張士剛

摘要：TCP蛋白家族是一類植物特有的轉(zhuǎn)錄因子家族，參與多種生理生化過程，具有重要的調(diào)控作用。本文利用生物信息學(xué)方法對(duì)蘋果TCP轉(zhuǎn)錄因子家族成員、基因分類、基因結(jié)構(gòu)、染色體定位、系統(tǒng)進(jìn)化關(guān)系和結(jié)構(gòu)域序列保守性進(jìn)行了預(yù)測(cè)和分析。結(jié)果表明，蘋果TCP基因家族包含52個(gè)成員，分為3類：Class Ⅰ、ClassⅡ和ClassⅢ；MdTCP蛋白含有115～612個(gè)氨基酸，等電點(diǎn)為5.41～10.65；除3號(hào)染色體外，其余16條染色體均有MdTCP基因分布，其中5號(hào)染色體最多，有7個(gè)。

關(guān)鍵詞：蘋果；TCP；轉(zhuǎn)錄因子；全基因組分析

中圖分類號(hào)：Q754文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)號(hào)：A文章編號(hào)：1001-4942（2014）05-0012-06

TEOSINTE BRANCHED1/CYCLOIDEA/PROLIFERATING CELL FACTOR1（簡(jiǎn)稱TCP）家族是一類植物特有的轉(zhuǎn)錄因子家族。最早發(fā)現(xiàn)的家族成員是玉米TB1（teosinte branched 1）基因，金魚草CYC（cycloidea）基因和水稻PCF1、PCF2基因，這4個(gè)基因編碼的蛋白都包含一段由約60個(gè)氨基酸組成的保守序列，該保守序列能形成一種非典型的螺旋-環(huán)-螺旋結(jié)構(gòu)（non-canonical basic-Helix-Loop-Helix structure）[1，2，3]。根據(jù)其代表成員TB1、CYC和PCFs的首字母縮寫，把能夠編碼這段保守氨基酸序列的基因命名為TCP基因，把這段保守的氨基酸序列命名為TCP結(jié)構(gòu)域[2]。TCP結(jié)構(gòu)域中的螺旋-環(huán)-螺旋區(qū)域（bHLH）含有兩個(gè)由保守的親水氨基酸構(gòu)成的中性螺旋結(jié)構(gòu)和一個(gè)負(fù)責(zé)連接兩個(gè)螺旋區(qū)域的環(huán)結(jié)構(gòu)。在第二個(gè)螺旋區(qū)域有一個(gè)特異的“LXXLL”基序，動(dòng)物bHLH蛋白的研究結(jié)果表明這段基序可以通過調(diào)控轉(zhuǎn)錄的共激活單元結(jié)合到核定位蛋白上[4]。TCP家族成員除了含有TCP結(jié)構(gòu)域外，還存在一個(gè)保守的R結(jié)構(gòu)域[5]，R結(jié)構(gòu)域并不是所有的TCP轉(zhuǎn)錄因子共有的，它富含精氨酸、賴氨酸和谷氨酸等極性氨基酸，可以形成一個(gè) 親水性的α螺旋[3]。

前人對(duì)CYC、TB1、PCFs和其他9條預(yù)測(cè)的擬南芥和玉米TCP基因進(jìn)行了進(jìn)化分析，結(jié)果表明，這12個(gè)基因可以被分為兩個(gè)亞家族，一個(gè)包含有CYC和TB1，命名為CYC/TB1亞家族；另一個(gè)包括PCFs，命名為PCF亞家族。其中TCP結(jié)構(gòu)域普遍存在于所有的TCP家族成員中，而R結(jié)構(gòu)域則特異存在于CYC/TB1亞家族的一些基因中[3]。對(duì)多種菊亞綱植物的TCP基因家族成員之間的進(jìn)化關(guān)系進(jìn)行聚類分析，表明TCP基因家族在各物種間的多樣化對(duì)其形態(tài)學(xué)上的進(jìn)化具有重要作用[6]。Yao等通過對(duì)擬南芥23個(gè)TCP基因及水稻22個(gè)TCP基因的進(jìn)化分析，將TCP家族分為三個(gè)亞家族：Class Ⅰ、Class Ⅱ和Class Ⅲ，同時(shí)對(duì)其結(jié)構(gòu)域進(jìn)行了序列比對(duì)，并分析了不同基因在不同組織中的表達(dá)模式[7]。

