摘要：研究微波輔助提取、反相高效液相色譜法測定花椰菜中維生素C含量的方法。將花椰菜勻漿后，以1%草酸為萃取劑，微波提取、凈化后，采用恒流的方法進行液相色譜定量檢測，以0.1%草酸溶液為流動相，流速 1.0 mL/min，采用C18反相色譜柱分離，在254 nm波長下檢測。結果表明，維生素C濃度在0.02～0.12 mg/mL范圍內線性良好，相關系數(shù)為0.999 6，檢測限0.02 mg/kg，回收率在99.9%～104.6%之間，相對標準偏差為1.20%。說明微波輔助法、反相高效液相色譜法能有效提取蔬菜中的維生素C，且測定結果穩(wěn)定、重現(xiàn)性好，可以用于蔬菜中維生素C的檢測。

關鍵詞：微波提取；高效液相色譜法；花椰菜；維生素C

中圖分類號： O657.7+2 文獻標志碼： A 文章編號：1002-1302（2014）04-0256-02

收稿日期：2013-08-07

基金項目：江蘇省南通市農村科技創(chuàng)新及產業(yè)化項目（編號：HL2012025）。

作者簡介：吳海燕（1978—），女，江蘇南通人，碩士，講師，主要從事食品綜合利用、食品安全檢測研究。Tel：（0513）81050523；E-mail：why022@126.com。維生素C別稱抗壞血酸，是維持人體正常生理代謝不可缺少的一類有機化合物，人體自身不能合成，必須由膳食供給，維生素C廣泛存在于新鮮的水果、蔬菜中[1]?；ㄒ耸鞘只剖|薹屬植物，營養(yǎng)豐富，富含蛋白質、食物纖維、維生素等。有研究表明，花椰菜中含有豐富的維生素C，長期食用能提高人體的免疫功能，促進肝臟解毒；同時也能起到阻止癌前病變細胞形成的作用，從而可以從一定程度上預防癌癥[2]。維生素C含量的測定方法通常有以氧化還原為基礎的比色法或者以衍生反應為基礎的熒光法[3]，但是這些方法所需的試劑多且操作復雜。由于維生素C有較強的還原作用，在處理時容易使樣品中的維生素C損失，從而影響測定的準確度和精確度。高效液相色譜法具有高效、穩(wěn)定、可靠等特點，特別是在待測樣品較多的情況下，借助儀器分析能更快更準確地進行維生素C含量的測定。近年來已有一些報道用高效液相色譜法測定維生素C的含量[4-6]，但是在樣品制備過程中存在提取率低、操作繁瑣、萃取劑用量大等問題。微波提取是一種較新的樣品前處理方法，與傳統(tǒng)的提取法相比，其最大的優(yōu)點是提取的產品雜質含量低、有效成分含量高且提取效率高[7]，目前這種新的微波提取技術已逐漸被應用于天然植物有效成分、生物活性成分的提取研究中[8-12]。本研究以期建立微波提取、反相高效液相色譜法測定花椰菜中維生素C含量的方法，為花椰菜中維生素C的含量測定提供試驗資料。

1材料與方法

1.1主要試劑與材料

主要試劑為：甲醇，色譜純；維生素C、草酸等試劑，國產分析純；所有試驗用水均為超純水。主要試驗材料為：0.45 μm 濾膜，國藥集團化學試劑有限公司；花椰菜，市售。

1.2主要儀器與設備

試驗用主要儀器與設備有Waters高效液相色譜儀、Waters1525泵、Waters2487紫外檢測器、Breeze色譜系統(tǒng)管理工作站、液相平頭微量進樣器（Eppendorf）、HR2084食品制樣器（飛利浦）、CW-2000A型超聲-微波協(xié)同萃取儀（上海新拓）、Millipore超純水機、隔膜真空泵（天津騰達）、TU-1901紫外可見分光光度計（北京通用普析）、KQ3200超聲脫氣機（昆山市超聲儀器有限公司）、Symmetry C18色譜柱。

1.3試驗方法

1.3.1色譜條件Symmetry C18色譜柱柱長100 mm，內徑 4.6 mm，顆粒大小5.0 μm，檢測波長254 nm，流動相為0.1% （體積分數(shù)）草酸溶液，流速1 mL/min，進樣量25 μL，柱溫 25 ℃；以保留時間定性，待液相色譜穩(wěn)定后進樣分析，以峰面積外標法定量。

