皮 泉，陳善忠，洪尼寧

（1.貴州省動物疫病預防控制中心，貴州貴陽 550008；2.貴州省夏云農(nóng)場，貴州安順 561104；3.貴陽醫(yī)學院基礎醫(yī)學院生理學教研室，貴州貴陽 550004）

養(yǎng)牛業(yè)是畜牧業(yè)的重要組成部分，積極預防控制嚴重影響?zhàn)B牛業(yè)及社會穩(wěn)定的口蹄疫、牛海綿狀腦病等重大傳染病的同時，加強其他病毒、細菌和寄生蟲類傳染病防控也日益顯得重要。牛傳染性鼻氣管炎（Infectious bovine rhinotracheitis，IBR）是由牛皰疹病毒1型（Bovine hepervirus-1，BHV-1）引起的以牛呼吸道為主要癥狀的急性、熱性、接觸勝傳染病，其流行病學潛伏性及再活化周期對控制BHV-1格外重要［1］。該病在世界各地都有發(fā)生，常引起大規(guī)模飼養(yǎng)場暴發(fā)流行，影響奶牛產(chǎn)奶量、公牛繁殖力、役牛使役力，還可導致孕牛流產(chǎn)、犢牛死亡，給養(yǎng)牛業(yè)造成巨大經(jīng)濟損失，被世界動物衛(wèi)生組織（OIE）定為必須報告的動物傳染病，也是我國二類動物疫病，血清學調查表明該病在我國部分?。▍^(qū)）普遍存在［2-6］。副結核病是分支桿菌屬副結核分支桿菌（Mycobacteriumaviumsubsp.paratuberculosis，MAP）引起的一種以發(fā)病后期過度消瘦和持續(xù)腹瀉為主要癥狀的牛慢性傳染病，該病屬多種動物共患病，主要影響牛等反芻動物，也可能與人類克羅恩病有關［7］。牛新孢子蟲病是原生動物頂覆門的犬新孢子蟲（Neosporacaninum）引起的一種主要以孕畜流產(chǎn)、死胎及新生畜運動、神經(jīng)系統(tǒng)疾病為特征的傳染病，其病原體可寄生于牛、綿羊、山羊、犬、馬、鹿、小鼠等中間宿主或終末宿主犬，主要傳播途徑是先天性感染和卵囊散播，該病是奶牛流產(chǎn)一個重要的原因，迄今已有70多個國家和地區(qū)報道奶牛感染新孢子蟲［8］，國內大部分牛場也不能幸免［9-12］。為深入了解牛傳染性疫病在貴州省的流行狀況，我們對牛傳染性鼻氣管炎、副結核病和新孢子蟲病這3種病毒、細菌及寄生蟲代表性疫病進行了血清學調查。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 樣品 待檢血清采自省內28個場（戶），按常規(guī)方法采血、分離血清，置-20℃冷凍備用。

1.1.2 試劑 牛皰疹病毒1型，CATTLETYPE BHV1gB Ab（德國 Labor Diagnostik Leipzig）；副結核分支桿菌 Cattle typeA Map Ab（德國 Labor Diagnostik Leipzig）；犬新孢子蟲抗體檢測試劑，Neospora Caninum Antbody Test（美國Idexx）。

1.2 方法

1.2.1 檢測方法 按商業(yè)試劑盒說明書進行操作，樣品稀釋時說明書中規(guī)定的血清及稀釋液體積增加1倍，便于充分混勻以減少檢測誤差。

1.2.2 數(shù)據(jù)分析 χ2檢驗使用下載軟件《卡方檢驗計算器》，使用發(fā)生數(shù)格式，將發(fā)生數(shù)（陽性數(shù)）和樣本數(shù)（總數(shù)）輸入相應位置，即可得χ2值及P范圍。