TCP家族轉(zhuǎn)錄因子主要在快速生長(zhǎng)的組織或器官中表達(dá)，與植物細(xì)胞的分化和發(fā)育有密切關(guān)系。玉米TB1基因影響側(cè)生分生組織的生長(zhǎng)和發(fā)育[1，8，9]；水稻TB1基因被認(rèn)為是水稻側(cè)枝發(fā)育的負(fù)調(diào)控元件[10]；擬南芥TCP16基因?qū)υ缙诨ǚ鄣陌l(fā)育有重要作用[11]。擬南芥TCP20基因能夠結(jié)合CYCB1的GCCCR元件，具有調(diào)控細(xì)胞分裂和生長(zhǎng)的作用[12]，可與AtTCP9基因?qū)剐缘卣{(diào)控?cái)M南芥葉片發(fā)育和茉莉酸代謝過程[13]。研究表明，擬南芥中的5個(gè)TCP基因：TCP2、TCP3、TCP4、TCP10和TCP24是microRNA 319a的靶基因，參與調(diào)控葉片的形態(tài)發(fā)生[14]。豆科模式植物百脈根中的LjCYC1和LjCYC3參與調(diào)控花分生組織的生長(zhǎng)發(fā)育過程，另一類豆科植物豌豆中的CYC類TCP基因也參與控制背腹軸向不同類型花瓣的發(fā)育[15，16，17]。

2010年8月，Velasco等在Nature Genetics上發(fā)表了關(guān)于‘金冠蘋果基因組測(cè)序工作的文章，標(biāo)志著蘋果全基因組序列的測(cè)定已經(jīng)完成[18]，這一成果將蘋果生物學(xué)研究帶入了嶄新的系統(tǒng)生物學(xué)時(shí)代，為研究者從全基因組水平對(duì)蘋果進(jìn)行研究奠定了基礎(chǔ)。蘋果RING finger、MAPK和MAPKK、MdWRKY轉(zhuǎn)錄因子及DREB轉(zhuǎn)錄因子家族基因已通過生物信息學(xué)的方法鑒定出來(lái)，并進(jìn)行了全基因組分析和基因功能預(yù)測(cè)[19～22]。目前TCP轉(zhuǎn)錄因子家族的研究主要集中在模式植物擬南芥、水稻和玉米中，蔬菜和果樹尤其是蘋果中的報(bào)道還非常少。本文從蘋果全基因組出發(fā)，利用生物信息學(xué)的方法，鑒定出蘋果全部的TCP轉(zhuǎn)錄因子，對(duì)其家族進(jìn)化關(guān)系及結(jié)構(gòu)域序列保守性進(jìn)行了系統(tǒng)預(yù)測(cè)和分析，以期為進(jìn)一步研究MdTCP基因的作用奠定一定的理論基礎(chǔ)。

1材料與方法

從蘋果功能基因組數(shù)據(jù)庫(kù)（http：//www.appplegene.org/）下載TCP轉(zhuǎn)錄因子家族序列；從GDR數(shù)據(jù)庫(kù)下載‘金冠蘋果全基因組序列，構(gòu)建本地Blast數(shù)據(jù)庫(kù)，以擬南芥TCP轉(zhuǎn)錄因子家族基因序列執(zhí)行本地Blast（1e-003）搜索[23]；合并兩部分結(jié)果，利用Perl程序篩選，去掉重復(fù)序列，所得結(jié)果再利用PFAM及NCBI-CDD工具進(jìn)行蛋白結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)，刪除不含TCP結(jié)構(gòu)域的基因。利用ExPASy Proteomics Server（http：//expasy.org/），對(duì)所有TCP基因編碼蛋白進(jìn)行分子量、等電點(diǎn)預(yù)測(cè)。

