劉成剛，李建標(biāo)，孫紹權(quán)，史麗梅，程蘇琴，朱美財(cái)

·論著·

白癜風(fēng)患者血清25-(OH)D3水平檢測及其與白癜風(fēng)發(fā)病的相關(guān)性分析

劉成剛，李建標(biāo)，孫紹權(quán)，史麗梅，程蘇琴，朱美財(cái)

目的 檢測白癜風(fēng)患者血清25-(OH)D3和其他羥基化代謝物水平，探討該指標(biāo)與白癜風(fēng)發(fā)病的關(guān)系。方法采用真空采血管，空腹抽取140例白癜風(fēng)患者和60例健康體檢者靜脈血3 ml，1周內(nèi)用ELISA法進(jìn)行檢測。按血清25-(OH) D3水平分為足夠(74.1～250.0 nmol/L)、正常(47.7～74.0 nmol/L)、不足(25.0～47.6 nmol/L)、缺乏(＜25.0 nmol/L)4種水平，按年齡分為青少年組(5～18歲)、成年組(19～56歲)，分別與各年齡對照組進(jìn)行比較分析。結(jié)果 青少年白癜風(fēng)組血清25-(OH)D3處于足夠、正常、不足和缺乏水平的分別為0、7.4%、59.3%和33.3%，平均值為(30.6±10.5)nmol/L;青少年對照組分別為10.0%、43.3%、46.7%和0，平均值為(50.1±12.1)nmol/L，2組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。成年白癜風(fēng)組血清25-(OH)D3處于足夠、正常、不足和缺乏水平的分別為2.3%、9.3%、51.2%和37.2%，平均值為(33.2±14.5)nmol/L;成年對照組分別為0、20.0%、63.3%和16.7%，平均值為(37.2±10.7)nmol/L，2組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。結(jié)論 維生素D嚴(yán)重缺乏與白癜風(fēng)患者的發(fā)病有關(guān)，尤其是青少年白癜風(fēng)患者。

白癜風(fēng);25-(OH)D3;羥基化代謝物;相關(guān)性研究

白癜風(fēng)是常見的色素脫失性皮膚病，男女發(fā)病率無顯著差異，全球發(fā)病率0.1%～2%，且近年發(fā)病率有上升趨勢［1］。該病病因復(fù)雜，發(fā)病機(jī)制尚不清楚，主要有自身免疫學(xué)說、黑素細(xì)胞自身破壞學(xué)說、神經(jīng)化學(xué)因子學(xué)說和微量元素缺乏學(xué)說等假設(shè)［2－3］。目前國內(nèi)對白癜風(fēng)患者維生素D的檢測分析尚未見報(bào)道，筆者對2012年來我院就診的140名白癜風(fēng)患者血清25-(OH)D3及其羥基化代謝物進(jìn)行了測定，并就其與白癜風(fēng)發(fā)病的相關(guān)性進(jìn)行了分析，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 臨床資料 選取我院2012年1～12月門診就醫(yī)的140例白癜風(fēng)患者作為觀察對象，其中男72例，女68例，年齡5～56歲，平均28.8歲，所有患者均經(jīng)臨床診斷確診為白癜風(fēng)。同時(shí)選取健康體檢者60例作為對照組，其中男30例，女30例，年齡7～50歲，平均年齡26.5歲，2組患者性別構(gòu)成比例、年齡分布等一般資料經(jīng)過統(tǒng)計(jì)學(xué)分析比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。所有患者均知情同意，并排除嚴(yán)重肝腎疾病。根據(jù)美國國家骨質(zhì)疏松基金會(huì)和美國國家腎病基金會(huì)推薦標(biāo)準(zhǔn)，將25-(OH)D3檢測值分為缺乏(＜25.0 nmol/L)、不足(25.0～47.6 nmol/L)、正常(47.7～74.0 nmol/L)、足夠(74.1～250.0 nmol/L)4個(gè)水平，按年齡分成青少年組(5～18歲)54例、成年組(19～56歲)86例，分別與對照組相應(yīng)年齡段(各30例)進(jìn)行比較。

