梁彥　呂艷榮

摘要：研究馬齒莧多糖對(duì)D-半乳糖誘導(dǎo)亞急性衰老小鼠模型的抗衰老作用，并探討其可能作用機(jī)制。小鼠按體重將其隨機(jī)分5組，每組24只，分別是正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、低劑量（100 mg/kg）馬齒莧多糖治療組、中劑量（200 mg/kg）馬齒莧多糖治療組、高劑量（400 mg/kg）馬齒莧多糖治療組，治療連續(xù)8周，再對(duì)各組小鼠進(jìn)行水迷宮試驗(yàn)及相關(guān)生化指標(biāo)測(cè)定。結(jié)果表明，馬齒莧多糖能明顯改善D-半乳糖致亞急性衰老小鼠的學(xué)習(xí)記憶障礙，提高胸腺、脾臟系數(shù)、超氧化物歧化酶和谷胱甘肽過氧化酶活性，降低MDA含量。說明馬齒莧多糖具有抗衰老作用，其機(jī)制可能與增強(qiáng)內(nèi)源性抗氧化酶活性，減弱機(jī)體衰老狀態(tài)下的脂質(zhì)過氧化有關(guān)。

關(guān)鍵詞：馬齒莧多糖；D-半乳糖；抗衰老

中圖分類號(hào)： R284.1 文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A 文章編號(hào)：1002-1302（2014）04-0270-03

收稿日期：2013-07-21

基金項(xiàng)目：吉林省教育廳“十二五”科學(xué)技術(shù)研究項(xiàng)目（編號(hào)：20130333）；吉林省教育廳釀造技術(shù)高等學(xué)校工程研究中心項(xiàng)目（編號(hào)：吉農(nóng)院合字2012第606號(hào)）；吉林農(nóng)業(yè)科技學(xué)院重點(diǎn)學(xué)科培育項(xiàng)目（編號(hào)：吉農(nóng)院合字2013第X039號(hào)）。

作者簡(jiǎn)介：梁彥（1970—），女，吉林吉林人，碩士，副教授，主要從事食品營養(yǎng)研究和保健食品開發(fā)工作。E-mail：641219596@qq.com。馬齒莧（Portulaca oleracea L.）為馬齒莧科一年生肉質(zhì)草本植物，別稱長(zhǎng)壽草、螞蟻菜等，在我國分布廣泛，資源豐富，是常見的中草藥和野生蔬菜，屬于衛(wèi)生部劃定的78種藥食同源的野生植物之一。馬齒莧全草及種子入藥，《滇南本草》謂其“益氣，清暑熱，寬中下氣?；c，消積帶，殺蟲，療瘡紅腫疼痛?！?馬齒莧性寒，味甘酸；入心、肝、脾、大腸經(jīng)，具有清熱解毒、涼血止血之功效；可用于熱毒血痢、痛腫療瘡、濕疹、丹毒、蛇蟲咬傷、便血痔血、崩漏下血等病癥[1]。馬齒莧富含去甲基腎上腺素、α-不飽和脂肪酸、β-胡蘿卜素、黃酮類、香豆素、單萜糖苷類、生物堿、多糖等化學(xué)成分。其中多糖是馬齒莧的主要有效活性成份，近年來引起國內(nèi)外科研工作者極大的關(guān)注。藥理學(xué)研究表明，馬齒莧多糖（POP） 具有抗腫瘤、抗菌、抗病毒、清除自由基、降糖、降血脂、增強(qiáng)免疫功能等作用[2]，但目前對(duì)其抗衰老生物學(xué)活性的研究較少，國內(nèi)外鮮有系統(tǒng)的研究報(bào)道。本研究采用亞急性衰老小鼠模型，觀察馬齒莧多糖對(duì)相關(guān)指標(biāo)的影響，旨在評(píng)價(jià)馬齒莧多糖的抗衰老生物活性，并初步探討其可能的作用機(jī)理，為開發(fā)以馬齒莧多糖為原料的抗衰老保健品提供理論依據(jù)。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)動(dòng)物

昆明系清潔級(jí)小鼠，6～8周齡，體重18～22 g，雌雄各半，由吉林市生物制品廠提供。小鼠喂養(yǎng)于標(biāo)準(zhǔn)化飼養(yǎng)房，飼喂自配的小鼠飼料（蛋白質(zhì)21%、碳水化合物55%、脂肪6%），室內(nèi)通風(fēng)良好，正常晝夜變化，相對(duì)濕度25%～70%，室溫18～22 ℃。

