于 萍，隋飛飛，陳艷秋，冉麗萍

(延邊大學(xué)農(nóng)學(xué)院，吉林 延吉 133002)

白耙齒菌菌絲培養(yǎng)環(huán)境條件的研究

于 萍，隋飛飛，陳艷秋，冉麗萍*

(延邊大學(xué)農(nóng)學(xué)院，吉林 延吉 133002)

以菌絲干重和菌絲生長速度為考核指標(biāo)，通過單因素試驗，對白耙齒菌菌絲生長的培養(yǎng)基配方、溫度、pH值及通氣條件進(jìn)行篩選。試驗結(jié)果表明，最適培養(yǎng)基為YPAD培養(yǎng)基，最適溫度為32℃，最適pH值為7.0，在正常通氣培養(yǎng)條件下有利于菌絲生長和干重積累。

白耙齒菌；菌絲；培養(yǎng)環(huán)境條件

白耙齒菌Irpexlacteus(Fr.) Fr.，又名白囊孔菌、白囊耙齒菌，分類學(xué)上隸屬于擔(dān)子菌亞門(Basidiomycetes)、層菌綱(Hymenomycetes)、非褶菌目(Aphyllophorales)、多孔菌科(Polyporaceae)、耙齒菌屬(IrpexFr.)[1]。白耙齒菌子實體為一年生擔(dān)子果，形態(tài)結(jié)構(gòu)多變，菌蓋表面乳白色至淺黃色，子實層體奶油色至淡黃色，幼時孔狀，成熟后撕裂成耙齒狀[2]。

在國外，白耙齒菌的應(yīng)用主要集中在脫色合成染料[3，4]和降解土壤中各種頑固有機(jī)污染物[5]。在我國白耙齒菌主要用作藥物制劑，目前已開發(fā)出多種藥劑產(chǎn)品，如腎炎康、益腎康膠囊等[6]。白耙齒菌含有多種藥用成分[7-9]，具有很高的藥用價值以及市場開發(fā)潛力。目前對白耙齒菌的研究主要集中在化學(xué)成分及藥理作用上，人工培養(yǎng)研究較少，因此本試驗在篩選其最佳培養(yǎng)基配方的基礎(chǔ)上對其環(huán)境條件進(jìn)行研究，為人工馴化栽培奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 供試菌株

供試菌株子實體由課題組成員于2010年采自長白山林區(qū)，經(jīng)吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)圖力古爾教授鑒定為白耙齒菌。將子實體帶回實驗室進(jìn)行組織分離，在PDA培養(yǎng)基上純化獲得供試菌株。菌種由延邊大學(xué)農(nóng)學(xué)院應(yīng)用真菌實驗室保存。

1.2 試驗方法

1.2.1 不同培養(yǎng)基對白耙齒菌菌絲生長的影響

培養(yǎng)基分別采用PDA培養(yǎng)基、CPDA培養(yǎng)基、YPAD培養(yǎng)基、PGY培養(yǎng)基、TY培養(yǎng)基、SEM培養(yǎng)基、1號培養(yǎng)基(葡萄糖 10 g·L-1、酵母膏 10 g·L-1、淀粉 10 g·L-1、NaCl 5 g·L-1、CaCO33 g·L-1、瓊脂 20 g·L-1)。每個處理重復(fù)5次，采用平板培養(yǎng)法，每個培養(yǎng)皿中裝培養(yǎng)基35 mL，高溫高壓滅菌后，接直徑為0.5 cm的菌塊于培養(yǎng)皿中央，在25℃恒溫箱中進(jìn)行暗培養(yǎng)。待菌塊發(fā)菌后，利用十字交叉法測定菌落直徑，定時觀察并記錄菌絲生長速度、菌絲長勢及菌落邊緣整齊度等特征。待菌絲長滿后刮取菌絲，于45℃恒溫箱中烘干后，采用電子天平(余姚市金諾天平儀器有限公司，精確度為萬分之一)稱量并記錄菌絲干重。數(shù)據(jù)采用SPSS 11.5軟件中的Duncan檢驗進(jìn)行差異顯著性分析(顯著水平為p<0.05)。

1.2.2 不同溫度對白耙齒菌菌絲生長的影響

利用獲得的最佳培養(yǎng)基作為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，分別設(shè)置20℃、23℃、26℃、29℃、32℃、35℃六個處理。其它試驗方法、步驟、測定項目同1.2.1。

1.2.3 不同pH值對白耙齒菌菌絲生長的影響

利用獲得的最佳培養(yǎng)基作為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，分別設(shè)置pH 4.5、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0八個處理。其它試驗方法、步驟、測定項目同1.2.1。

1.2.4 不同通氣條件對白耙齒菌菌絲生長的影響

利用獲得的最佳培養(yǎng)基作為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，分別設(shè)置單層牛皮紙包扎(A)、單層聚乙烯塑料薄膜包扎(B)2個處理，以不包扎(C)作為對照。其它試驗方法、步驟、測定項目同1.2.1。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同培養(yǎng)基對白耙齒菌菌絲生長的影響

不同培養(yǎng)基對白耙齒菌菌絲生長的影響見表1。

表1 不同培養(yǎng)基對白耙齒菌菌絲生長的影響

注：+表示生長稀疏；++表示生長較致密；+++表示生長致密；小寫字母表示P<0.05水平上的差異顯著性。下同。

從表1中可以看出，白耙齒菌菌絲可以利用多種培養(yǎng)基，但不同培養(yǎng)基對白耙齒菌菌絲生長的影響明顯不同。在CPDA培養(yǎng)基上菌絲生長速度最快，但菌絲長勢弱；在YPAD培養(yǎng)基上培養(yǎng)的白耙齒菌菌絲粗壯，潔白，邊緣整齊，菌絲干重顯著高于其他處理。因此，白耙齒菌菌絲生長的最適培養(yǎng)基為YPAD培養(yǎng)基。

