楊慈海，范常龍

(湖北省荊門市食品藥品監(jiān)督檢驗(yàn)所，荊門448124)

HPLC法測定小兒增食片中柚皮苷的含量*

楊慈海，范常龍

(湖北省荊門市食品藥品監(jiān)督檢驗(yàn)所，荊門448124)

目的:建立小兒增食片中柚皮苷含量測定方法。方法:采用高效液相色譜法，Agela Venusil MP C18色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，甲醇－6%醋酸(30∶70)為流動(dòng)相，流速為1.0 ml/min，檢測波長為283 nm，柱溫25℃。結(jié)果:柚皮苷在0.045 0～1.440 0 μg/ml圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系(r=0.999 9)，平均加樣回收率為98.07%，RSD為0.76%(n= 6)。結(jié)論:該法簡便、靈敏、準(zhǔn)確可靠，可作為制劑的含量控制方法。

小兒增食片，HPLC，柚皮苷，含量測定

小兒增食片為衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)(WS3－B－3760－98)收載的品種，處方由茯苓、三棱、陳皮、山楂、麥芽、六神曲、肉豆蔻、香附、枳殼、檳榔、大黃、甘草等12味中藥材組成，具有消食導(dǎo)滯和增進(jìn)食欲的功效，用于小兒厭食、偏食、面黃肌瘦、積食等癥狀?，F(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)過于簡單，處方12味藥，僅有大黃的薄層鑒別，沒有含量測定。筆者經(jīng)過試驗(yàn)摸索，并參考《中國藥典》［1］和相關(guān)資料［2］，采用HPLC法測定制劑中的柚皮苷的含量，結(jié)果平行性好，回收率高，可提高標(biāo)準(zhǔn)和控制制劑的內(nèi)在質(zhì)量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器DIONEX Ultimate 3000高效液相色譜儀及Ultimate 3000 Diode Array Detector紫外檢測器，Chromeleon色譜工作站，德國Sartorius BP211D電子天平(d=0.1 mg)，GZX－9140MBE數(shù)顯鼓風(fēng)干燥箱，DZKW電子恒溫水浴鍋。

1.2 試劑與藥品柚皮苷對(duì)照品(中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)110722－200006，含量100%)。小兒增食片(吉林白山正茂藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)20110303、20130501、20130502)，甲醇為色譜純;水為超純水;其他試劑均為分析純。

2 方法和結(jié)果

2.1 色譜條件色譜柱:Agela Venusil MP C18色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm);預(yù)柱C18(250 mm×4.6 mm，5 μm);流動(dòng)相:甲醇－6%醋酸(30∶70);流速: 1.0 ml/min;檢測波長:283 nm;柱溫:25℃;進(jìn)樣量:10 μl。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備精密稱取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥24 h的柚皮苷對(duì)照品11.25 mg，分別置50 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，即得對(duì)照品貯備液。精密量取上述柚皮苷對(duì)照品貯備液5 ml置25 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，混勻，即得每1 ml柚皮苷約45.00 μg對(duì)照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備精密稱取本品裝量差異下細(xì)粉1.0 g，精密稱定，加甲醇50 ml，回流3 h，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.2.3 陰性溶液的制備按處方制備工藝制得不含陳皮和枳殼的陰性樣品，按供試品溶液制備方法制成陰性對(duì)照品溶液。

2.3 專屬性試驗(yàn)分別精密吸取“2.2”項(xiàng)下3種溶液各10 μl，按上述色譜條件進(jìn)樣，記錄色譜圖，樣品中柚皮苷及相鄰峰的分離度均大于1.5，見圖1。在對(duì)照品溶液色譜主峰處，供試品溶液具有相同保留時(shí)間的色譜峰，陰性對(duì)照品溶液則無此峰，說明樣品中其他成分對(duì)柚皮苷的測定無干擾。