1.2主要試劑

無水葡萄糖購于中國藥品生物制品檢定所；D-半乳糖購于上海恒信制藥廠；超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化酶（GPx）、丙二醛 （MDA）分析測(cè)定試劑盒購于南京建成生物工程研究所；其他化學(xué)試劑均為分析純。

1.3儀器與設(shè)備

Morris水迷宮分析系統(tǒng)（四川成都儀器廠）；DY89-Ⅱ型電動(dòng)玻璃勻漿機(jī)（浙江寧波新芝生物科技股份有限公司）；GalanzWD900B微波爐（額定頻率50 Hz，5檔，順德格蘭仕電器廠有限公司）；UV-1750紫外可見分光光度計(jì)（日本島津公司）；RE-5299 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海亞榮生化儀器廠）；SHB-Ⅲ型循環(huán)水式多用真空泵（鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司）；YF中藥粉碎機(jī)（江蘇省江陰市偉翔藥化機(jī)械廠）；DHG-9140A電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）；KDC-1044低速離心機(jī)（科大創(chuàng)新股份有限公司中佳分公司）。

1.4馬齒莧多糖的制備

馬齒莧全草采于吉林省吉林市郊區(qū)，由吉林農(nóng)業(yè)科技學(xué)院中藥教研室鑒定，全草洗凈干燥后，粉碎，過20目篩備用。準(zhǔn)確稱取5.0 g 馬齒莧細(xì)粉，按35 ∶1（mL ∶g）的液料比加入水中浸泡1 h，然后設(shè)定微波處理時(shí)間15 min，微波功率 540 W 提取[3]。提取結(jié)束后靜置離心，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器對(duì)上清液減壓濃縮至30 mL，用Sevag法脫蛋白后加入2倍量的無水乙醇沉淀多糖，過夜，離心，得沉淀物，依次用無水乙醇、丙酮、乙醚反復(fù)洗滌沉淀后，干燥后稱重，即得馬齒莧粗多糖。將粗多糖用水-乙醇重結(jié)晶，經(jīng)過DEAE纖維柱層析，用水洗脫，截收所需洗脫液，減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)適量溶劑，醇淀，抽濾洗滌、干燥，得灰白色粉末狀的馬齒莧多糖[4]。該多糖經(jīng)過電泳分析，結(jié)果表明其為均一組分；采用凝膠過濾法測(cè)定其分子量為 411 ku；采用氣相色譜法與紙層析法測(cè)定其是單糖是由葡萄糖和半乳糖（0.66 ∶1.78）組成。

1.5亞急性衰老小鼠模型的建立與給藥

小鼠按體重將其隨機(jī)分5組，每組24只，分別是正常對(duì)照組（NC）、模型對(duì)照組（MC）、低劑量（100 mg/kg）馬齒莧多糖治療組（LPT）、中劑量（200 mg/kg）馬齒莧多糖治療組（MPT）、高劑量（400 mg/kg）馬齒莧多糖治療組（HPT）；治療組連續(xù)8周給小鼠灌胃，對(duì)照組給予等量蒸餾水。除正常對(duì)照組皮下注射生理鹽水外，其他各組參照《藥理學(xué)試驗(yàn)方法學(xué)》中的方法，采用D-半乳糖皮下注射法制備小鼠亞急性衰老模型；每天頸部皮下注射2%D-半乳糖，給藥量為 100 mg/kg，連續(xù)8周。

1.6小鼠水迷宮試驗(yàn)

采用Morris水迷宮試驗(yàn)，第8周進(jìn)行。連續(xù)訓(xùn)練4 d，每天3次。末次訓(xùn)練后48 h進(jìn)行測(cè)定，記錄小鼠從入水點(diǎn)開始找到水下平臺(tái)的時(shí)間，記為尋找平臺(tái)潛伏期。如果小鼠在120s 未找到平臺(tái)，人工引致平臺(tái)潛伏期記錄為120s。測(cè)定小鼠所用時(shí)長(zhǎng)與錯(cuò)誤次數(shù)。endprint

