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振源膠囊中人參皂苷Re含量測(cè)定方法分析

2014-06-09 12:36:27趙艷峰
關(guān)鍵詞:振源色譜法皂苷

趙艷峰

振源膠囊中人參皂苷Re含量測(cè)定方法分析

趙艷峰

目的探討振源膠囊中人參皂苷Re含量的測(cè)定方法和結(jié)果。方法使用Lichrospher C18色譜柱進(jìn)行人參皂苷Re含量的測(cè)定,以乙腈-0.05%磷酸為流動(dòng)相,柱溫為35℃,流速為1mL?min-1,檢測(cè)波長為203nm。結(jié)果振源膠囊中人參皂苷Re含量范圍在0.308~1.540μg,加樣回收率約為97.5%。結(jié)論由本次醫(yī)學(xué)研究結(jié)果可知,使用高效液相色譜法對(duì)振源膠囊中人參皂苷Re含量進(jìn)行檢測(cè),具有較高的準(zhǔn)確性,是一種較為高效的臨床檢測(cè)方法。

振源膠囊;人參皂苷;Re含量;測(cè)定方法

振源膠囊是一種人參果實(shí)提取物皂苷研制而成的膠囊劑,該藥物具有改善心臟功能,增強(qiáng)心肌收縮能力,緩解植物神經(jīng)和內(nèi)分泌功能紊亂癥狀,增強(qiáng)人體免疫調(diào)節(jié)能力、益智安神、滋補(bǔ)強(qiáng)壯等功能,臨床上主要適用于更年期綜合癥及冠心病等疾病的臨床治療[1]。藥品中人參皂苷含量測(cè)定結(jié)果是現(xiàn)階段臨床統(tǒng)一應(yīng)用的質(zhì)量評(píng)定標(biāo)準(zhǔn),常用檢測(cè)方法為薄層-比色法,但該方法供試品溶液的制備比較繁瑣,且薄層色譜會(huì)受多種因素的影響,導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果存在較大誤差。本次研究對(duì)振源膠囊中人參果實(shí)的主要成分有效人參皂苷Re的含量進(jìn)行了檢測(cè),通過高效液相色譜法的建立,對(duì)其結(jié)果進(jìn)行了準(zhǔn)確檢測(cè),此檢測(cè)技術(shù)與常規(guī)的薄層-比色法相比,檢測(cè)準(zhǔn)確性更高、靈敏度更好、可重復(fù)性更強(qiáng),且操作方法更加簡便,因而應(yīng)用價(jià)值更高。

1 試藥與儀器

所用設(shè)備包括Empore色譜處理軟件、Waters717自動(dòng)進(jìn)樣器、Waters 2487紫外檢測(cè)器和Waters1525泵。所用試藥包括純化水、分析純、色譜純?yōu)橐译?、吉林集安益盛藥業(yè)公司生產(chǎn)的振源膠囊以及中國藥品生物制品檢定所提供的人參皂苷Re(100%純度,批號(hào)110754-200320)[2]。

2 方法與結(jié)果

2.1 對(duì)照品溶液的制備取7.70mg人參皂苷Re作為精密對(duì)照品,在10ml量瓶中留置備用,于量瓶中加入甲醇溶解進(jìn)行稀釋并搖勻至準(zhǔn)確刻度后,在5ml量瓶中取1ml溶液,并加入一定量的甲醇,搖勻后作為對(duì)照品溶液[3]。

2.2 色譜條件選擇乙腈-0.05%磷酸作為流動(dòng)相,Lichrospher C18為色譜分析柱,檢測(cè)進(jìn)樣量為5μl,流速為 1mL?min-1,波長為 203nm。人參皂苷 Re色譜峰保留時(shí)間為39.8min左右,與左右鄰峰間的分離度在1.5以上,理論板數(shù)在14000以上,色譜圖如圖1所示。

圖1 人參皂苷Re、人參皂苷Rg1的HPLC色譜圖

2.3 制備供試品溶液取0.5g振源膠囊內(nèi)容物,精確加入20ml水飽和正丁醇液,連續(xù)20min進(jìn)行超聲處理,過濾,將初濾液去除,取10ml續(xù)濾液,并使用10 ml氨試液進(jìn)行洗滌。減壓濃縮正丁醇液直至完全干燥,在殘?jiān)屑尤脒m量的甲醇以稀釋溶液,將其置于10ml量瓶中,將甲醇控制在刻度處,搖勻,通過微孔濾膜過濾,留取續(xù)濾液。

2.4 樣品含量測(cè)定精密獲取5μl供試品溶液和對(duì)照品溶液,根據(jù)色譜條件的檢測(cè)結(jié)果,通過外標(biāo)法對(duì)樣品中人參皂苷Re的含量進(jìn)行計(jì)算,如表1所示。

表1 樣品含量檢測(cè)結(jié)果

2.5 溶液穩(wěn)定性測(cè)試取“2.4項(xiàng)”中所制備的溶液,在室溫常規(guī)留置0、2、4、8、12h后,5次進(jìn)樣測(cè)試計(jì)算獲得的RSD峰面積為1.1%,12h內(nèi)穩(wěn)定留置樣品。

2.6 加樣回收率測(cè)試在含量已知的樣品中,加入0.8、1.0、1.2ml精確劑量的人參皂苷Re對(duì)照品溶液,待甲醇揮發(fā)干凈后,根據(jù)“2.3項(xiàng)”中制作而成的溶液,按照色譜條件測(cè)定的相關(guān)規(guī)定,對(duì)加樣回收率進(jìn)行計(jì)算,如表2所示。

表2 加樣回收率測(cè)試結(jié)果

2.7 線性關(guān)系測(cè)試精確量取 2、4、6、8、10μl人參皂苷 Re對(duì)照品溶液,將其分別置于液相色譜儀中,對(duì)色譜峰面積進(jìn)行準(zhǔn)確記錄,計(jì)算出人參皂苷Re的回歸方程為r=019999,Y=47201X-1525。在0.308~1.540μg范圍內(nèi)人參皂苷Re具有良好的線性關(guān)系。

3 討論

根據(jù)目前臨床上統(tǒng)一推行的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),受到薄層-色譜法等因素的影響,振源膠囊中人參皂苷 Re不易被分離,因而需要對(duì)其含量進(jìn)行測(cè)定。而常規(guī)的高氯酸溶液和香莢蘭醛-冰醋酸顯色劑,具有較大的檢測(cè)誤差,且溶液顯色的穩(wěn)定性較差。本研究結(jié)果證實(shí),人參皂苷Re是人參果實(shí)中的主要有效成分,通過高效液相色譜法對(duì)振源膠囊人參皂苷Re含量進(jìn)行測(cè)定,具有較高的應(yīng)用價(jià)值。

[1] 祖雙,李興奎.人參發(fā)酵油軟膠囊中人參總皂苷含量測(cè)量方法[C].2012年中國藥學(xué)大會(huì)暨第十二屆中國藥師周論文集,2012.

[2] 吳越,魏曉姝,丁晴.HPLC法測(cè)定振源膠囊中人參皂苷Re的含量[J].藥學(xué)與臨床研究,2007,15(4):332-333.

[3] 易艷奎,鄧紅珠,李月輝,等.高效液相色譜法測(cè)定雙參龍膠囊中人參皂苷Re含量的研究[J].時(shí)珍國醫(yī)國藥,2008,19(4):987-988.

R927.2

A

1673-5846(2014)01-0041-02

吉林省集安益盛藥業(yè),吉林通化 134200

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