1.2 方法 (1)標(biāo)本采集:白癜風(fēng)患者和健康體檢者用真空采血管抽取空腹靜脈血3 ml，室溫靜置30 min后3 000 r/min離心10 min，分離血清，4℃保存，1周內(nèi)進(jìn)行檢測。(2)儀器、試劑:試劑盒采用英國Immunodiagnostic Systems Limited(IDS Ltd)的25-(OH)D3和其他羥基化代謝物水平檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫法)，操作按說明書進(jìn)行，全部實(shí)驗(yàn)和檢測定量結(jié)果在美國奧斯邦公司的Alicai全自動(dòng)酶聯(lián)免疫儀完成。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 各范圍組間符合率的比較采用χ2檢驗(yàn)，數(shù)值采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，組間均數(shù)比較采用t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 青少年白癜風(fēng)患者與同年齡段對照組血清25-(OH)D3比較 青少年白癜風(fēng)組與同年齡段對照組比較，25-(OH)D3處于正常、缺乏水平的百分比和平均值差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。見表1。

2.1 成年白癜風(fēng)患者與同年齡段對照組血清25-(OH)D3比較 成年白癜風(fēng)組與同年齡段對照組比較，25-(OH)D3處于缺乏水平的百分比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見表2。

3 討論

表1 青少年白癜風(fēng)患者與同年齡段對照組25-(OH)D3水平比較

表2 成年白癜風(fēng)患者與同年齡段對照組25-(OH)D3水平比較

維生素D是一個(gè)脂溶性維生素，1，25-(OH)2D3是維生素D的活性形式，體內(nèi)多種真核細(xì)胞包括黑素細(xì)胞表面均存在維生素D受體(VDR)，1，25-(OH)2D3通過與存在于細(xì)胞表面及細(xì)胞核內(nèi)的VDR結(jié)合發(fā)揮廣泛的生物學(xué)效應(yīng)［4］，除調(diào)節(jié)機(jī)體鈣磷平衡外，還具有抗炎、調(diào)節(jié)免疫、促進(jìn)細(xì)胞分化、抗腫瘤及促進(jìn)黑素合成的調(diào)節(jié)作用［5］。1，25-(OH)2D3半衰期大約15 h，25-(OH)D3的半衰期大約15 d，因而血液中游離的25-(OH)D3被認(rèn)為是測定機(jī)體維生素D狀態(tài)的最可靠指標(biāo)。Bik等［2］報(bào)道白癜風(fēng)患者體內(nèi)存在鈣平衡紊亂，提出1，25-(OH)2D3的嚴(yán)重缺乏可能和白癜風(fēng)的發(fā)病有關(guān)。

關(guān)于白癜風(fēng)的發(fā)病機(jī)制進(jìn)行了大量的科學(xué)研究，雖尚無確切定論，但就以往研究結(jié)果看，大多數(shù)學(xué)者公認(rèn)細(xì)胞免疫現(xiàn)象在白癜風(fēng)的發(fā)生中起著直接作用，CD8+的細(xì)胞毒性T細(xì)胞(CTL)介導(dǎo)的細(xì)胞免疫反應(yīng)可能是自身免疫性白癜風(fēng)中一個(gè)重要的終效應(yīng)機(jī)制［6］。有研究證實(shí)，機(jī)體的細(xì)胞免疫紊亂和1，25-(OH)2D3缺乏可能有關(guān)。1，25-(OH)2D3具有免疫調(diào)節(jié)作用，主要表現(xiàn)為對樹突狀細(xì)胞(DC)、單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞等增殖分化及其功能的影響［7］。1，25-(OH)2D3能作用于樹突細(xì)胞，使其發(fā)生成熟障礙，并且對促使其成熟的刺激反應(yīng)鈍化，因此不能激活初始T細(xì)胞，從而抑制免疫。1，25-(OH)2D3還可抑制單核細(xì)胞向DC的分化并抑制其向DC分化后的成熟。CD4+T細(xì)胞也存在VDR，也是1，25-(OH)2D3作用的直接靶點(diǎn)，1，25-(OH)2D3在一定程度上導(dǎo)致Th1/Th2朝向Th2的免疫偏移，抑制了免疫反應(yīng)［8］，因此推測1，25-(OH)2D3嚴(yán)重缺乏會(huì)引起細(xì)胞免疫亢進(jìn)現(xiàn)象。