從GDR數(shù)據(jù)庫(kù)下載‘金冠蘋果基因組信息文件（assembly gff3 file），利用Perl程序選取TCP基因的染色體位置信息，并利用MapDraw工具進(jìn)行染色體定位作圖。

用MUSCLE進(jìn)行序列比對(duì)，選取TCP結(jié)構(gòu)域序列，再利用 MEGA5構(gòu)建進(jìn)化樹。進(jìn)化樹生成算法采用鄰接法（Neighbor-Joining，NJ），校驗(yàn)參數(shù)Bootstrap 重復(fù)1 000次[24]；基因結(jié)構(gòu)利用生物學(xué)軟件Gene Structure Display Server（GSDS，http：//gsds.cbi.pku.edu.cn/）分析獲得；保守性分析則采用DNAMAN生物學(xué)軟件進(jìn)行保守序列比對(duì)。

2結(jié)果與分析

2.1蘋果TCP轉(zhuǎn)錄因子家族成員的鑒定

利用生物信息學(xué)方法，從蘋果全基因組鑒定得到52個(gè)TCP轉(zhuǎn)錄因子家族成員，根據(jù)其系統(tǒng)進(jìn)化樹分析結(jié)果，對(duì)其進(jìn)行了系統(tǒng)編號(hào)。MdTCP對(duì)應(yīng)的基因編號(hào)、基因組登錄號(hào)、編碼序列長(zhǎng)度、外顯子數(shù)量、蛋白長(zhǎng)度、分子量、等電點(diǎn)、所在染色體位置和擬南芥同源基因等特征見表1。由表1可知，MdTCP蛋白長(zhǎng)度在115 aa（MdTCP50）～612 aa（MdTCP27）范圍內(nèi)，等電點(diǎn)在5.41（MdTCP32）～10.65之間（MdTCP3）。如圖1所示，有49個(gè)MdTCP基因存在于不同染色體上，其中5號(hào)染色體最多，有7個(gè)；3號(hào)染色體上沒有分布；其余染色體上各有1～5個(gè)MdTCP基因分布。另外有3個(gè)MdTCP基因MdTCP50、MdTCP51和MdTCP52未發(fā)現(xiàn)相應(yīng)的染色體定位信息。

2.2蘋果TCP轉(zhuǎn)錄因子家族系統(tǒng)進(jìn)化及基因結(jié)構(gòu)分析

如圖2所示，MdTCP基因的內(nèi)含子和外顯子數(shù)量表現(xiàn)出了較高的保守性，其中沒有內(nèi)含子的MdTCP基因有32個(gè)，占總數(shù)的61.5%；有1個(gè)內(nèi)含子的有9個(gè)，占17.3%；有2個(gè)內(nèi)含子的有7個(gè)，占13.5%；有3個(gè)和5個(gè)內(nèi)含子的MdTCP基因分別有2個(gè)，各占3.8%。

圖2蘋果TCP轉(zhuǎn)錄因子家族系統(tǒng)進(jìn)化樹和基因結(jié)構(gòu)分析

2.3蘋果與擬南芥TCP轉(zhuǎn)錄因子家族系統(tǒng)進(jìn)化及保守結(jié)構(gòu)域分析

進(jìn)化樹分析（圖3）表明，52個(gè)MdTCP轉(zhuǎn)錄因子可分為ClassⅠ、ClassⅡ和Class Ⅲ三類，分別包括22、4和26個(gè)，其中第二類數(shù)量較少，這與擬南芥和水稻中的規(guī)律是一致的[7]。前人研究表明，擬南芥中有24個(gè)TCP家族成員[7，25]，由圖3可知，不同的AtTCP轉(zhuǎn)錄因子與52個(gè)MdTCP轉(zhuǎn)錄因子有著不同的同源性，例如，AtTCP20與MdTCP22、MdTCP35、MdTCP47同源性較高，AtTCP9與MdTCP18同源性較高。對(duì)預(yù)測(cè)的52個(gè)蘋果TCP轉(zhuǎn)錄因子蛋白序列進(jìn)行保守結(jié)構(gòu)域序列比對(duì)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，三類蘋果TCP蛋白中均包含有TCP結(jié)構(gòu)域，即TCP轉(zhuǎn)錄因子的特征序列——bHLH結(jié)構(gòu)域（圖4）。

