毛培新 賈 方 孫 雷 季 偉

（滄州出入境檢驗(yàn)檢疫局 河北滄州 061000）

柱前衍生-高效液相色譜法測(cè)定紅棗中阿維菌素和甲維鹽

毛培新 賈 方 孫 雷 季 偉

（滄州出入境檢驗(yàn)檢疫局 河北滄州 061000）

采用高效液相色譜熒光檢測(cè)器檢測(cè)建立了紅棗中阿維菌素和甲維鹽的多殘留檢測(cè)方法。樣品用乙腈提取，以HLB固相萃取柱凈化，經(jīng)N-甲基咪唑和三氟乙酸酐的乙腈溶液在室溫下進(jìn)行衍生后，進(jìn)行高效液相色譜熒光檢測(cè)器檢測(cè)分析。結(jié)果表明：阿維菌素和甲維鹽分別在5-100ng/g范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系，檢測(cè)限為2.5ng/g，定量限為5.0ng/g，平均回收率達(dá)到82.4％-104.9％。

阿維菌素；甲維鹽；高效液相色譜；紅棗

1 前言

阿維菌素類（AVMs）抗寄生蟲(chóng)藥，對(duì)很多害蟲(chóng)具有其他農(nóng)藥無(wú)法比擬的活性，目前對(duì)于多種果樹(shù)，具有廣譜、高效、安全等優(yōu)點(diǎn)，其中阿維菌素（AVM）、甲維鹽（EB)（全稱甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽） 應(yīng)用最為廣泛；目前，在國(guó)內(nèi)現(xiàn)行的標(biāo)準(zhǔn)中還沒(méi)有同時(shí)檢測(cè)植物源食品中AVM、EB的高效液相色譜的方法，液質(zhì)聯(lián)用的方法雖能夠同時(shí)檢測(cè)，但對(duì)設(shè)備要求較高，運(yùn)行成本較大，本工作利用柱前衍生-高效液相色譜熒光檢測(cè)法結(jié)合了農(nóng)業(yè)部781號(hào)公告-5-2006的方法，并進(jìn)行了條件優(yōu)化，對(duì)滄州地區(qū)紅棗中AVM、EB殘留量進(jìn)行檢測(cè)，分離效果理想[1]。

2 材料與方法

2.1 材料

2.1.1 儀器

1100型高效液相色譜儀：安捷倫公司， 配有熒光檢測(cè)器；IKA-T10均質(zhì)器：德國(guó)IKA公司；EVOR50氮吹儀：美國(guó)EVA儀器有限公司；500mg/6mL WatersHLB固相萃取柱：waters公司。

2.1.2 試劑

乙腈為色譜純：天津科密歐公司；無(wú)水硫酸鈉為分析純：天津光復(fù)試劑有限公司，經(jīng)600℃灼燒4h，放置于密封容器中備用。

條件化試劑：乙腈、水、三乙胺體積比為30：70：1混合溶液；衍生化試劑1：三氟乙酸酐、乙腈體積比為1：2混合溶液；衍生化試劑2：N-甲基咪唑、乙腈體積比為1：1混合溶液；AVM、EB標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：采用農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測(cè)所制備的100μg/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液；AVM、EB標(biāo)準(zhǔn)使用溶液：將100μg/mL標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，用乙腈配制成濃度為2μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)使用溶液。

2.2 方法

2.2.1 色譜條件

安捷倫C18液相色譜柱（250mm×4.6mm,5μm）；流動(dòng)相：乙腈-水（97：3）；柱溫為40℃流速1.0mL/ min；激發(fā)波長(zhǎng)（Ex）365 nm；發(fā)射波長(zhǎng)（Em）470nm。

2.2.2 標(biāo)準(zhǔn)工作曲線制備、檢出限的測(cè)定[2-4]

分別移取2μg/mL AVM、EB標(biāo)準(zhǔn)使用溶液25、50、100、200、400、500μL；置于10mL玻璃離心管中，分別加入300μL衍生化試劑1 和200μL衍生化試劑2，渦旋均勻后室溫反應(yīng)20min，以乙腈定容至1mL，按色譜條件對(duì)混合標(biāo)準(zhǔn)工作液系列進(jìn)行測(cè)定。將紅棗樣品粉碎后，稱取空白紅棗樣品5±0.05 g，做10個(gè)平行樣，按標(biāo)準(zhǔn)工作液衍生的方法進(jìn)行處理，計(jì)算空白樣品的噪音與對(duì)應(yīng)保留值處目標(biāo)物的峰高的比值，按3S/ N為檢測(cè)限，按10S/N為定量限。

2.2.3 樣品預(yù)處理

準(zhǔn)確稱取已粉碎的紅棗樣品5±0.05 g，置于50 mL玻璃離心管中，加入乙腈15 mL，以10000r/ min轉(zhuǎn)速均質(zhì)1min（約10000r/min），后以3000r/ min轉(zhuǎn)速離心5min，將上清液置于另一玻璃離心管中。向提取液中加入0.5mL三乙胺，加入純水至總體積約為50mL，確保水與提取液比例不小于3：2，否則待測(cè)物不能被吸附劑充分保留[5]。