1.7相關(guān)生化指標(biāo)測(cè)定

第8周灌胃結(jié)束當(dāng)天，小鼠稱重，摘眼球取血；常規(guī)分離血清。然后解剖取胸腺、脾臟、肝臟進(jìn)行相關(guān)生化指標(biāo)測(cè)定。血清與肝臟中SOD、GPx、MDA的含量測(cè)定按試劑盒推薦的程序；胸腺、脾系數(shù)按下列公式計(jì)算：

胸腺（脾）系數(shù)=質(zhì)量（mg）體重（g）×100

1.8統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

數(shù)據(jù)用“平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS 10.0 軟件分析，顯著性水平為α<0.05。

2結(jié)果與分析

2.1馬齒莧多糖對(duì)小鼠水迷宮試驗(yàn)的影響

由表1可知，與正常對(duì)照組比較，模型對(duì)照組小鼠的平臺(tái)潛伏期時(shí)間與錯(cuò)誤次數(shù)明顯增加，說明D-半乳糖造模成功（P<0.05），小鼠的腦神經(jīng)元產(chǎn)生了退行性變化，對(duì)其學(xué)習(xí)記憶能力產(chǎn)生了影響。與模型對(duì)照組相比，3個(gè)劑量的馬齒莧多糖治療組小鼠的平臺(tái)潛伏期時(shí)間顯著減少（P<0.05），3個(gè)劑量馬齒莧多糖治療組小鼠錯(cuò)誤次數(shù)顯著降低（P<005），說明馬齒莧多糖明對(duì)D-半乳糖致亞急性衰老小鼠的學(xué)習(xí)記憶障礙有顯著的改善作用。

3結(jié)論與討論

衰老或老化是生物隨著時(shí)間的推移而自發(fā)的必然過程，這個(gè)過程從生長(zhǎng)期結(jié)束后逐漸開始，它的影響要到老年期通過機(jī)體功能、器官、細(xì)胞、蛋白質(zhì)和酶分子的各種變化而逐漸顯現(xiàn)出來，主要表現(xiàn)為機(jī)體結(jié)構(gòu)退行性變和機(jī)能衰退、適應(yīng)性和抵抗力減退[5]。目前，常用的衰老動(dòng)物模型有醋酸潑尼松所致的腎虛衰老小鼠、D-半乳糖所致的亞急性衰老模型、臭氧所致免疫功能低下衰老小鼠、環(huán)磷酰胺所致免疫功能低下與記憶缺失小鼠等。其中，D-半乳糖所致的亞急性衰老模型因其變化明顯，模型穩(wěn)定，在天然產(chǎn)物抗衰老研究中被廣泛應(yīng)用[6]。研究認(rèn)為，小鼠連續(xù)注射D-半乳糖后，機(jī)體細(xì)胞內(nèi)半乳糖濃度增高，在醛糖還原酶催化下，得到的還原產(chǎn)物半乳糖醇不能被細(xì)胞代謝而堆積在細(xì)胞內(nèi)，影響正常滲透壓，導(dǎo)致細(xì)胞腫脹，致使小鼠組織細(xì)胞出現(xiàn)衰老時(shí)的退行性改變以及功能的改變；同時(shí)D-半乳糖在體內(nèi)氧化產(chǎn)生的大量自由基超過機(jī)體的清除能力，導(dǎo)致自由基的堆積，從而誘發(fā)氧化應(yīng)激，引發(fā)脂質(zhì)過氧化的鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，并且脂質(zhì)過氧化的分解終產(chǎn)物如MDA可與DNA或RNA及蛋白質(zhì)、磷脂等物質(zhì)結(jié)合，使細(xì)胞膜成分改變，引起神經(jīng)系統(tǒng)的功能障礙、免疫力低下等一系列癥狀，從而促進(jìn)衰老。此外，相關(guān)研究顯示，造模時(shí)給予半乳糖的量超過100 mg/kg時(shí)，小鼠學(xué)習(xí)記憶的能力不再隨劑量的增加而減退[7]，所以本試驗(yàn)將半乳糖的量定為 100 mg/kg。結(jié)果顯示，與正常對(duì)照組比較，模型對(duì)照組小鼠的平臺(tái)潛伏期時(shí)間與錯(cuò)誤次數(shù)顯著增加，胸腺和脾系數(shù)顯著降低，說明采用D-半乳糖造模成功。