另外，白癜風(fēng)發(fā)病機(jī)制研究中發(fā)現(xiàn)該類患者體內(nèi)氧化-抗氧化失衡，表皮H2O2增多，過氧化氫酶明顯減少，局部發(fā)生氧化應(yīng)激，造成黑素細(xì)胞損傷、死亡［9］。周曉杰等［10］通過對小鼠 25-羥化維生素D1α-羥化酶基因敲除，證實(shí)維生素D缺乏會(huì)導(dǎo)致小鼠皮膚衰老及氧化應(yīng)激增強(qiáng)，小鼠皮膚活性氧(ROS)水平明顯升高，超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽過氧化物酶(GPX)水平降低、丙二醛(MDA)含量增高等現(xiàn)象。在體外培養(yǎng)的黑素細(xì)胞給予一定劑量的1，25-(OH)2D3，黑素細(xì)胞的增殖及合成黑素的能力明顯提高，白癜風(fēng)皮損區(qū)外用維生素D3衍生物——卡泊三醇能明顯提高白斑復(fù)色率［11］。這些研究均證明了維生素D3在皮膚黑素細(xì)胞的代謝、增殖中的重要作用。

機(jī)體維生素D3主要來源于紫外線照射和食物吸收。位于皮下的7-脫氫膽固醇經(jīng)紫外線照射后轉(zhuǎn)化為維生素D3，這部分占機(jī)體需要量的90%。另外，食物中的維生素D3主要存在于脂類食物中，兩種途徑獲得的維生素D3經(jīng)肝臟和腎臟2次羥化后才能轉(zhuǎn)變?yōu)橛谢钚缘?，25-(OH)2D3。本研究中白癜風(fēng)患者均排除肝腎功能障礙，造成白癜風(fēng)患者尤其是青少年白癜風(fēng)患者25-(OH)D3偏低的原因，主要是這部分患者在發(fā)病前多數(shù)有長期飲食不均衡、偏食、缺乏足夠室外活動(dòng)和陽光照射及其他導(dǎo)致25-(OH)D3減少的不良生活方式等。青少年處于生長發(fā)育期，維生素D3需求量大，本研究中青少年健康對照組25-(OH)D3平均水平明顯高于成年對照組，當(dāng)25-(OH)D3處于同等缺乏水平狀態(tài)時(shí)也許對青少年健康損傷更明顯。另外，從統(tǒng)計(jì)結(jié)果看，無論是青少年還是成年健康對照組，25-(OH)D3達(dá)到國際標(biāo)準(zhǔn)足夠水平的人數(shù)極少，處于亞健康的人數(shù)逐漸增多，這是否與我國近年白癜風(fēng)患者尤其是青少年患者呈增加趨勢有關(guān)值得進(jìn)一步研究。

［1］ Alkhatee B，F(xiàn)ain PR，Thody A，et al.Epidemiology of vitiligo and associated autoimmune disease in Caucasian probonds and their families pigment［J］.Cell Res，2003，16(3):208-214.

［2］ Bik LE，Dg D，Tu CL，et al.Calcium and vitamin D-regulated keratinocyte differentiation［J］.Mol Ced Endocrinol，2001，177(12):154-161.

［3］ Amson Y，Amital H，Shoenfeld Y.Vitamin and autoimmunity new etiological and therapeutical considerations［J］.Ann Rheum Dis，2007，66(9):1137-1142.

［4］ Dusso AS，Brown AJ，Slatopolsky E.Vitamin D［J］.Am JPhysiol Renal Physiol，2005，289(1):8-28.

［5］ Boscoe FP，Schymura MJ.Solar ultraviolet-B exposure and cancer incidence and mortality in the United States，1993－2002［J］.BMC，2006，(6):264.