2.2 不同溫度對白耙齒菌菌絲生長的影響

不同溫度對白耙齒菌菌絲生長的影響明顯不同，結(jié)果見表2。

表2 不同溫度對白耙齒菌菌絲生長的影響

如表2所示，白耙齒菌菌絲在20℃～35℃范圍內(nèi)均能生長，但不同溫度下長勢明顯不同。在20℃～32℃范圍內(nèi)，菌絲的日均生長速度和菌絲干重隨溫度的升高而增加，隨后菌絲干重隨溫度的升高而減少。32℃時菌絲粗壯，濃密，邊緣整齊，干重最大，為 187.18 mg 。因此，白耙齒菌菌絲生長的最適生長溫度為32℃。

2.3 不同pH值對白耙齒菌菌絲生長的影響

不同pH值對白耙齒菌菌絲生長速度和干重的影響明顯不同，結(jié)果見表3。

表3 不同pH值對白耙齒菌菌絲生長的影響

由表3可見，pH值在4.5～8.0之間菌絲均能生長。pH值在4.5～7.0范圍內(nèi)時，菌絲干重隨pH值的增大而增大，pH值在7.0～8.0范圍內(nèi)時，菌絲干重和日均生長速度隨pH值的增大而減小。pH值為7.0時，菌絲濃密，粗壯，邊緣整齊，菌絲干重最大，為 251.31 mg。因此，白耙齒菌菌絲生長的最適宜pH值為7.0。

2.4 不同通氣條件對白耙齒菌菌絲生長的影響

不同通氣條件對菌絲生長沒有明顯影響，結(jié)果見表4。

表4 不同通氣條件對白耙齒菌菌絲生長的影響。

由表4可見，3種處理下菌絲生長速度沒有明顯差異，但不包扎處理(C)時菌絲干重最大，為 113.43 mg，其次是牛皮紙包扎(A)，二者差異不顯著。采用單層聚乙烯塑料薄膜(B)包扎時，菌絲長勢較弱，說明在正常通氣培養(yǎng)條件下有利于白耙齒菌菌絲生長和干重積累。

3 小結(jié)

試驗證明，白耙齒菌菌絲生長的最佳培養(yǎng)基配方為YPAD培養(yǎng)基(酵母膏 10 g·L-1、蛋白胨 20 g·L-1、葡萄糖 20 g·L-1、瓊脂 20 g·L-1)；29℃～32℃范圍內(nèi)有利于白耙齒菌生長，最適培養(yǎng)溫度為32℃；pH在6.5～7.5范圍內(nèi)適合白耙齒菌菌絲生長，以pH7.0為最佳；正常通氣培養(yǎng)條件下有利于白耙齒菌菌絲生長和干重積累。大多數(shù)食(藥)用菌的最適溫度為25℃左右，白耙齒菌最適溫度為32℃，較大多數(shù)食(藥)用菌偏高，但與有柄靈芝[10]和香味全緣孔菌[11]相差不大。白耙齒菌液體培養(yǎng)及出菇試驗還有待于進(jìn)一步研究。

[1]圖力古爾，戴玉成. 長白山主要食藥用木腐真菌多樣性及其保育[J]. 菌物研究，2004，2(2)：26.

[2]戴玉成，圖力古爾. 中國東北野生食藥用真菌圖志[M]. 北京：科學(xué)出版社，2007：100.

[4]Duraisamy Kalpana, Natarajan Velmurugan, Jae Hong Shim,et al. Biodecolorization and biodegradation of reactive Levafix Blue E-RA granulate dye by the white rot fungusIrpexlacteus[J]. Journal of Environmental Management, 2012, 111(30): 142-149.

[5]Eduard Borràs, Gloria Caminal, Montserrat Sarrà, et al. Effect of soil bactera on the ability of polycyclic aromatic hydrocarbonsb (PAHs) removal byTrametesversicolorandIrpexlacteusfrom contaminated soil[J]. Soil Biology and Biochemistry, 2010, 42(12): 2087-2093.

[6]戴玉成，圖力古爾. 中國東北野生食藥用真菌圖志[M]. 北京：科學(xué)出版社，2007：100.

[7]楊真威，姜瑞芝，陳英紅，等. 耙齒菌糖蛋白的提取分離、理化性質(zhì)及抗炎活性[J]. 天然產(chǎn)物研究與開 發(fā)，2005，17(3)：280-282.

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[9]張蒙，杜琳娜，張野，等. 響應(yīng)面法結(jié)合滿意度函數(shù)優(yōu)化白囊耙齒菌發(fā)酵培養(yǎng)基[J]. 中國醫(yī)藥工業(yè)雜志，2011，42(1)：17-20.

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Research on Culture Conditions ofIrpexlacteusMycelia

YU Ping, SUI Fei-fei, CHEN Yan-qiu, RAN Li-ping

(Agricultural College of Yanbian University, YanjiJilin133002)

Take mycelium dry weight and growth rate as evaluation indexes, the best conditions forIrpexlacteuscultivation were screened through one-way analysis of variance. The results showed that the YPAD mycelium was most suitable for mycelial growth, and the optimal temperature and pH were 32℃ and 7.0 respectively. This study also indicated that the normal ventilation conditions was good for mycelial growth and accumulation of dry weight.

Irpexlacteus; Mycelial growth; Culture condition

于萍(1990-)，女，在讀碩士研究生，研究方向為特種植物資源與生物技術(shù)。

*通信作者： 冉麗萍，女，主要從事地方種質(zhì)資源開發(fā)與利用的研究。E-mail: cyq326@126.com

2014-07-25

S646.9

A

1003-8310(2014)05-0035-02