衰老后發(fā)生學(xué)習(xí)記憶能力下降是衰老的主要特征之一，水迷宮試驗(yàn)是反映小鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力的經(jīng)典方法。本研究結(jié)果顯示，與模型對(duì)照組比較，3個(gè)劑量的馬齒莧多糖治療組小鼠的平臺(tái)潛伏期時(shí)間明顯減少，中、高劑量馬齒莧多糖治療組小鼠錯(cuò)誤次數(shù)顯著減少，這說明馬齒莧多糖對(duì)D-半乳糖致亞急性衰老模型的學(xué)習(xí)記憶障礙有顯著的改善作用。

免疫系統(tǒng)作為一個(gè)完整自主的系統(tǒng)，在維護(hù)和調(diào)整動(dòng)物生命活動(dòng)中起重要作用。免疫功能逐漸下降是機(jī)體衰老最突出的特征，而免疫功能失調(diào)又加速機(jī)體的衰老。免疫器官指數(shù)可以初步反映機(jī)體非特異性免疫力的強(qiáng)弱。本研究結(jié)果顯示，與模型對(duì)照組比較，3個(gè)劑量的馬齒莧多糖治療組小鼠的胸腺、脾系數(shù)顯著增加，說明馬齒莧多糖具有提高機(jī)體免疫能力的作用，進(jìn)一步證實(shí)其具有抗衰老作用。

人們根據(jù)對(duì)衰老機(jī)理的不同理解，提出了許多種衰老學(xué)說，主要有自由基學(xué)說、免疫功能下降學(xué)說、腦中心學(xué)說、代謝失調(diào)學(xué)說等，其中自由基學(xué)說能比較清楚地解釋機(jī)體衰老過程中的種種癥狀，是目前最有說服力的學(xué)說。自由基學(xué)說認(rèn)為：在正常情況下，機(jī)體的抗氧化系統(tǒng)等使自由基的生成與清除保持平衡；但是，隨著年齡的增長(zhǎng)，機(jī)體內(nèi)抗氧化酶活性逐漸減弱，清除自由基劑能力下降，從而減弱了對(duì)自由基損害的防御能力，使機(jī)體組織器官容易受損，加速了機(jī)體的衰老。SOD、GPx是機(jī)體內(nèi)清除自由基主要的抗氧化酶，SOD的作用在于阻斷超氧陰離子自由基引發(fā)自由基的一級(jí)反應(yīng)，從而減少其他活性氧的生成；GPx能夠特異地催化還原型谷胱甘肽與ROS反應(yīng)，從而保護(hù)生物膜免受ROS的損害，維持細(xì)胞的正常功能；MDA 是脂質(zhì)過氧化的產(chǎn)物，其含量的高低間接反映了機(jī)體細(xì)胞受自由基攻擊的嚴(yán)重程度；所以血清與組織中SOD、GPx的活性及MDA的含量都是反映機(jī)體氧化應(yīng)激水平即清除自由基能力的指標(biāo)[8]。本研究結(jié)果顯示，與模型對(duì)照組比較，正常對(duì)照組與3個(gè)劑量馬齒莧多糖治療組小鼠血清與肝臟中SOD、GPx活性均顯著增強(qiáng)，MDA含量均顯著降低，說明馬齒莧多糖能增強(qiáng)機(jī)體衰老狀態(tài)下內(nèi)源性抗氧化酶活性，減弱脂質(zhì)過氧化，從而減輕機(jī)體組織損傷以延緩衰老。

綜上所述，馬齒莧多糖能明顯改善D-半乳糖誘導(dǎo)亞急性衰老小鼠模型的學(xué)習(xí)記憶障礙，提高機(jī)體的免疫能力，具有抗衰老作用；其機(jī)制可能與增強(qiáng)內(nèi)源性抗氧化酶活性、減弱機(jī)體衰老狀態(tài)下的脂質(zhì)過氧化有關(guān)。

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[8]Pérez V I，Bokov A，van Remmen H，et al. Is the oxidative stress theory of aging dead？[J]. Biochimica et Biophysica Acta，2009，1790（10）：1005-1014.endprint

1.7相關(guān)生化指標(biāo)測(cè)定

第8周灌胃結(jié)束當(dāng)天，小鼠稱重，摘眼球取血；常規(guī)分離血清。然后解剖取胸腺、脾臟、肝臟進(jìn)行相關(guān)生化指標(biāo)測(cè)定。血清與肝臟中SOD、GPx、MDA的含量測(cè)定按試劑盒推薦的程序；胸腺、脾系數(shù)按下列公式計(jì)算：

