL，加營(yíng)養(yǎng)液至500 mL，再加懸浮劑4 g，粉碎拌勻即制成菌劑。

1.2 供試苗木

以播種3個(gè)月后的馬尾松無(wú)菌苗為接種對(duì)象。育苗基質(zhì)為泥炭、珍珠巖、土，混合后高溫滅菌，裝入經(jīng)高錳酸鉀消毒過(guò)的育苗容器泡沫箱，每箱馬尾松無(wú)菌苗為200株左右。

1.3 液體菌劑不同接種量接種效果試驗(yàn)

液體菌劑接種量設(shè)250 mL·箱-1、500 mL·箱-1、 1 000 mL·箱-1、 1 500 mL·箱-1、 2 000 mL·箱-1五個(gè)處理，每個(gè)處理5個(gè)重復(fù)。在每個(gè)泡沫箱中打25個(gè)孔，倒入液體菌劑后澆 1 000 mL營(yíng)養(yǎng)液。接種9個(gè)月后檢查菌根發(fā)育情況。

1.4 添加營(yíng)養(yǎng)物影響菌根合成的試驗(yàn)

采用液體菌劑打孔接種法接種。接種量500 mL·箱-1，試驗(yàn)設(shè)接種后基質(zhì)表面澆 1 000 mL營(yíng)養(yǎng)液和不澆營(yíng)養(yǎng)液2個(gè)處理，每個(gè)處理5個(gè)重復(fù)。接種9個(gè)月后檢查菌根發(fā)育情況。

1.5 不同季節(jié)接種影響菌根合成的試驗(yàn)

試驗(yàn)接種季節(jié)設(shè)在春季3月25日、秋季10月18日，經(jīng)觀察這兩段時(shí)間平均氣溫相差不大。每個(gè)季節(jié)接種5箱，接種9個(gè)月后檢查菌根發(fā)育情況。

1.6 統(tǒng)計(jì)方法

將菌根感染的多少及強(qiáng)弱，按一定的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，以便分析其接種的效果。菌根感染的評(píng)價(jià)可以按株，也可按根段數(shù)來(lái)評(píng)價(jià)。

按株來(lái)計(jì)算，菌根感染率(P1)公式為：

P1=N1N×100%

式中：N1為感染菌根株數(shù)；N為統(tǒng)計(jì)總株數(shù)。

按根段數(shù)來(lái)計(jì)算，隨機(jī)抽取1株苗木，洗凈后將根切成長(zhǎng)2 cm根段后統(tǒng)計(jì)菌根侵染率。菌根侵染率(P2)公式為：

P2=n1n×100%

式中：n1為侵染菌根根段數(shù)；n為總根段數(shù)。

菌根侵染率標(biāo)準(zhǔn)可分為5級(jí)，1級(jí)菌根侵染率1%以下；2級(jí)菌根侵染率1%～20%；3級(jí)菌根侵染率21%～40%；4級(jí)菌根侵染率41%～60%；5級(jí)根侵染率61%以上。

2 結(jié)果與分析

2.1 液體菌劑不同接種量接種效果試驗(yàn)

每個(gè)處理分別隨機(jī)取100株苗木，根據(jù)以上菌根統(tǒng)計(jì)方法，統(tǒng)計(jì)菌根侵染情況，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 液體菌劑不同接種量接種效果研究

由表1可知，隨著接種菌劑量增加，感染菌根株樹(shù)比例也在增加，分別為57%、79%、92%、95%、98%。接種量超過(guò)500 mL·箱-1，感染菌根株樹(shù)比例超過(guò)80%，基本達(dá)到了菌根苗規(guī)?；a(chǎn)要求，是較合適的菌劑接種量。菌劑量超過(guò) 1 000 mL·箱-1，感染菌根株樹(shù)比例超過(guò)90%，接種效果理想，但菌劑量消耗較大。

從菌根侵染率標(biāo)準(zhǔn)不同分級(jí)的結(jié)果看，接種量為250 mL·箱-1，1級(jí)苗所占比例最大，為43%，無(wú)5級(jí)苗；接種量為500 mL·箱-1，2級(jí)和3級(jí)苗所占比例大；接種量為 1 000 mL·箱-1，4級(jí)苗所占比例高，為38%；接種量為 1 500 mL·箱-1以上，5級(jí)苗所占比例高，為54%以上。隨著接種量的增加，優(yōu)質(zhì)苗比例也在增加。