1.3.2樣品處理稱取100 g花椰菜樣品，迅速切碎后置于食品制樣器中，加入100 mL 2%草酸溶液制成勻漿。準確稱取5.00 g勻漿樣品，以30 mL 1%草酸為萃取溶劑，微波功率設為200 W，萃取時間為15 min，萃取溫度設定為45 ℃，平行萃取2次[6]。萃取液過濾后，用1%草酸溶液定容至50 mL制成待測液。待測液用0.45 μm濾膜過濾后按“1.3.1”節(jié)色譜條件進行HPLC測定。

1.3.3線性關系分析維生素C標準溶液的制備：準確稱取20 mg維生素C對照品，用0.1%草酸溶解后轉移至 100 mL 棕色容量瓶中，定容并制成維生素C標準儲備液。再分別準確量取1、2、3、4、5、6 mL維生素C標準儲備液于 10 mL 棕色容量瓶中，用0.1%草酸溶解并定容，分別制成濃度為0.02、0.04、0.06、0.08、0.10、0.12 mg/mL的系列標準維生素C標準溶液，用0.45 μm濾膜過濾后按“1.3.1”節(jié)色譜條件進行HPLC測定。每個濃度進樣3次，以平均峰面積的積分值對進樣濃度（mg/mL）進行直線回歸。

1.3.4精密度試驗取所制得樣品，按照“1.3.1”節(jié)色譜條件重復進樣6次，測定維生素C的精密度。

1.3.5回收率試驗采用加樣回收法，精密稱取適量勻漿樣品，加入維生素C標準品，按“1.3.2”節(jié)方法進行處理，按含量測定方法測定維生素C的回收率。

1.3.6最低檢測限的計算以產生3倍儀器噪聲水平的進樣量為檢出限[13]。

2結果與分析

2.1色譜分離結果

液相色譜分離效果的主要影響因素為色譜柱的類別、流動相、流速。在“1.3.1”的色譜條件下，維生素C標準品溶液、花椰菜樣品的色譜圖分別見圖1、圖2，可以看出所有樣品均能實現(xiàn)基線分離，而且峰形能滿足測定要求，維生素C的保留時間為2.868 min，檢測限為0.02 mg/kg。endprint

2.2標準工作曲線

以3次進樣的平均峰面積為響應值，以維生素C標準品的進樣濃度（mg/mL）為自變量，求得直線回歸方程為：y=876 060x+2 750.9，r2=0.999 6，標準曲線在0.02～0.12 mg/mL 范圍內線性良好。

2.3精密度試驗

將同一花椰菜樣品按照“1.3.1”中的色譜條件重復進樣6次，測得花椰菜中維生素C的含量分別為632.0、637.7、635.2、650.8、641.8、649.5 mg/kg，平均含量為641.2 mg/kg，本測定試驗的相對標準偏差為1.20%，表明本方法的精密度高，重現(xiàn)性較好。

2.4回收率試驗

分別稱取3份5.00 g勻漿的花椰菜樣品，分別加入1、2、5 mL的0.20 mg/mL維生素C標準液，按“1.3.2”節(jié)方法提取，按“1.3.1”節(jié)的色譜條件測定維生素C含量，每個混合樣品測定3次，取平均值。結果（表1）表明，3個不同添加量試樣的回收率在99.9%～104.6%之間，平均回收率102.4%，表明采用微波提取、反相高效液相色譜法測定花椰菜中維生素C含量的方法準確度好，符合色譜定量分析的準確度要求。

3結論

本試驗采用微波輔助提取，過濾后用液相測定方法來測定花椰菜中維生素C含量。結果表明，本方法的線性范圍為0.02～0.12 mg/mL，檢測限0.02 mg/kg，回收率在99.9%～104.6%之間，平均回收率為102.4%，相對標準偏差為120%。由于維生素C性質不穩(wěn)定，易氧化，采用微波輔助提取，不但加快了提取進程，縮短了樣品制備時間，避免維生素C的損失，同時有效提取樣品中的維生素C，測定的準確度和精密度好，可用于蔬菜中維生素C含量的定量測定。

