潘積常 周鳳嬌

摘要：目的：建立測(cè)定復(fù)肝寧膠囊中綠原酸的方法。方法：色譜柱為C18 （5μm4.6×250mm）；流動(dòng)相:乙腈－0.4％磷酸溶液（13:87）；檢測(cè)波長327 nm；流速1.0ml/min。結(jié)果：綠原酸線性范圍0.039μg～0.780μg（r=0.9999），平均回收率為98.69%，RSD=0.611 % (n=6)。結(jié)論：方法準(zhǔn)確、專屬性強(qiáng)，可作為復(fù)肝寧膠囊中綠原酸的定量分析方法。

關(guān)鍵詞：復(fù)肝寧膠囊；綠原酸；高效液相色譜【中圖分類號(hào)】R965【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】B【文章編號(hào)】1672-8602(2014)04-0099-01

復(fù)肝寧膠囊［1］是由板藍(lán)根、金銀花、柴胡、牡丹皮、山楂、麥芽(炒)、六神曲(炒)七味藥經(jīng)提取制成，具有清舒肝健脾，清熱利濕。用于乙型肝炎奧亢陽性屬于肝旺脾虛，熱毒較盛者。但其現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)尚無含量測(cè)定方法［3］。為完善產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，本文建立了采用HPLC單波長同時(shí)測(cè)定復(fù)肝寧膠囊中綠原酸的方法。

1儀器、試劑和樣品

儀器：島津高效液相色譜儀，輸液泵型號(hào)：LC-10ATVP；檢測(cè)器:SPD-10AVP；GR-202型電子天平。試劑：乙腈、甲醇為色譜純，水為重蒸餾水，其它試劑均為分析純。綠原酸對(duì)照品：中國藥品生物制品檢定所提供（110753-200212，供含量測(cè)定用）。樣品：復(fù)肝寧膠囊及缺金銀花的陰性樣品由廣西萬壽堂藥業(yè)有限公司提供。

2方法與結(jié)果

2.1色譜條件：色譜柱： C18 （5μm4.6×250mm）；流動(dòng)相：乙腈－0.4％磷酸溶液（13:87），流速：1ml/min，檢測(cè)波長：327 nm；柱溫：室溫。

2.2樣品制備及專屬性考察：（1）對(duì)照品溶液精密稱取綠原酸對(duì)照品適量置量瓶中，用50%甲醇溶解并稀釋，搖勻，加50％甲醇至刻度制成每1ml含40μg的溶液（10℃以下保存）。（2）供試品溶液制備取本品的內(nèi)容物，研細(xì)，取1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加50％甲醇50ml，稱定重量，用超聲（40kHz,250W）處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用50％甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，用0.45μm的微孔濾膜濾過，精密量取續(xù)濾液5ml，置25ml棕色量瓶中，加50％甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得（10℃以下保存）。（3） 陰性樣品溶液制備另取不含金銀花藥材的陰性樣品［按復(fù)肝寧膠囊配方（刪除金銀花藥材），采用該膠囊劑制備工藝制得的樣品］，照供試品溶液項(xiàng)下操作制備成陰性樣品溶液。（4） 測(cè)定方法分別取對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性樣品溶液10μl注入液相色譜儀，測(cè)定，理論板數(shù)按綠原酸峰計(jì)算應(yīng)不低于1000。結(jié)果陰性樣品在相同位置無干擾。

附圖對(duì)照品、供試品及陰性樣品的HPLC圖譜

2.3線性關(guān)系考察：精密稱取綠原酸對(duì)照品9.75mg，用50％甲醇溶解并稀釋至50ml量瓶中，精密吸取5ml置25ml量瓶中，用50％甲醇溶解并稀釋至刻度，制成39μg/ml的溶液（10℃以下保存）。精密吸取上述對(duì)照品溶液1μl、4μl、8μl、12μl、16μl、20μl進(jìn)樣，記錄色譜圖，測(cè)得峰面積，以峰面積（A）對(duì)進(jìn)樣量（C）進(jìn)行回歸，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為A=2296273.94×C-26028.28， r＝0.9998。結(jié)果表明：綠原酸的峰面積與進(jìn)樣量在進(jìn)樣量為0.039μg～0.780μg之間線性關(guān)系良好。

2.4儀器精密度和樣品穩(wěn)定性、重復(fù)性試驗(yàn) ：精密吸取對(duì)照品溶液（濃度為39μg/ml）10μl，連續(xù)進(jìn)樣5次，RSD=0.55%結(jié)果表明：進(jìn)樣精密度良好。取樣品（批號(hào)040403）供試液分別于0、2、4、6、8h進(jìn)樣10μl，測(cè)得樣品中綠原酸峰面積值，相對(duì)平均偏差為1.11%，RSD=0.60%；樣品供試液在8小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定性較好。取樣品（批號(hào)：040403）五份分別制備樣品供試液，依法檢測(cè)其含量，含量平均值為：12.69mg/g，RSD=0.255%，試驗(yàn)表明：本法重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果良好。

2.5回收率試驗(yàn)取六份已知含量的樣品（批號(hào)：040403,含量為12.69 mg/g ）各約0.5 g，精密稱定，分別加入綠原酸對(duì)照品，照本品含量測(cè)定方法測(cè)定，結(jié)果綠原酸平均回收率為98.69%，RSD為0.611 %，試驗(yàn)結(jié)果表明本方法準(zhǔn)確度良好。

2.6 樣品測(cè)定： 取10批樣品按"2.2.2"項(xiàng)下制備成供試品溶液，依法測(cè)定，結(jié)果見下表。

批號(hào) 綠原酸含量（mg/粒）040401 4.91040402 5.17040403 5.11040404 5.0040405 4.93040406 4.99040407 5.36040501 5.11040502 5.09040503 5.053討論

3.1金銀花為本方臣藥，本方法選擇金銀花主要有效成分綠原酸為檢測(cè)成分，共檢測(cè)了10批成品的含量，結(jié)果表明該方法穩(wěn)定可行，方法簡便準(zhǔn)確。

3.2本方法準(zhǔn)確靈敏，可作為復(fù)肝寧膠囊中金銀花有效成分的定量分析方法，為進(jìn)一步制復(fù)肝寧膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供了依據(jù)，并對(duì)含有金黃銀花藥材的其他產(chǎn)品的檢測(cè)也具有一定的參考價(jià)值。

參考文獻(xiàn)

[1] 國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典：2010年版一部.