胸腺（脾）系數(shù)=質(zhì)量（mg）體重（g）×100

1.8統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

數(shù)據(jù)用“平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS 10.0 軟件分析，顯著性水平為α<0.05。

2結(jié)果與分析

2.1馬齒莧多糖對(duì)小鼠水迷宮試驗(yàn)的影響

由表1可知，與正常對(duì)照組比較，模型對(duì)照組小鼠的平臺(tái)潛伏期時(shí)間與錯(cuò)誤次數(shù)明顯增加，說明D-半乳糖造模成功（P<0.05），小鼠的腦神經(jīng)元產(chǎn)生了退行性變化，對(duì)其學(xué)習(xí)記憶能力產(chǎn)生了影響。與模型對(duì)照組相比，3個(gè)劑量的馬齒莧多糖治療組小鼠的平臺(tái)潛伏期時(shí)間顯著減少（P<0.05），3個(gè)劑量馬齒莧多糖治療組小鼠錯(cuò)誤次數(shù)顯著降低（P<005），說明馬齒莧多糖明對(duì)D-半乳糖致亞急性衰老小鼠的學(xué)習(xí)記憶障礙有顯著的改善作用。

3結(jié)論與討論

衰老或老化是生物隨著時(shí)間的推移而自發(fā)的必然過程，這個(gè)過程從生長(zhǎng)期結(jié)束后逐漸開始，它的影響要到老年期通過機(jī)體功能、器官、細(xì)胞、蛋白質(zhì)和酶分子的各種變化而逐漸顯現(xiàn)出來，主要表現(xiàn)為機(jī)體結(jié)構(gòu)退行性變和機(jī)能衰退、適應(yīng)性和抵抗力減退[5]。目前，常用的衰老動(dòng)物模型有醋酸潑尼松所致的腎虛衰老小鼠、D-半乳糖所致的亞急性衰老模型、臭氧所致免疫功能低下衰老小鼠、環(huán)磷酰胺所致免疫功能低下與記憶缺失小鼠等。其中，D-半乳糖所致的亞急性衰老模型因其變化明顯，模型穩(wěn)定，在天然產(chǎn)物抗衰老研究中被廣泛應(yīng)用[6]。研究認(rèn)為，小鼠連續(xù)注射D-半乳糖后，機(jī)體細(xì)胞內(nèi)半乳糖濃度增高，在醛糖還原酶催化下，得到的還原產(chǎn)物半乳糖醇不能被細(xì)胞代謝而堆積在細(xì)胞內(nèi)，影響正常滲透壓，導(dǎo)致細(xì)胞腫脹，致使小鼠組織細(xì)胞出現(xiàn)衰老時(shí)的退行性改變以及功能的改變；同時(shí)D-半乳糖在體內(nèi)氧化產(chǎn)生的大量自由基超過機(jī)體的清除能力，導(dǎo)致自由基的堆積，從而誘發(fā)氧化應(yīng)激，引發(fā)脂質(zhì)過氧化的鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，并且脂質(zhì)過氧化的分解終產(chǎn)物如MDA可與DNA或RNA及蛋白質(zhì)、磷脂等物質(zhì)結(jié)合，使細(xì)胞膜成分改變，引起神經(jīng)系統(tǒng)的功能障礙、免疫力低下等一系列癥狀，從而促進(jìn)衰老。此外，相關(guān)研究顯示，造模時(shí)給予半乳糖的量超過100 mg/kg時(shí)，小鼠學(xué)習(xí)記憶的能力不再隨劑量的增加而減退[7]，所以本試驗(yàn)將半乳糖的量定為 100 mg/kg。結(jié)果顯示，與正常對(duì)照組比較，模型對(duì)照組小鼠的平臺(tái)潛伏期時(shí)間與錯(cuò)誤次數(shù)顯著增加，胸腺和脾系數(shù)顯著降低，說明采用D-半乳糖造模成功。