參考文獻：

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[13]吳海燕，陳建軍.蔬菜中多種有機磷農藥殘留氣相色譜分析法[J]. 食品與機械，2010，26（4）：76-77，83.endprint

2.2標準工作曲線

以3次進樣的平均峰面積為響應值，以維生素C標準品的進樣濃度（mg/mL）為自變量，求得直線回歸方程為：y=876 060x+2 750.9，r2=0.999 6，標準曲線在0.02～0.12 mg/mL 范圍內線性良好。

2.3精密度試驗

將同一花椰菜樣品按照“1.3.1”中的色譜條件重復進樣6次，測得花椰菜中維生素C的含量分別為632.0、637.7、635.2、650.8、641.8、649.5 mg/kg，平均含量為641.2 mg/kg，本測定試驗的相對標準偏差為1.20%，表明本方法的精密度高，重現(xiàn)性較好。

2.4回收率試驗

分別稱取3份5.00 g勻漿的花椰菜樣品，分別加入1、2、5 mL的0.20 mg/mL維生素C標準液，按“1.3.2”節(jié)方法提取，按“1.3.1”節(jié)的色譜條件測定維生素C含量，每個混合樣品測定3次，取平均值。結果（表1）表明，3個不同添加量試樣的回收率在99.9%～104.6%之間，平均回收率102.4%，表明采用微波提取、反相高效液相色譜法測定花椰菜中維生素C含量的方法準確度好，符合色譜定量分析的準確度要求。

3結論

本試驗采用微波輔助提取，過濾后用液相測定方法來測定花椰菜中維生素C含量。結果表明，本方法的線性范圍為0.02～0.12 mg/mL，檢測限0.02 mg/kg，回收率在99.9%～104.6%之間，平均回收率為102.4%，相對標準偏差為120%。由于維生素C性質不穩(wěn)定，易氧化，采用微波輔助提取，不但加快了提取進程，縮短了樣品制備時間，避免維生素C的損失，同時有效提取樣品中的維生素C，測定的準確度和精密度好，可用于蔬菜中維生素C含量的定量測定。

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2.2標準工作曲線

以3次進樣的平均峰面積為響應值，以維生素C標準品的進樣濃度（mg/mL）為自變量，求得直線回歸方程為：y=876 060x+2 750.9，r2=0.999 6，標準曲線在0.02～0.12 mg/mL 范圍內線性良好。

2.3精密度試驗

將同一花椰菜樣品按照“1.3.1”中的色譜條件重復進樣6次，測得花椰菜中維生素C的含量分別為632.0、637.7、635.2、650.8、641.8、649.5 mg/kg，平均含量為641.2 mg/kg，本測定試驗的相對標準偏差為1.20%，表明本方法的精密度高，重現(xiàn)性較好。

2.4回收率試驗

分別稱取3份5.00 g勻漿的花椰菜樣品，分別加入1、2、5 mL的0.20 mg/mL維生素C標準液，按“1.3.2”節(jié)方法提取，按“1.3.1”節(jié)的色譜條件測定維生素C含量，每個混合樣品測定3次，取平均值。結果（表1）表明，3個不同添加量試樣的回收率在99.9%～104.6%之間，平均回收率102.4%，表明采用微波提取、反相高效液相色譜法測定花椰菜中維生素C含量的方法準確度好，符合色譜定量分析的準確度要求。

3結論

本試驗采用微波輔助提取，過濾后用液相測定方法來測定花椰菜中維生素C含量。結果表明，本方法的線性范圍為0.02～0.12 mg/mL，檢測限0.02 mg/kg，回收率在99.9%～104.6%之間，平均回收率為102.4%，相對標準偏差為120%。由于維生素C性質不穩(wěn)定，易氧化，采用微波輔助提取，不但加快了提取進程，縮短了樣品制備時間，避免維生素C的損失，同時有效提取樣品中的維生素C，測定的準確度和精密度好，可用于蔬菜中維生素C含量的定量測定。

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[10]嚴娟，蔡志翔，張斌斌，等. 桃果肉總酚提取和測定方法的研究[J]. 江蘇農業(yè)學報，2013，29（3）：642-647.

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[13]吳海燕，陳建軍.蔬菜中多種有機磷農藥殘留氣相色譜分析法[J]. 食品與機械，2010，26（4）：76-77，83.endprint