2 結果

隨機抽取9市（州）11縣的13個鄉(xiāng)（鎮(zhèn)）散養(yǎng)戶及存欄數(shù)超過50頭的15個規(guī)模養(yǎng)殖場，采集牛血清920份，抗體檢測結果（表1）表明牛血清牛皰疹病毒1型、副結核分支桿菌和犬新孢子蟲抗體牛群陽性率分別為64.29%（18／28）、57.14%（16／28）和53.57%（15／28），其中規(guī)模養(yǎng)殖場群陽性率分別為73.33%（11／15）、66.67%（10／15）和66.67%（10／15），散養(yǎng)戶群陽性率分別為 46.15% （6／13）、46.15%（6／13）和38.46%（5／13）；奶牛群陽性率分別為62.50%（5／8）、100%（8／8）和100%（8／8），肉牛群陽性率分別為65.00%（13／20）、40.00%（8／20）和35.00%（7／20）。牛皰疹病毒1型和副結核分支桿菌、牛皰疹病毒1型和犬新孢子蟲以及副結核分支桿菌和犬新孢子蟲雙抗體群陽性率分別為35.71%（10／28）、35.71%（10／28）和 50.00%（14／28），3種抗體群陽性率為25.00%（7／28），其中規(guī)模養(yǎng)殖場2種抗體群陽性率分別為46.67%（7／15）、53.33%（8／15）和60.00%（9／15），3種抗體牛群陽性率為40.00%（6／15）。散養(yǎng)戶群2種抗體陽性率分別為23.07%（3／13）、15.38%（2／13）和38.46%（5／13），3種抗體牛群陽性率為7.69%（1／13）；奶牛2種抗體群陽性率分別為62.50%（5／8）、62.50%（5／8）和 100% （8／8），3種抗體牛群陽性率為62.50%（5／8），肉牛2種抗體群陽性率分別為25.00%（5／20）、25.00%（5／20）和30.00%（6／20），3種抗體牛群陽性率為10.00%（2／20）。

表1 貴州牛血清抗體檢測結果Table 1 Results of bovine serum antibody detection in Guizhou

牛血清牛皰疹病毒1型、副結核分支桿菌和犬新孢子蟲抗體總體陽性率分別為66.85%（615／920）、29.89%（275／920）和32.61%（300／920），其中規(guī)模養(yǎng)殖場陽性率分別為78.47%（565／720）、27.78%（200／720）和35.42%（255／720）。散養(yǎng)戶陽性率分別為25.00%（50／200）、37.50%（75／200）和22.50%（45／200），兩種養(yǎng)殖方式同病種陽性率差異顯著（P＜0.01）；奶牛群總體陽性率分別為82.50%（495／600）、28.33%（170／600）和36.67%（220／600），肉牛群總體陽性率分別為 37.50%（120／320）、32.81% （105／320）和 25.00% （80／320），奶牛與肉牛副結核病陽性率差異不顯著（P＞0.05），牛傳染性鼻氣管炎和新孢子蟲病陽性率差異顯著（P＜0.01）。牛皰疹病毒1型和副結核分支桿菌、牛皰疹病毒1型和犬新孢子蟲以及副結核分支桿菌和犬新孢子蟲2種抗體陽性率分別為15.76%（145／920）、23.37%（215／920）和9.24%（85／920），3種抗體陽性率為4.35%（40／920），其中規(guī)模養(yǎng)殖場2種抗體陽性率分別為18.06%（130／720）、28.47%（205／720）和6.94%（50／720），3種抗體陽性率為4.17%（30／720），散養(yǎng)戶2種抗體陽性率分別為7.50%（15／200）、5.00%（10／200）和17.50%（35／200），3種抗體陽性率為5.00%（10／200），兩種養(yǎng)殖方式同病種2種抗體陽性率差異顯著（P＜0.01），3種抗體陽性率差異不顯著（P＞0.05）；奶牛2種抗體陽性率分別為19.17%（115／600）、28.33%（170／600）和7.50%（45／600），3種抗體陽性率為4.17%（25／600），肉牛2種抗體陽性率分別為9.38%（30／320）、14.06%（45／320）和12.50%（40／320），3種抗體陽性率為4.69%（15／320），奶牛與肉牛同病種2種抗體陽性率差異顯著（牛皰疹病毒1型和副結核分支桿菌、牛皰疹病毒1型和犬新孢子蟲P＜0.01，副結核分支桿菌和犬新孢子蟲0.01＜P＜0.05），3種抗體陽性率差異不顯著（P＞0.05）。