衰老后發(fā)生學(xué)習(xí)記憶能力下降是衰老的主要特征之一，水迷宮試驗(yàn)是反映小鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力的經(jīng)典方法。本研究結(jié)果顯示，與模型對(duì)照組比較，3個(gè)劑量的馬齒莧多糖治療組小鼠的平臺(tái)潛伏期時(shí)間明顯減少，中、高劑量馬齒莧多糖治療組小鼠錯(cuò)誤次數(shù)顯著減少，這說明馬齒莧多糖對(duì)D-半乳糖致亞急性衰老模型的學(xué)習(xí)記憶障礙有顯著的改善作用。

免疫系統(tǒng)作為一個(gè)完整自主的系統(tǒng)，在維護(hù)和調(diào)整動(dòng)物生命活動(dòng)中起重要作用。免疫功能逐漸下降是機(jī)體衰老最突出的特征，而免疫功能失調(diào)又加速機(jī)體的衰老。免疫器官指數(shù)可以初步反映機(jī)體非特異性免疫力的強(qiáng)弱。本研究結(jié)果顯示，與模型對(duì)照組比較，3個(gè)劑量的馬齒莧多糖治療組小鼠的胸腺、脾系數(shù)顯著增加，說明馬齒莧多糖具有提高機(jī)體免疫能力的作用，進(jìn)一步證實(shí)其具有抗衰老作用。

人們根據(jù)對(duì)衰老機(jī)理的不同理解，提出了許多種衰老學(xué)說，主要有自由基學(xué)說、免疫功能下降學(xué)說、腦中心學(xué)說、代謝失調(diào)學(xué)說等，其中自由基學(xué)說能比較清楚地解釋機(jī)體衰老過程中的種種癥狀，是目前最有說服力的學(xué)說。自由基學(xué)說認(rèn)為：在正常情況下，機(jī)體的抗氧化系統(tǒng)等使自由基的生成與清除保持平衡；但是，隨著年齡的增長(zhǎng)，機(jī)體內(nèi)抗氧化酶活性逐漸減弱，清除自由基劑能力下降，從而減弱了對(duì)自由基損害的防御能力，使機(jī)體組織器官容易受損，加速了機(jī)體的衰老。SOD、GPx是機(jī)體內(nèi)清除自由基主要的抗氧化酶，SOD的作用在于阻斷超氧陰離子自由基引發(fā)自由基的一級(jí)反應(yīng)，從而減少其他活性氧的生成；GPx能夠特異地催化還原型谷胱甘肽與ROS反應(yīng)，從而保護(hù)生物膜免受ROS的損害，維持細(xì)胞的正常功能；MDA 是脂質(zhì)過氧化的產(chǎn)物，其含量的高低間接反映了機(jī)體細(xì)胞受自由基攻擊的嚴(yán)重程度；所以血清與組織中SOD、GPx的活性及MDA的含量都是反映機(jī)體氧化應(yīng)激水平即清除自由基能力的指標(biāo)[8]。本研究結(jié)果顯示，與模型對(duì)照組比較，正常對(duì)照組與3個(gè)劑量馬齒莧多糖治療組小鼠血清與肝臟中SOD、GPx活性均顯著增強(qiáng)，MDA含量均顯著降低，說明馬齒莧多糖能增強(qiáng)機(jī)體衰老狀態(tài)下內(nèi)源性抗氧化酶活性，減弱脂質(zhì)過氧化，從而減輕機(jī)體組織損傷以延緩衰老。

綜上所述，馬齒莧多糖能明顯改善D-半乳糖誘導(dǎo)亞急性衰老小鼠模型的學(xué)習(xí)記憶障礙，提高機(jī)體的免疫能力，具有抗衰老作用；其機(jī)制可能與增強(qiáng)內(nèi)源性抗氧化酶活性、減弱機(jī)體衰老狀態(tài)下的脂質(zhì)過氧化有關(guān)。

參考文獻(xiàn)：

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[2]Shen H，Tang G，Zeng G，et al. Purification and characterization of an antitumor polysaccharide from Portulaca oleracea L[J]. Carbohydrate Polymers，2013，93（2）：395-400.

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[6]楊偉麗，劉青，祁梅，等. 海帶多糖對(duì)小鼠的抗衰老作用[J]. 蘭州大學(xué)學(xué)報(bào)：醫(yī)學(xué)版，2009，35（4）：46-48.

[7]鄭王巧，郭春花，張曉一，等. 葛根黃酮對(duì)亞急性衰老模型小鼠抗氧化作用的研究[J]. 四川生理科學(xué)雜志，2009，31（4）：145-146.