圖1 對(duì)照品(A)供試品(B)陰性對(duì)照(C)HPLC色譜圖

2.4 線性范圍的考查分別精密量取對(duì)照品溶液1、2、4、8、16和32 μl注入高效液相色譜儀，測定峰面積積分值，以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸曲線方程:Y=7.35× 105X+4.22×104(r=0.999 9)，結(jié)果表明，柚皮苷在0.045 0～1.440 0 μg范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好的線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗(yàn)精密吸取對(duì)照品溶液10 μl，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖，測得柚皮苷峰面積RSD為0.85%(n=6)，表明精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)精密吸取對(duì)照品溶液10 μl，分別在0、1、2、4和8 h時(shí)進(jìn)樣，記錄色譜圖，測得柚皮苷的峰面積RSD為0.49%，表明樣品在8 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)取批號(hào)為20110303的供試品，按“2.2”項(xiàng)下方法處理，分別制備6份供試品溶液，按上述色譜條件平行操作測定，計(jì)算含量，結(jié)果6份供試品溶液中柚皮苷平均含量0.136 mg/g，RSD為0.92%，表明重復(fù)性良好。

2.8 加樣回收率試驗(yàn)取已知含量的同一批樣品(0.283 mg/g，批號(hào)20110303)約0.5 g，精密稱取6份，置具塞錐形瓶中，分別精密加入“2.2”項(xiàng)下柚皮苷對(duì)照品溶液2.0、3.0和4.0 ml，按供試品溶液制備方法制備溶液并測定含量，計(jì)算回收率，結(jié)果平均回收率為98.07%，RSD為0.76%，見表1。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.9 樣品的測定按“2.2”項(xiàng)下方法測定3個(gè)批號(hào)(20110303、20130501、20130502)的供試品，用外標(biāo)法計(jì)算，含量分別為0.283、0.136和0.252 mg/g。

3 討論

3.1 指標(biāo)成分的選擇小兒增食片是臨床常用制劑，方中陳皮和枳殼都具有理氣健脾，行滯消脹的作用，為主藥之一。二者都含有柚皮苷［3］，含量高且性質(zhì)穩(wěn)定，常常作為質(zhì)量控制指標(biāo)，故選擇制劑中柚皮苷進(jìn)行含量測定，結(jié)果方法簡單，效果較好。

3.2 流動(dòng)相的考查實(shí)驗(yàn)考查了以乙腈－6%醋酸為流動(dòng)相，結(jié)果柚皮苷保留時(shí)間短，分離效果不好;以甲醇－6%醋酸為流動(dòng)相，將比例調(diào)整到(30∶70)后，供試品中柚皮苷峰和其他成分峰能完全分離，故選擇甲醇－醋酸－水系統(tǒng)作流動(dòng)相。

1中國藥典［S］.一部.2010:176－177，229－230

2李玉琴，陳磊.高效液相色譜法同時(shí)測定通宣理肺丸中橙皮苷和柚皮苷的含量［J］.中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，2011，31(23):1978－1980

3肖培根.新編中藥志(二卷)［M］.北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2002: 342－351，443－452

Determination of naringin in Xiao’er Zengshi Tablet by HPLC

Yang Cihai，F(xiàn)an Changlong
(Jingmen Institute for Food and Drug Control，Jingmen，448124)

Objective:To establish an HPLC method for determining the content of naringin in Xiao’er Zengshi Tablet.Method: An Agela Venusil MP C18 column(250 mm×4.6 mm，5 μm)was used with methanol－6%acetic acid(30∶70)as the mobilephase.The flow rate was 1.0 ml/min，the detection wavelength was 283 nm，and the column temperature was 25℃.Results: There was a good linear relationship within the range of 0.045 0～1.440 0 μg/ml(r=0.999 9).The recovery was 98.07%(n= 6)with RSD=0.76%.Conclusion:The method is simple，fast and reliable，and can be used for the quantitative control of naringin in the preparation.

Xiao’er Zengshi Tablet，HPLC，naringin，quantitative control

R927.2

A

1006-5687(2014)01-0020-03

2013-10-30