HLB固相萃取柱依次以5ml乙腈和5mL條件化試劑進(jìn)行條件化，并在吸附劑上方約1mm厚的液層已保持吸附劑的潤(rùn)濕。在固相萃取柱上方加裝儲(chǔ)液器，將樣品提取液加入儲(chǔ)液器，抽真空，提取液完全通過(guò)固相萃取柱后，繼續(xù)保持抽真空狀態(tài)大約30min。以5mL乙腈淋洗固相萃取柱，收集洗脫液[6]。

將洗脫液在50℃下氮吹至干，分別加入300μL衍生化試劑1和200μL衍生化試劑2，渦旋均勻后室溫反應(yīng)20min，以乙腈定容至1mL，按色譜條件進(jìn)行測(cè)定。

3 結(jié)果與討論

3.1 色譜行為

在色譜條件下， AVM和EB衍生化產(chǎn)物的保留時(shí)間分別為11.3min、20.5min，峰形良好，見(jiàn)圖1、圖2，可見(jiàn)AVM和EB目標(biāo)峰不受雜質(zhì)及試劑的干擾，分離效果良好。

圖1 AVM和EB標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖

圖2 空白樣品

3.2 工作曲線及檢出限

表1 AVM和EB的線性方程、檢出限和定量限

3.3 樣品分析和回收試驗(yàn)

紅棗樣品中分別加入不同量的AVM、EB標(biāo)準(zhǔn)溶液，按實(shí)驗(yàn)方法經(jīng)提取、凈化、衍生后，按色譜條件進(jìn)行測(cè)定[7-9]（見(jiàn)圖3），回收率試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。

圖3 加標(biāo)空白紅棗樣品

表2 AVM和IVM添加回收率及精密度試驗(yàn)結(jié)果

本方法結(jié)合了農(nóng)業(yè)部781號(hào)公告-5-2006的方法，但本研究介紹的檢測(cè)方法在樣品前處理的過(guò)程中，衍生劑的用量、衍生時(shí)間均按照農(nóng)業(yè)部781號(hào)公告-5-2006的方法進(jìn)行，經(jīng)過(guò)反復(fù)的實(shí)驗(yàn)證明，本方法在植物源食品中同時(shí)檢測(cè)AVM、EB兩種物質(zhì)分類效果好，檢測(cè)限能夠滿足日常檢測(cè)的需求；與此同時(shí)，實(shí)驗(yàn)室結(jié)合日常檢測(cè)任務(wù)，對(duì)不同生產(chǎn)廠家15批次滄州轄區(qū)內(nèi)出口紅棗分別利用本方法、SN/T 2114-2008的方法進(jìn)行篩查檢測(cè)，陰性樣品、陽(yáng)性樣品檢測(cè)結(jié)果分布一致[10-11]，陽(yáng)性樣品檢出量相近，見(jiàn)表3。因此判斷該方法檢測(cè)AVM、EB結(jié)果可靠，可以應(yīng)用于日常檢測(cè)中。

表3 15批次樣品中AVM、EB檢測(cè)結(jié)果

（續(xù)表）

4 結(jié)論

本方法利用高效液相色譜熒光檢測(cè)紅棗中AVM、EB的殘留量，該方法操作簡(jiǎn)單，靈敏度高、重現(xiàn)性好，適合于大批量樣品檢測(cè)。

［1］ 柳王榮，楊仁斌，黃堯，等. 甲維鹽在水稻環(huán)境中的殘留分析方法[J]. 農(nóng)藥，2005，05：18-20.

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Determination of Avermectin and Emamectin Benzoate in Dried Red Jujubes Using Precolumn Derivation with HPLC

Mao Peixin, Jia Fang, Sun Lei, Ji Wei
(Cangzhou Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau, Cangzhou, Hebei, 061000)

Using HPLC with fluorescent detection,a multi-residue method was developed and validated for the simultaneous determination of marker residues of avermectin and Emamectin Benzoate in dried red jujubes. The samples were extracted by acetonitrile,and the avermectin and Emamectin Benzoate in the extract were purified by passing through HLB SPE column,derivated by 1-methylimidazole and trifluoroacetic anhydride in acetonitrile at room temperature subsequently. HPLC-FLD results showed that the calibration curves were linear within the working range of 5-100 ng/g for the two drugs. For the quantitative analysis, the limit of detection of the method for avermectin and Emamectin Benzoate was 2.5 ng/g, while the limit of quantitation for avermectin and Emamectin Benzoate was 5.0 ng/g respectively. The value of recovery of avermectin and Emamectin Benzoate were in the range of 82.4％-104.9％.

Ox Tendon; Avermectin; Emamectin Benzoate; HPLC; Multi-Residue Determination

O652.63