鄒賢剛 ，付書婕 ，黃興振，巫玲玲，蔣偉哲

（1．北海藍(lán)海洋生物藥業(yè)有限責(zé)任公司，廣西 北海 536000； 2．廣西醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，廣西 南寧 530021）

血脂異常是心血管疾病的重要危險因素，高脂血癥的流行病學(xué)調(diào)查表明，我國血脂異?？偦疾÷蕿?8．6%[1]。高血脂是引起動脈粥樣硬化（AS）性疾病和脂肪肝的主要因素，與之相關(guān)的心腦血管疾病發(fā)病率高、危害大、病情進(jìn)展兇險，死亡率約占人類總死亡率的50%[2]。目前，調(diào)血脂的西藥不良反應(yīng)多，且價格較貴，故從中草藥中尋找有效的調(diào)血脂藥一直備受關(guān)注。牡蠣降脂膠囊由牡蠣肉、大黃、麥冬、西洋參等組方。牡蠣肉是廣西北海特色海洋產(chǎn)品，屬藥食兩用藥材，可促進(jìn)血液循環(huán)，促進(jìn)脂代謝。大黃具有瀉熱通腸、涼血解毒、逐瘀通經(jīng)的功效，常用于調(diào)血脂，可降低總膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白、極低密度脂蛋白及過氧化脂質(zhì)的水平。麥冬甘寒清潤，可提高免疫功能、養(yǎng)陰生津、潤肺清心。西洋參可補(bǔ)氣養(yǎng)陰、清熱生津，可促進(jìn)糖代謝和脂肪代謝。該方在民間已有臨床應(yīng)用，但并無現(xiàn)代藥理學(xué)理論的支撐，因此對其進(jìn)行系統(tǒng)的藥理作用研究，闡明其藥理作用及機(jī)制，可為其深入開發(fā)與應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)。本試驗中以高脂飼料喂養(yǎng)鵪鶉建立動物病理模型，觀察牡蠣降脂膠囊對高脂血癥模型鵪鶉血脂水平及脂代謝相關(guān)酶的影響，為其開發(fā)及臨床應(yīng)用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1．1 儀器、試藥與動物

7170型全自動生化分析儀（日本日立公司）；XHF-D高速分散器（寧波新芝生物科技股份有限公司）；AW220型電子天平（日本島津公司）；722型分光光度計（上海第三分析儀器廠）；AllegraX-12型離心機(jī)（美國貝克曼庫爾特有限公司）；Sunrise-BASIC酶標(biāo)儀（瑞士 Tecan公司）。牡蠣降脂膠囊（北海藍(lán)海洋生物藥業(yè)有限責(zé)任公司，批號為20110425，規(guī)格為每粒0．35 g，人推薦用量2．1 g／d）；月見草油膠丸（武漢中聯(lián)集團(tuán)四藥藥業(yè)有限責(zé)任公司，批號為20110309，規(guī)格為每粒0．3 g）。血清 TC檢測試劑盒（批號為091081）、血清 TG檢測試劑盒（批號為090815）、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)檢測試劑盒（批號為090512）、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)檢測試劑盒（批號為090916）、總酯酶檢測試劑盒，均購于南京建成生物工程研究所；載脂蛋白AI(Apo AI)檢測試劑盒（批號為 100821）、載脂蛋白(Apo B)檢測試劑盒（批號為100922），均購于中生北控生物科技股份有限公司；游離膽固醇（FC）測定試劑盒（Sigma公司，批號為110823）。普通飼料購于南寧飼料廠；高脂飼料配方參考AIN-93G國際配方，普通飼料 78．8%、膽固醇 1%、膽鹽 0．2%，熟豬油10%、蛋黃粉10%，充分?jǐn)嚢柚辆鶆颉ｓw重60～100 g的鵪鶉，約4周齡，雌雄各半（廣西醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供，SPF級，合格證號為SCXKG（桂）2009-0002）。