3討論與結(jié)論

隨著越來(lái)越多物種全基因組測(cè)序工作的完成，海量的基因組數(shù)據(jù)、信息擺在我們面前，如何從這些數(shù)據(jù)中找到我們所需要的部分成為亟待解決的難題。利用生物信息學(xué)方法對(duì)基因組數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，研究各個(gè)物種間的進(jìn)化關(guān)系和相互間的親緣關(guān)系，以及物種內(nèi)各基因家族成員的進(jìn)化關(guān)系，能夠?yàn)楹罄m(xù)基因功能的研究提供一定的借鑒。本文利用生物信息學(xué)方法，對(duì)蘋果基因組中的TCP轉(zhuǎn)錄因子進(jìn)行了鑒定與分析。以期為今后研究蘋果TCP轉(zhuǎn)錄因子的具體生理作用奠定一定的理論基礎(chǔ)。

TCP轉(zhuǎn)錄因子在植物中分布較廣，各物種間的分布數(shù)量存在一定差異。擬南芥TCP轉(zhuǎn)錄因子家族有24個(gè)成員，水稻有22個(gè)成員[7，25]，本研究鑒定了52個(gè)蘋果TCP家族成員。通過系統(tǒng)進(jìn)化分析發(fā)現(xiàn)，MdTCP22、MdTCP35、MdTCP47與AtTCP20的同源性較高，MdTCP18與AtTCP9的同源性較高，結(jié)合擬南芥研究結(jié)果，這些基因可能在蘋果生長(zhǎng)發(fā)育及代謝過程中起作用；而MdTCP8、MdTCP9、MdTCP10、MdTCP11、MdTCP25和MdTCP49與AtTCP2、AtTCP3、AtTCP4和AtTCP10的同源性較高，說明它們有可能作為microRNA的靶基因參與蘋果葉片的發(fā)育。借鑒擬南芥、水稻及其它物種中TCP轉(zhuǎn)錄因子在植物生長(zhǎng)發(fā)育和相關(guān)代謝過程中的功能研究，探索MdTCP轉(zhuǎn)錄因子在蘋果生長(zhǎng)發(fā)育尤其是葉片和側(cè)枝、某些激素代謝過程中的功能及其相互作用機(jī)制是今后蘋果相關(guān)研究的重點(diǎn)。

參考文獻(xiàn)：

[1]Doebley J， Stec A， Gustus C. Teosinte branched1 and the origin of maize： Evidence for epistasis and the evolution of dominance[J]. Genetics， 1995， 141（1）：333-346.

[2]Luo D， Carpenter R， Vincent C， et al. Origin of floral asymmetry in Antirrhinum[J]. Nature， 1996，383：794-799.

[3]Cubas P， Lauter N， Doebley J， et al. The TCP domain： A motif found in proteins regulating plant growth and development[J]. Plant Journal， 1999， 18（2）：215-222.

[4]Heery D M， Kalkhoven E， Hoare S， et al. A signature motif in transcriptional co-activators mediates binding to nuclear receptors[J]. Nature， 1997，387：733-736.

[5]Kosugi S， Ohashi Y. PCF1 and PCF2 specifically bind to cis elements in the rice proliferating cell nuclear antigen gene[J]. The Plant Cell， 1997，9（9）：1607-1619.

[6]Reeves P A， Olmstead R G. Evolution of the TCP gene family in Asteridae：cladistic and network approaches to understanding regulatory gene family diversification and its impact on morphological evolution[J]. Molecular Biology and Evolution， 2003， 20（12）：1997-2009.

[7]Yao X， Ma H， Wang J， et al. Genome-wide comparative analysis and expression pattern of TCP gene families in Arabidopsis thaliana and Oryza sativa[J].Journal of Integrative Plant Biology，2007， 49（6）： 885-897.

[8]Doebley J， Stec A， Hubbard L. The evolution of apical dominance in maize[J]. Nature， 1997，386：485-488.