［6］ Dawson HB，Heaney RP，Holick MF，et al.Estimates of optical vitamin D status［J］.Osteoporos Int，2005，16(7):713-716.

［7］ 王靜，王儉勤，王曉玲.1，25二羥維生素D3對系統(tǒng)性紅斑狼瘡樹突狀細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)［J］.中華風(fēng)濕病學(xué)雜志，2005，9(2):75-77.

［8］ Ogg GS，Rod DP，Romero P，et al.High frequency of skin-homing melanocyte-specific cytotoxic T lymphocytes in autoimmune vitiligo［J］.JExp Med，1998，188(6):1203-1208.

［9］ Arican O，Kurutas EB.Oxidative stress in the blood of patients with active localized vitiligo［J］.Acta Dermatovenerol Alp Panonica Adriat，2008，17(1):12-16.

［10］周曉杰，苗登順.活性維生素D缺乏促進(jìn)小鼠皮膚衰老［J］.南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版，2010，30(5):591-596.

［11］Parsad D，Saini D，Verma N.Carbination of PUVAsol and topical calcipotriol in vitiligo［J］.Dermatol，1998，197:167-170.

Detection of serum 25-hydroxy vitam in D3in patients with vitiligo

LIU Cheng-gang，LIJian-biao，SUN Shao-quan，SHILi-mei，CHENG Su-qin，ZHU Mei-cai

(Center of Clinical Laboratory，Air Force General Hospital，Beijing 100142，China)

Objective To detect themetabolism of serum 25-hydroxy vitamin D3(25-OH D3)and other hydroxylatedmetabolites in patients with vitiligo，and also to analyze the relationship between the biological indicator and the pathogenesis of vitiligo.Methods Threemilliliters of fasting blood sampleswere collected from 140 vitiligo patients and 60 healthy controls and separated with an centrifuger at3 000 rpm for 10 minutes，stored at 4℃ and then measured by ELISA.The 25-OH D3levels of vitiligo patients were divided into 4 grades:the sufficient level of serum 25-(OH)D3(74.1－250.0 nmol/L)，the normal level(47.7－74.0 nmol/L)，the insufficient level(25.0－47.6 nmol/L)and the deficient level(＜25 nmol/L).Then，the patients were divided into the youngster group(with an age between 5－18 years)and the adult group(with an age between 19－56 years).The detection results of the youngster group were compared with those of the controlgroupswith differentage ranges and were analyzed with SPSS13.0.Results For the youngster group with vitiligo，the percentages of the patient populations with sufficient，normal，insufficient and deficient25-(OH)D3levelswere 0，7.4%，59.3%and 33.3%respectively，averaging(30.6±10.5)nmol/L，the percentages of the controls were 10.0%，43.3%，46.7%and 0 respectively，averaging(50.1±12.1)nmol/L(P＜0.01).Statistical differences could be noted，when the percentages of the patient populations with normal，deficient and average 25-(OH)D3levels were compared between the 2 groups(P＜0.01).For the adultgroup with vitiligo，the percentages of the patient populationswith sufficient，normal，insufficientand deficient 25-(OH)D3levels were 2.3%，9.3%，51.2%and 37.2%respectively，averaging(33.2±14.5)nmol/L，while the per-centages of the controlswere 0，20.0%，63.3%and 16.7%respectively，averaging(37.2±10.7)nmol/L.Statistical differences could be seen，when the percentages of the patient populationswith deficient25-(OH)D3 levelwere compared between the 2 groups(P＜0.05).Conclusion The pathogenesis of vitiligo was associated with the deficiency of25-OH D3，which was particularly the case in youngsters.

Vitiligo;25-Hydroxy vitamin D3;Hydroxylated metabolites;Correlation study

R758.41

A

10.3969/j.issn.1009－0754.2014.02.017

2013－08－26)

(本文編輯:甘輝亮)

北京市臨床特色應(yīng)用課題(Z111107058811086)

100142 北京，空軍總醫(yī)院臨床檢驗(yàn)中心

朱美財(cái)，電子信箱:liucg1995@sina.com