菌根侵染率是描述菌根感染多少或強(qiáng)弱的指標(biāo)，由表1可知，接種量為250 mL·箱-1的處理平均侵染率僅為18.73%，隨著接種量的增加，菌根平均侵染率也在增加，接種量為 2 000 mL·箱-1的處理，平均侵染率高達(dá)71.83%。

綜合結(jié)果，接種量為250 mL·箱-1的處理，菌根感染株數(shù)僅為57%，平均侵染率僅為18.73%，1級(jí)苗比例為43%，菌根合成效果不理想。隨著接種量的增加，感染菌根苗的比例增加，優(yōu)質(zhì)菌根苗比例也在增加。接種量為 2 000 mL·箱-1的處理，感染菌根苗的比例和優(yōu)質(zhì)菌根苗的比例最高，是最理想的菌劑接種量。

2.2 添加營(yíng)養(yǎng)物對(duì)菌根合成率的影響試驗(yàn)

每個(gè)處理分別隨機(jī)取100株苗木，根據(jù)以上菌根統(tǒng)計(jì)方法，統(tǒng)計(jì)菌根侵染情況，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 添加營(yíng)養(yǎng)物對(duì)菌根合成率的影響試驗(yàn)

由表2可知，接種菌劑后是否澆營(yíng)養(yǎng)液，感染菌根株數(shù)比例差異比較大，分別為79%和52%；平均侵染率差異也較大，分別為31.3%、16.87%。澆營(yíng)養(yǎng)液的處理，2級(jí)和3級(jí)苗所占比例大；不澆營(yíng)養(yǎng)液的處理，1級(jí)苗所占比例明顯較大，高達(dá)48%。綜合可知，澆營(yíng)養(yǎng)液的處理明顯好于不澆營(yíng)養(yǎng)液的處理。

2.3 不同季節(jié)接種對(duì)菌根合成率的影響

每個(gè)處理分別隨機(jī)取100株苗木，根據(jù)以上菌根統(tǒng)計(jì)方法，統(tǒng)計(jì)菌根侵染情況，結(jié)果如表3。

表3 同季節(jié)接種對(duì)菌根合成率的影響研究

由表3可知，在春季和秋季接種，感染菌根株樹(shù)比例相差不多，分別為90%和85%，春季接種菌根感染株數(shù)略好。

從菌根侵染率苗木分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)結(jié)果看，春季接種，4級(jí)苗所占比例最大，為34%；3級(jí)以上的苗木占到81%。秋季接種，4級(jí)苗所占比例也是最大，為36%；3級(jí)以上的苗木占到69%。比較春季、秋季接種，春季接種3級(jí)以上的苗木占到的比例明顯高于秋季。

從菌根侵染率指標(biāo)可知，春季接種苗木平均侵染率為39.33%，秋季接種苗木平均侵染率為31.23%，采用春季接種苗木平均侵染率較高。

綜合比較，春季接種的苗木感染菌根的株數(shù)比例和苗木平均侵染率都高于秋季接種，其中3級(jí)以上的優(yōu)質(zhì)苗木比列也高于秋季接種。分析原因可能是春季氣溫開(kāi)始回升，菌絲體在基質(zhì)中能較長(zhǎng)時(shí)間的生長(zhǎng)和存活，增加了菌絲體與根系接觸的時(shí)間和機(jī)會(huì)，能更好地侵染苗木根系。而秋季接種，氣溫逐漸減低，苗木根系和菌絲向休眠的狀態(tài)發(fā)展，不利于菌絲侵染苗木根系。因而，采用春季接種苗木效果更好。