1．2 方法

動物分組與給藥[3]：取鵪鶉72只，以普通飼料適應(yīng)性喂養(yǎng)7 d后，測定血脂、脂蛋白水平，按體重并參考TG，TC水平隨機(jī)分為6組，每組12只，即對照組(A組)，模型組(B組)，月見草油膠丸組（陽性對照組，C 組），牡蠣降脂膠囊低、中、高劑量組（D1，D2，D3組，劑量分別為 0．3，0．6，1．2 g ／kg，分別為人體推薦用量的 10，20，40倍）。對照組喂飼普通飼料，其余各組喂飼高脂飼料連續(xù)10周，高脂造模成功。各給藥組自造模第11周開始給予藥物治療，每日1次，A組及B組灌胃給予蒸餾水6 mL／kg；C組灌胃給予月見草油 0．26 g／kg（人體推薦用量的 20倍）；牡蠣降脂膠囊各組分別按劑量灌胃給藥，模型組及給藥組同時繼續(xù)喂飼高脂飼料，連續(xù)6周。動物房溫度為（22±2）℃，相對濕度為65%。

指標(biāo)檢測：每周稱鵪鶉體重1次，觀察體重變化趨勢。試驗結(jié)束后，停止給予高脂飼料，普通飼料喂養(yǎng)3 d，所有鵪鶉禁食12 h，以減少高脂飼料中膽固醇對試驗結(jié)果的影響，斷頭取血置離心管中，加蓋置4℃冰箱30 min后取出，以3 000 r／min的速率離心20 min，分離出上層血清即為待測樣品。測定血清中 TC，TG，HDL-C，LDL-C，Apo AI，Apo B、肝脂酶（HL）和脂蛋白脂酶（LPL）水平。血清中卵磷酯膽固醇的轉(zhuǎn)移酶（LCAT）的測定，參照蔣憲成等[4]的方法，在500 nm波長處測定游離型膽固醇（FC）水平，以FC的減少量（即膽固醇酯化量）表示LCAT活性大小。

統(tǒng)計學(xué)處理：采用 SPSS 13．0統(tǒng)計軟件，所得數(shù)據(jù)用±s表示，計量資料進(jìn)行單因素方差分析，計數(shù)資料的比較采用 χ2檢驗。P＜0．05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

試驗過程中，各組鵪鶉的毛發(fā)有光澤、行動靈活，食量及大便正常。在造模的前4周，鵪鶉體重的增長速度較快，第5周開始體重增長變慢。在整個試驗期間，對照組的體重增長速度相對于模型組及牡蠣降脂膠囊各劑量組較緩慢，但到14周后體重基本相近。牡蠣降脂膠囊對高脂血癥鵪鶉體重及各指標(biāo)的影響見表1至表 3。

3 討論

長期食用高膽固醇食物，容易引起高TG及TC血癥。HDLC和LDL-C代謝異常，相應(yīng)地表現(xiàn)出Apo AI和Apo B的代謝異常。Apo AI是 HDL-C最主要的蛋白成分，在血漿中的濃度與HDL-C的水平相關(guān)，是脂代謝關(guān)鍵酶LCAT的激活劑，而LCAT在膽固醇的逆向轉(zhuǎn)運中起主要作用；Apo AI水平升高就可激活LCAT，加強(qiáng)膽固醇的逆向轉(zhuǎn)運，從而降低膽固醇水平[5]。Apo B是LDL-C的主要載脂蛋白，在運輸內(nèi)源性膽固醇、TG和LDL-C的代謝中起主要作用，攜帶的膽固醇在動脈壁沉積，會導(dǎo)致動脈粥樣硬化的發(fā)生[6]。

表1 牡蠣降脂膠囊對高脂血癥鵪鶉體重的影響（±s，g，n＝12）

表1 牡蠣降脂膠囊對高脂血癥鵪鶉體重的影響（±s，g，n＝12）

注：與 A 組比較， P ＜0．05， P ＜0．01；與 B 組比較， P ＜0．05，P ＜ 0．01。下表同。

組別A組B組C組D1組D2組D3組試驗前81．4 ±5．5 81．9 ±6．6 82．1 ±6．9 82．2 ±5．3 83．1 ±6．5 83．3 ±5．7 4周107．7 ± 3．5 124．1 ± 3．6 122．8 ± 2．5 122．1 ± 2．2 123．2 ± 3．5 122．4 ± 3．1 10周141．1 ± 2．7 161．7 ± 3．8 159．2 ± 7．1 161．3 ± 7．3 160．2 ± 6．5 161．2 ± 7．0 12周161．9 ±6．8 170．6 ±8．8 167．7 ±6．9 171．2 ±7．5 169．5 ±6．4 169．6 ±5．0 14周181．7 ± 4．0 190．6 ± 2．8 179．3 ± 3．1 184．8 ± 5．5 182．3 ± 4．1 181．6 ± 2．8 16周191．0 ± 7．1 209．3 ± 5．1 195．2 ± 5．6 192．1 ± 6．1 193．7 ± 4．1 190．5 ± 6．5