[8]Pérez V I，Bokov A，van Remmen H，et al. Is the oxidative stress theory of aging dead？[J]. Biochimica et Biophysica Acta，2009，1790（10）：1005-1014.endprint

1.7相關(guān)生化指標(biāo)測(cè)定

第8周灌胃結(jié)束當(dāng)天，小鼠稱重，摘眼球取血；常規(guī)分離血清。然后解剖取胸腺、脾臟、肝臟進(jìn)行相關(guān)生化指標(biāo)測(cè)定。血清與肝臟中SOD、GPx、MDA的含量測(cè)定按試劑盒推薦的程序；胸腺、脾系數(shù)按下列公式計(jì)算：

胸腺（脾）系數(shù)=質(zhì)量（mg）體重（g）×100

1.8統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

數(shù)據(jù)用“平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS 10.0 軟件分析，顯著性水平為α<0.05。

2結(jié)果與分析

2.1馬齒莧多糖對(duì)小鼠水迷宮試驗(yàn)的影響

由表1可知，與正常對(duì)照組比較，模型對(duì)照組小鼠的平臺(tái)潛伏期時(shí)間與錯(cuò)誤次數(shù)明顯增加，說明D-半乳糖造模成功（P<0.05），小鼠的腦神經(jīng)元產(chǎn)生了退行性變化，對(duì)其學(xué)習(xí)記憶能力產(chǎn)生了影響。與模型對(duì)照組相比，3個(gè)劑量的馬齒莧多糖治療組小鼠的平臺(tái)潛伏期時(shí)間顯著減少（P<0.05），3個(gè)劑量馬齒莧多糖治療組小鼠錯(cuò)誤次數(shù)顯著降低（P<005），說明馬齒莧多糖明對(duì)D-半乳糖致亞急性衰老小鼠的學(xué)習(xí)記憶障礙有顯著的改善作用。

3結(jié)論與討論

衰老或老化是生物隨著時(shí)間的推移而自發(fā)的必然過程，這個(gè)過程從生長(zhǎng)期結(jié)束后逐漸開始，它的影響要到老年期通過機(jī)體功能、器官、細(xì)胞、蛋白質(zhì)和酶分子的各種變化而逐漸顯現(xiàn)出來，主要表現(xiàn)為機(jī)體結(jié)構(gòu)退行性變和機(jī)能衰退、適應(yīng)性和抵抗力減退[5]。目前，常用的衰老動(dòng)物模型有醋酸潑尼松所致的腎虛衰老小鼠、D-半乳糖所致的亞急性衰老模型、臭氧所致免疫功能低下衰老小鼠、環(huán)磷酰胺所致免疫功能低下與記憶缺失小鼠等。其中，D-半乳糖所致的亞急性衰老模型因其變化明顯，模型穩(wěn)定，在天然產(chǎn)物抗衰老研究中被廣泛應(yīng)用[6]。研究認(rèn)為，小鼠連續(xù)注射D-半乳糖后，機(jī)體細(xì)胞內(nèi)半乳糖濃度增高，在醛糖還原酶催化下，得到的還原產(chǎn)物半乳糖醇不能被細(xì)胞代謝而堆積在細(xì)胞內(nèi)，影響正常滲透壓，導(dǎo)致細(xì)胞腫脹，致使小鼠組織細(xì)胞出現(xiàn)衰老時(shí)的退行性改變以及功能的改變；同時(shí)D-半乳糖在體內(nèi)氧化產(chǎn)生的大量自由基超過機(jī)體的清除能力，導(dǎo)致自由基的堆積，從而誘發(fā)氧化應(yīng)激，引發(fā)脂質(zhì)過氧化的鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，并且脂質(zhì)過氧化的分解終產(chǎn)物如MDA可與DNA或RNA及蛋白質(zhì)、磷脂等物質(zhì)結(jié)合，使細(xì)胞膜成分改變，引起神經(jīng)系統(tǒng)的功能障礙、免疫力低下等一系列癥狀，從而促進(jìn)衰老。此外，相關(guān)研究顯示，造模時(shí)給予半乳糖的量超過100 mg/kg時(shí)，小鼠學(xué)習(xí)記憶的能力不再隨劑量的增加而減退[7]，所以本試驗(yàn)將半乳糖的量定為 100 mg/kg。結(jié)果顯示，與正常對(duì)照組比較，模型對(duì)照組小鼠的平臺(tái)潛伏期時(shí)間與錯(cuò)誤次數(shù)顯著增加，胸腺和脾系數(shù)顯著降低，說明采用D-半乳糖造模成功。