[9]Wang R L， Stec A， Hey J， et al. The limits of selection during maize domestication[J]. Nature， 1999，398：236-239.

[10]Takeda T， Suwa Y， Suzuki M， et al. The OsTB1 gene negatively regulates lateral branching in rice[J]. Plant Journal， 2003， 33（3）：513-520.

[11]Takeda T， Amano K， Ohto M A， et al. RNA interference of the Arabidopsis putative transcription factor TCP16 gene results in abortion of early pollen development[J]. Plant Molecular Biology， 2006， 61（1/2）：165-177.

[12]Li C， Potuschak T， Colon-Carmona A， et al. Arabidopsis TCP20 links regulation of growth and cell division control pathways[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America， 2005， 102（36）：12978-12983.

[13]Danisman S， Van der Wal F， Dhondt S， et al. Arabidopsis class I and class II TCP transcription factors regulate jasmonic acid metabolism and leaf development antagonistically[J].Plantphysiology，2012，159（4）：1511-1523.

[14]Palatnik J F， Allen E， Wu X， et al. Control of leaf morphogenesis by microRNAs[J]. Nature， 2003， 425：257-263.

[15]李超. 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的豌豆花瓣瞬間表達(dá)系統(tǒng)的建立及利用該系統(tǒng)對(duì)百脈根TCP基因亞細(xì)胞定位的研究[D]. 上海：上海交通大學(xué)， 2009.

[16] Feng X， Zhao Z， Tian Z， et al. Control of petal shape and floral zygomorphy in Lotus japonicus[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America， 2006， 103 （13）：4970-44975.

[17] Wang Z， Luo Y， Li X， et al. Genetic control of floral zygomorphy in pea （Pisum sativum L.） [J]. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America， 2008， 105 （30）：10414-410419.

[18] Velasco R， Zharkikh A， Affourtit J， et al. The genome of the domesticated apple （Malus × domestica Borkh.） [J]. Nature Genetics， 2010， 42（10）：833-839.

[19] Li Y Z， Wu B J， Yu Y L， et al. Genome-wide analysis of the RING finger gene family in apple[J]. Molecular Genetics and Genomics， 2011， 286（1）：81-94.

[20]許瑞瑞， 張世忠， 曹慧， 等. 蘋果WRKY轉(zhuǎn)錄因子家族基因生物信息學(xué)分析[J].園藝學(xué)報(bào)， 2012， 39（10）：2249-2260.

[21]Zhao T， Liang D， Wang P， et al. Genome-wide analysis and expression profiling of the DREB transcription factor gene family in Malus under abiotic stress[J]. Molecular Genetics Genomics， 2012， 287（5）：423-436.

[22]Zhang S， Xu R， Luo X， et al. Genome-wide identification and expression analysis of MAPK and MAPKK gene family in Malus domestica[J].Gene， 2013， 531（2）：377-387.

[23]Mount D W. Using the basic local alignment search tool （BLAST） [J]. Cold Spring Harbor Protocols， 2007， doi： 10.1101/pdb.top17.

[24]Tamura K， Peterson D， Peterson N， et al. MEGA5： molecular evolutionary genetics analysis using maximum likelihood， evolutionary distance， and maximum parsimony methods[J]. Molecular Biology Evolution， 2011，28：2731-2739.

[25]Cubas P. Role of TCP genes in the evolution of morphological characters in angiosperms[M]//Cronk Q C B， Bateman R M， Hawkins J A， eds. Developmental Genetics and Plant Evolution. London：CRC Press， 2002：247-266.山 東 農(nóng) 業(yè) 科 學(xué)2014，46（5）：18～20，25Shandong Agricultural Sciences山 東 農(nóng) 業(yè) 科 學(xué)第46卷第5期王風(fēng)云，等：電子村務(wù)系統(tǒng)的設(shè)計(jì)與開發(fā)

[7]Yao X， Ma H， Wang J， et al. Genome-wide comparative analysis and expression pattern of TCP gene families in Arabidopsis thaliana and Oryza sativa[J].Journal of Integrative Plant Biology，2007， 49（6）： 885-897.