3 討論

本次牛傳染性疫病血清學調查涉及貴州省內9市（州）11縣的13個鄉(xiāng)（鎮(zhèn)）散養(yǎng)戶及15個規(guī)模養(yǎng)殖場，樣品隨機抽取，采樣畜群未接種過所調查病種疫苗。血清牛皰疹病毒1型、副結核分支桿菌和犬新孢子蟲抗體總體陽性率分別為66.85%、29.89%和32.61%，群陽性率分別為64.29%、57.14%和53.57%，這為區(qū)別防控這類疫病提供了依據(jù)。

希尼尼根等［2］報道內蒙古牛皰疹病毒1型抗體總體陽性率為29.5%（135／457），賀曉龍等［3］報道青海陽性率為47.62%（200／420），楊澤林等［4］報道重慶總體陽性率為4.61%，其中奶牛、黃牛和水牛陽性率分別為5.34%、4.92%和0%。相比之下，貴州省牛血清牛皰疹病毒1型抗體檢測陽性率相對較高（P＜0.01），雖然群陽性率64.29%（18／28）低于河南省場陽性率100%（24／24）［5］（P＜0.01）。這次調查奶牛總體陽性率為82.50%（495／600），明顯高于2004年血清中和試驗5.43%（29／534）的總體陽性率［6］（P＜0.01），考慮到檢測試劑及采樣地點等因素的影響，該病在貴州省的流行情況有待進一步調查。

動物機體感染副結核分支桿菌后，呈現(xiàn)細胞免疫和體液免疫的規(guī)律變化，機體抵抗力強時，常表現(xiàn)為細胞免疫反應，機體出現(xiàn)腹瀉、消瘦，甚至衰竭時，抗體水平提高，ELISA可用于識別感染牛群、篩選確定可能受感染的動物個體，相對于糞便培養(yǎng)檢測感染動物早期疾病過程，ELISA檢測率在27%～45%之間，但這也取決于所抽樣的牛群，重度排菌者檢出率可達75%，輕度排菌者檢出率僅15%［13-14］。亞臨床感染動物過境的結果不僅僅是感染動物進入未感染牛群，而是一個國家牛群整體MAP患病率的提高，2002年—2007年間美國陽性奶牛群增加了一倍多、日本檢出54%的感染／患病動物來自美國就是例證［15］。此次調查顯示我省副結核分支桿菌抗體總體陽性率為29.89%、總體群陽性率為57.14%，其中奶?？傮w陽性率為 28.33% （170／600），群陽性率為100%（8／8），考慮我省畜群管理和經(jīng)濟效益的實際情況，選用國際上認可的商業(yè)ELISA試劑，在引種、分群等環(huán)節(jié)加強監(jiān)測對防控副結核病非常重要。

奶牛犬新孢子蟲病呈世界分布，我國及周邊國家和地區(qū)均有報道，感染率在10%～40%不等，嚴重危害養(yǎng)牛業(yè)發(fā)展，鄒世穎等［9］曾報道我國北方6省市的血清陽性率為8.6%，沈莉萍等［10］報道上海奶牛陽性率為5.08%（63／1 239），各場陽性率變幅較大（0～44.23%）。此次調查顯示貴州省新孢子蟲抗體總體陽性率為32.61%、群陽性率為53.57%，而奶?？傮w陽性率為36.67%（220／600）、群陽性率為100%（8／8），檢測結果不容樂觀。

血清學調查表明貴州省部分牛群存在不同程度的牛皰疹病毒1型、副結核分支桿菌或犬新孢子蟲感染，深入開展病原學調查、采取綜合防控措施顯得非常必要。

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