表2 牡蠣降脂膠囊對高脂血癥鵪鶉血脂的影響（±s，mmol／L，n＝12）

表2 牡蠣降脂膠囊對高脂血癥鵪鶉血脂的影響（±s，mmol／L，n＝12）

組別A組B組C組D1組D2組D3組TG 0．73 ± 0．20 1．25 ± 0．19 0．83 ± 0．20 0．93 ± 0．21 0．75 ± 0．18 0．80 ± 0．26 TC 2．18 ± 2．5 3．47 ± 0．31 2．37 ± 0．27 2．82 ± 0．23 2．43 ± 0．26 2．31 ± 0．27 HDL-C 0．79 ± 0．18 0．71 ± 0．15 0．77 ± 0．23 0．73 ± 0．20 0．75 ± 0．19 0．74 ± 0．21 LDL-C 1．24 ± 0．15 2．28 ± 0．17 1．50 ± 0．19 2．00 ± 0．13 1．58 ± 0．14 1．70 ± 0．18

表3 牡蠣降脂膠囊對高脂血癥鵪鶉血清中載脂蛋白和血清中LCAT，HL，LPL 的影響（±s，n＝12）

表3 牡蠣降脂膠囊對高脂血癥鵪鶉血清中載脂蛋白和血清中LCAT，HL，LPL 的影響（±s，n＝12）

載脂蛋白（mmol／L）組別A組B組C組D1組D2組D3組Apo AI 0．110 ± 0．014 0．057 ±0．013 0．080 ± 0．010 0．073 ±0．010 0．075 ± 0．019 0．084 ± 0．035 Apo B 0．226 ± 0．032 0．422 ±0．033 0．259 ± 0．035 0．249 ±0．041 0．237 ± 0．048 0．225 ± 0．024 LCAT（ mol／L）1．74 ± 0．12 0．86 ± 0．08 1．63 ± 0．11 1．35 ± 0．09 1．64 ± 0．18 1．71 ± 0．16 HL（ mol／L）17．12 ± 1．06 8．58 ± 0．18 17．09 ± 0．77 14．46 ± 0．98 16．15 ± 1．45 16．94 ± 0．78 LPL（ mol／L）47．27 ± 1．52 23．50 ± 1．26 47．04 ± 1．17 41．83 ± 0．97 45．37 ± 1．12 47．00 ± 1．31

在血漿脂蛋白代謝過程中，許多脂酶起著重要作用，主要包括LPL，HL，LCAT。血漿中 TG的增高或降低與血漿中 LPL的活性有一定關(guān)系，LPL具有水解脂蛋白中TG為非酯化脂肪酸（NEFA）和甘油的作用。因此，LPL是影響血漿中TG的一個直接因素。HL活力異常會引起血漿脂蛋白代謝紊亂。LCAT在血漿膽固醇酯化及HDL-C的成熟過程中起著重要作用。HDL-C與肝細(xì)胞膜的HDL-C受體結(jié)合，被肝細(xì)胞攝取，在此過程中膽固醇被用于合成膽汁酸或通過膽汁排出體外，使膽固醇在肝的代謝中被清除[7]，LCAT活性決定 HDL-C的生成。因此，脂代謝酶的活性與血脂水平緊密相關(guān)，蘇慧等[8]的研究也表明，LCAT，HL，LPL都是調(diào)節(jié)脂蛋白代謝的關(guān)鍵酶，在脂代謝中發(fā)揮重要作用。

建立合適的高脂血癥動物模型是推進(jìn)高脂血癥研究進(jìn)程的關(guān)鍵。目前常用于高脂血癥模型且價格經(jīng)濟(jì)的動物有大鼠、家兔和鵪鶉。大鼠血清中HDL-C是血膽固醇的主要載體，但大鼠具有對抗動脈粥樣硬化形成的能力。家兔是最早用于制造高脂血癥模型的動物，其對高脂飼料敏感性高，外源性膽固醇的吸收率高，但家兔為食草動物，膽固醇代謝與人類差異較大，病變與人體不同，且抵抗力差，容易繼發(fā)感染而死亡。目前，鵪鶉被作為高脂血癥及AS模型常用動物，為脊椎動物中能自發(fā)形成AS的易感動物之一，且來源充足，飼養(yǎng)方便，食料簡單。