[8]Doebley J， Stec A， Hubbard L. The evolution of apical dominance in maize[J]. Nature， 1997，386：485-488.

[9]Wang R L， Stec A， Hey J， et al. The limits of selection during maize domestication[J]. Nature， 1999，398：236-239.

[10]Takeda T， Suwa Y， Suzuki M， et al. The OsTB1 gene negatively regulates lateral branching in rice[J]. Plant Journal， 2003， 33（3）：513-520.

[11]Takeda T， Amano K， Ohto M A， et al. RNA interference of the Arabidopsis putative transcription factor TCP16 gene results in abortion of early pollen development[J]. Plant Molecular Biology， 2006， 61（1/2）：165-177.

[12]Li C， Potuschak T， Colon-Carmona A， et al. Arabidopsis TCP20 links regulation of growth and cell division control pathways[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America， 2005， 102（36）：12978-12983.

[13]Danisman S， Van der Wal F， Dhondt S， et al. Arabidopsis class I and class II TCP transcription factors regulate jasmonic acid metabolism and leaf development antagonistically[J].Plantphysiology，2012，159（4）：1511-1523.

[14]Palatnik J F， Allen E， Wu X， et al. Control of leaf morphogenesis by microRNAs[J]. Nature， 2003， 425：257-263.

[15]李超. 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的豌豆花瓣瞬間表達(dá)系統(tǒng)的建立及利用該系統(tǒng)對(duì)百脈根TCP基因亞細(xì)胞定位的研究[D]. 上海：上海交通大學(xué)， 2009.

[16] Feng X， Zhao Z， Tian Z， et al. Control of petal shape and floral zygomorphy in Lotus japonicus[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America， 2006， 103 （13）：4970-44975.

[17] Wang Z， Luo Y， Li X， et al. Genetic control of floral zygomorphy in pea （Pisum sativum L.） [J]. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America， 2008， 105 （30）：10414-410419.

[18] Velasco R， Zharkikh A， Affourtit J， et al. The genome of the domesticated apple （Malus × domestica Borkh.） [J]. Nature Genetics， 2010， 42（10）：833-839.

[19] Li Y Z， Wu B J， Yu Y L， et al. Genome-wide analysis of the RING finger gene family in apple[J]. Molecular Genetics and Genomics， 2011， 286（1）：81-94.

[20]許瑞瑞， 張世忠， 曹慧， 等. 蘋果WRKY轉(zhuǎn)錄因子家族基因生物信息學(xué)分析[J].園藝學(xué)報(bào)， 2012， 39（10）：2249-2260.

[21]Zhao T， Liang D， Wang P， et al. Genome-wide analysis and expression profiling of the DREB transcription factor gene family in Malus under abiotic stress[J]. Molecular Genetics Genomics， 2012， 287（5）：423-436.

[22]Zhang S， Xu R， Luo X， et al. Genome-wide identification and expression analysis of MAPK and MAPKK gene family in Malus domestica[J].Gene， 2013， 531（2）：377-387.

[23]Mount D W. Using the basic local alignment search tool （BLAST） [J]. Cold Spring Harbor Protocols， 2007， doi： 10.1101/pdb.top17.

[24]Tamura K， Peterson D， Peterson N， et al. MEGA5： molecular evolutionary genetics analysis using maximum likelihood， evolutionary distance， and maximum parsimony methods[J]. Molecular Biology Evolution， 2011，28：2731-2739.

[25]Cubas P. Role of TCP genes in the evolution of morphological characters in angiosperms[M]//Cronk Q C B， Bateman R M， Hawkins J A， eds. Developmental Genetics and Plant Evolution. London：CRC Press， 2002：247-266.山 東 農(nóng) 業(yè) 科 學(xué)2014，46（5）：18～20，25Shandong Agricultural Sciences山 東 農(nóng) 業(yè) 科 學(xué)第46卷第5期王風(fēng)云，等：電子村務(wù)系統(tǒng)的設(shè)計(jì)與開發(fā)

[7]Yao X， Ma H， Wang J， et al. Genome-wide comparative analysis and expression pattern of TCP gene families in Arabidopsis thaliana and Oryza sativa[J].Journal of Integrative Plant Biology，2007， 49（6）： 885-897.