3 結(jié)論與討論

以出菇為目的的菌根苗培育方面，菌根感染率的高低可反應(yīng)出苗木質(zhì)量的好壞。菌根感染率越高，苗木質(zhì)量越好。根據(jù)本試驗(yàn)結(jié)果,液體菌劑接種量越多，感染菌根的機(jī)會(huì)越大，接種效果越好。但考慮到菌劑擴(kuò)繁周期長(zhǎng)和對(duì)菌根苗規(guī)格的要求，筆者認(rèn)為接種菌劑量為500 mL·箱-1～1 000 mL·箱-1的處理，即能節(jié)省菌劑，又能生產(chǎn)出合格的菌根苗。當(dāng)然，根據(jù)對(duì)菌根苗規(guī)格的要求，可以增加菌劑的使用量。接種菌劑12個(gè)月后觀察發(fā)現(xiàn)，接種量少的處理菌根感染率和浸染強(qiáng)度都明顯好于接種9個(gè)月后菌根，證明在泡沫箱中培育的菌根菌能較長(zhǎng)時(shí)間存活或是已經(jīng)侵染的菌根菌能繼續(xù)侵染根系形成菌根。

澆營(yíng)養(yǎng)液的處理明顯好于不澆營(yíng)養(yǎng)液的處理，原因是接種菌劑后澆營(yíng)養(yǎng)液可為菌種在基質(zhì)中繼續(xù)生長(zhǎng)提供營(yíng)養(yǎng)，延長(zhǎng)了菌種在基質(zhì)中的生存時(shí)間，也為無(wú)菌苗根系與菌絲體充分接觸感染延長(zhǎng)了時(shí)間和增加了接觸的機(jī)會(huì)。

春季接種的苗木菌根感染率和侵染強(qiáng)度都高于秋季接種，其中3級(jí)以上的優(yōu)質(zhì)苗木比例也高于秋季接種。因而，采用春季接種苗木效果更好。

影響菌根合成的因素還有共生樹(shù)種選擇、菌根合成基質(zhì)、宿主苗齡和接種方式[3]、接種菌劑劑型、活力、培育溫度、光照等條件尚需進(jìn)一步研究。

[1]顧新偉，應(yīng)國(guó)華，宋小亞. 浙南山區(qū)大型真菌的主要生態(tài)系統(tǒng)及菌物分布[J]. 食藥用菌，2012，20(5)：275-277.

[2]應(yīng)國(guó)華，呂明亮，李伶俐，等. 褐環(huán)粘蓋牛肝菌人工栽培技術(shù)研究[J]. 中國(guó)食用菌，2009，28(5)：4-15.

[3]付紹春，譚琦，陳明杰，等. 美味牛肝菌與馬尾松幼苗無(wú)菌條件下的外生菌根合成[J]. 食用菌學(xué)報(bào)，2009，16(1)：31-36.

Studies on Mycorrhizal Formation ofPinusmassonianaInoculatedLactariushatsudake

XUE Zhen-wen1, YING Guo-hua1, LV Ming-liang1, LI Ling-li1, GAO Feng-juan2

(1.Lishui Forestry Research Institute in Zhejiang, Lishui Zhejiang 323000; 2.Lishui University, Lishui Zhejiang 323000)

The method of punching inoculating sterile seedlings of liquid culture were used, and mycorrhizal infection rate was used as evaluation index. The inoculation results affected by different inoculation quality, different inoculation season, adding nutritional substances or not. The results showed the liquid culture dose of 500 mL·box-1～1 000 mL·box-1inoculated onPinusmassonianasterile seedlings could produce ideal mycorrhizal seedlings. Seedlings inoculated in spring was better than that inoculated in autumnm. The mycorrhizal infection rate of spraying nutritional liquid after punching inoculation was much higher than the treatment which did not spray nutritional liquid.

Lactariushatsudake;Pinusmassoniana; Liquid culture; Mycorrhizal formation; Infective rate of the mycorrhiza

*項(xiàng)目來(lái)源：浙江省林業(yè)廳項(xiàng)目“紅汁乳菇菌根菌培育造林技術(shù)研究與示范”(2010SY06)；浙江省麗水市重點(diǎn)科技創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)“牛肝菌等菌根食用菌菌根苗生產(chǎn)關(guān)鍵技術(shù)研究”(2012cxtd06)。

薛振文(1980-)，男，工程師，主要從事食用菌、外生菌根的研究。

**通信作者：高鳳娟，研究方向?yàn)閳@林和園藝。E-mail: xzw102@163.com

2014-03-15

S646.9

A

1003-8310(2014)03-0018-02