本研究中采用高脂飼料喂飼鵪鶉復(fù)制高脂血癥模型，研究牡蠣降脂膠囊對鵪鶉血脂、脂蛋白、載脂蛋白及脂代謝酶的影響，旨在探索牡蠣降脂膠囊調(diào)節(jié)血脂代謝的作用機(jī)制。結(jié)果表明，牡蠣降脂膠囊可以顯著降低高血脂癥鵪鶉血清中的TG，TC，LDL-C水平，但對血清中HDL-C的升高作用不明顯。同時，牡蠣降脂膠囊通過提高 Apo AI含量，降低 Apo B含量，提高 LCAT，HL，LPL的活性，而發(fā)揮調(diào)血脂的作用。結(jié)果提示，牡蠣降脂膠囊可有效控制血脂水平，特別是高脂膳食引起的高脂血癥，其調(diào)血脂的機(jī)制可能是通過激活載脂蛋白及脂代謝酶的活性，以抑制腸道內(nèi)外源性血脂和脂蛋白的吸收，加速膽固醇的代謝和促進(jìn)膽固醇的排泄來調(diào)節(jié)TC代謝。

控制高血脂對于治療AS是非常重要的途徑，目前國內(nèi)外治療AS應(yīng)用最多的是他汀類藥物，但臨床發(fā)現(xiàn)，長期服用這些化學(xué)調(diào)脂藥物可發(fā)生多種不良反應(yīng)，如對肝、腎功能有一定損害作用，嚴(yán)重時可危及生命；此外還具有用藥漸強(qiáng)、停藥漸升的弊端[9]。天然中草藥防治高脂血癥及抗AS的研究工作日益受到國內(nèi)外醫(yī)學(xué)界的重視，大量藥理研究及臨床報道也已證明中草藥具有一定的調(diào)脂和抗AS作用，且不良反應(yīng)少[10]。綜上所述，牡蠣降脂膠囊在高脂血癥及AS的防治中具有較好的應(yīng)用前景，值得進(jìn)一步深入研究開發(fā)并加以利用。

[1]趙文華，張 堅，由 悅，等．中國18歲及以上人群血脂異常流行特點研究[J]．中華預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志，2005，39（5）:306-311．

[2]趙 彥，劉小杰．紅曲-植物甾醇酯復(fù)方制劑調(diào)血脂作用研究[J]．中草藥，2011，42（11）：2 296-2 299．

[3]潘建新，張克平，顧振綸，等．百草降脂靈對鵪鶉高脂血癥和動脈粥樣硬化的作用[J]．蘇州醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2001，21（6）：646-648．

[4]蔣憲成，莊慶祺，梅美珍．卵磷脂膽固醇酰基轉(zhuǎn)移酶活性的簡易測定法[J]．上海第一醫(yī)學(xué)院學(xué)報，1985，12（2）：259．

[5]Baroukh N，Ostosa MA，Vergnes L，et al．Expression of human apolipoprotein A-I／C-III／A-IV gene cluster in mice reduces athemgenesis in response to a high fat-high cholesterol diet[J]．FEBS Lett，2001，502:16．

[6]吳符火，劉雪梅，郭素華．養(yǎng)心草膠囊調(diào)血脂機(jī)制的實驗研究[J]．中國中西醫(yī)結(jié)合雜志，2006，26（2）：131-134．

[7]陳玉霞，郭長江．茶多酚降血脂作用及其機(jī)制研究進(jìn)展[J]．中國食品與營養(yǎng)，2006，4（4）：47-49．

[8]蘇 慧，李蘭蓀，賈國良．LPL基因多態(tài)性與血漿TG水平及冠脈病變嚴(yán)重度的關(guān)系[J]．第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報，2001，22（21）：1 992-1 995．

[9]蔣文躍，楊 宇．化痰藥半夏、瓜蔞、浙貝母、石菖蒲對大鼠血液流變性的影響[J]．中醫(yī)雜志，2002，43（3）：215-216．

[10]沈雅琴，張明發(fā)．半夏的鎮(zhèn)痛、抗?jié)兒涂寡ㄐ纬勺饔肹J]．中國生化藥物雜志，1998，19（3）：141-143．