衰老后發(fā)生學(xué)習(xí)記憶能力下降是衰老的主要特征之一，水迷宮試驗(yàn)是反映小鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力的經(jīng)典方法。本研究結(jié)果顯示，與模型對(duì)照組比較，3個(gè)劑量的馬齒莧多糖治療組小鼠的平臺(tái)潛伏期時(shí)間明顯減少，中、高劑量馬齒莧多糖治療組小鼠錯(cuò)誤次數(shù)顯著減少，這說明馬齒莧多糖對(duì)D-半乳糖致亞急性衰老模型的學(xué)習(xí)記憶障礙有顯著的改善作用。

免疫系統(tǒng)作為一個(gè)完整自主的系統(tǒng)，在維護(hù)和調(diào)整動(dòng)物生命活動(dòng)中起重要作用。免疫功能逐漸下降是機(jī)體衰老最突出的特征，而免疫功能失調(diào)又加速機(jī)體的衰老。免疫器官指數(shù)可以初步反映機(jī)體非特異性免疫力的強(qiáng)弱。本研究結(jié)果顯示，與模型對(duì)照組比較，3個(gè)劑量的馬齒莧多糖治療組小鼠的胸腺、脾系數(shù)顯著增加，說明馬齒莧多糖具有提高機(jī)體免疫能力的作用，進(jìn)一步證實(shí)其具有抗衰老作用。

人們根據(jù)對(duì)衰老機(jī)理的不同理解，提出了許多種衰老學(xué)說，主要有自由基學(xué)說、免疫功能下降學(xué)說、腦中心學(xué)說、代謝失調(diào)學(xué)說等，其中自由基學(xué)說能比較清楚地解釋機(jī)體衰老過程中的種種癥狀，是目前最有說服力的學(xué)說。自由基學(xué)說認(rèn)為：在正常情況下，機(jī)體的抗氧化系統(tǒng)等使自由基的生成與清除保持平衡；但是，隨著年齡的增長(zhǎng)，機(jī)體內(nèi)抗氧化酶活性逐漸減弱，清除自由基劑能力下降，從而減弱了對(duì)自由基損害的防御能力，使機(jī)體組織器官容易受損，加速了機(jī)體的衰老。SOD、GPx是機(jī)體內(nèi)清除自由基主要的抗氧化酶，SOD的作用在于阻斷超氧陰離子自由基引發(fā)自由基的一級(jí)反應(yīng)，從而減少其他活性氧的生成；GPx能夠特異地催化還原型谷胱甘肽與ROS反應(yīng)，從而保護(hù)生物膜免受ROS的損害，維持細(xì)胞的正常功能；MDA 是脂質(zhì)過氧化的產(chǎn)物，其含量的高低間接反映了機(jī)體細(xì)胞受自由基攻擊的嚴(yán)重程度；所以血清與組織中SOD、GPx的活性及MDA的含量都是反映機(jī)體氧化應(yīng)激水平即清除自由基能力的指標(biāo)[8]。本研究結(jié)果顯示，與模型對(duì)照組比較，正常對(duì)照組與3個(gè)劑量馬齒莧多糖治療組小鼠血清與肝臟中SOD、GPx活性均顯著增強(qiáng)，MDA含量均顯著降低，說明馬齒莧多糖能增強(qiáng)機(jī)體衰老狀態(tài)下內(nèi)源性抗氧化酶活性，減弱脂質(zhì)過氧化，從而減輕機(jī)體組織損傷以延緩衰老。

綜上所述，馬齒莧多糖能明顯改善D-半乳糖誘導(dǎo)亞急性衰老小鼠模型的學(xué)習(xí)記憶障礙，提高機(jī)體的免疫能力，具有抗衰老作用；其機(jī)制可能與增強(qiáng)內(nèi)源性抗氧化酶活性、減弱機(jī)體衰老狀態(tài)下的脂質(zhì)過氧化有關(guān)。

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[8]Pérez V I，Bokov A，van Remmen H，et al. Is the oxidative stress theory of aging dead？[J]. Biochimica et Biophysica Acta，2009，1790（10）：1005-1014.endprint