[8]Doebley J， Stec A， Hubbard L. The evolution of apical dominance in maize[J]. Nature， 1997，386：485-488.

[9]Wang R L， Stec A， Hey J， et al. The limits of selection during maize domestication[J]. Nature， 1999，398：236-239.

[10]Takeda T， Suwa Y， Suzuki M， et al. The OsTB1 gene negatively regulates lateral branching in rice[J]. Plant Journal， 2003， 33（3）：513-520.

[11]Takeda T， Amano K， Ohto M A， et al. RNA interference of the Arabidopsis putative transcription factor TCP16 gene results in abortion of early pollen development[J]. Plant Molecular Biology， 2006， 61（1/2）：165-177.

[12]Li C， Potuschak T， Colon-Carmona A， et al. Arabidopsis TCP20 links regulation of growth and cell division control pathways[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America， 2005， 102（36）：12978-12983.

[13]Danisman S， Van der Wal F， Dhondt S， et al. Arabidopsis class I and class II TCP transcription factors regulate jasmonic acid metabolism and leaf development antagonistically[J].Plantphysiology，2012，159（4）：1511-1523.

[14]Palatnik J F， Allen E， Wu X， et al. Control of leaf morphogenesis by microRNAs[J]. Nature， 2003， 425：257-263.

[15]李超. 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的豌豆花瓣瞬間表達(dá)系統(tǒng)的建立及利用該系統(tǒng)對(duì)百脈根TCP基因亞細(xì)胞定位的研究[D]. 上海：上海交通大學(xué)， 2009.

[16] Feng X， Zhao Z， Tian Z， et al. Control of petal shape and floral zygomorphy in Lotus japonicus[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America， 2006， 103 （13）：4970-44975.

[17] Wang Z， Luo Y， Li X， et al. Genetic control of floral zygomorphy in pea （Pisum sativum L.） [J]. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America， 2008， 105 （30）：10414-410419.

[18] Velasco R， Zharkikh A， Affourtit J， et al. The genome of the domesticated apple （Malus × domestica Borkh.） [J]. Nature Genetics， 2010， 42（10）：833-839.

[19] Li Y Z， Wu B J， Yu Y L， et al. Genome-wide analysis of the RING finger gene family in apple[J]. Molecular Genetics and Genomics， 2011， 286（1）：81-94.

[20]許瑞瑞， 張世忠， 曹慧， 等. 蘋果WRKY轉(zhuǎn)錄因子家族基因生物信息學(xué)分析[J].園藝學(xué)報(bào)， 2012， 39（10）：2249-2260.

[21]Zhao T， Liang D， Wang P， et al. Genome-wide analysis and expression profiling of the DREB transcription factor gene family in Malus under abiotic stress[J]. Molecular Genetics Genomics， 2012， 287（5）：423-436.

[22]Zhang S， Xu R， Luo X， et al. Genome-wide identification and expression analysis of MAPK and MAPKK gene family in Malus domestica[J].Gene， 2013， 531（2）：377-387.

[23]Mount D W. Using the basic local alignment search tool （BLAST） [J]. Cold Spring Harbor Protocols， 2007， doi： 10.1101/pdb.top17.

[24]Tamura K， Peterson D， Peterson N， et al. MEGA5： molecular evolutionary genetics analysis using maximum likelihood， evolutionary distance， and maximum parsimony methods[J]. Molecular Biology Evolution， 2011，28：2731-2739.

[25]Cubas P. Role of TCP genes in the evolution of morphological characters in angiosperms[M]//Cronk Q C B， Bateman R M， Hawkins J A， eds. Developmental Genetics and Plant Evolution. London：CRC Press， 2002：247-266.山 東 農(nóng) 業(yè) 科 學(xué)2014，46（5）：18～20，25Shandong Agricultural Sciences山 東 農(nóng) 業(yè) 科 學(xué)第46卷第5期王風(fēng)云，等：電子村務(wù)系統(tǒng)的設(shè)計(jì)與開發(fā)