周斌，李媛媛

（保定市第三醫(yī)院胸外科，河北 保定 071000）

胸部腫瘤患者常因腫瘤病因和類型的不同以及個體差異等原因，對化療藥物的敏感性有較大差異。為了減少臨床對化療藥物選擇的盲目性，實行個體化治療，化療前預測腫瘤細胞對化療藥物的敏感性顯得尤為重要[1]。為此，保定市第三醫(yī)院開展了四噻唑藍法體外腫瘤細胞藥敏試驗，對16種常用化療藥物進行分析。對保定市第三醫(yī)院近期試驗數(shù)據(jù)進行總結(jié)，就腫瘤細胞對部分化療藥物的敏感性提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 細胞來源

近期胸外科手術的腫瘤組織，包括肺癌、食管癌變組織。挑選瘤細胞集中和活性好的部位，將切下的腫瘤組織立即放入裝有培養(yǎng)液的無菌容器內(nèi)，4 ℃保存，12 h 內(nèi)使用。

1.1.2 培養(yǎng)基和試劑

改良型RPMI1640培養(yǎng)基（?？寺∩锘瘜W制品有限公司）、新生牛血清（北京元亨圣馬生物技術研究所），四氮唑鹽（MTT）（Amresco）、二甲基亞砜（天津市恒興化學試劑制造有限公司）。

1.1.3 試驗藥物

順鉑（20μg/mL）、卡鉑（100μg/mL）、草酸鉑（30μg/mL）、蓋諾（40μg/mL）、環(huán)磷酰胺（1 000μg/mL）、異環(huán)磷酰胺（2 500μg/mL）、長春新堿（10μg/mL）、羥喜樹堿（20μg/mL）、依立替康（300μg/mL）、紫杉醇（125μg/mL）、多西紫杉（60μg/mL）、依托鉑苷（100μg/mL）、氟尿嘧啶（200μg/mL）、吡柔比星（50μg/mL）、多柔比星（60μg/mL）、表柔比星（10μg/mL）。

1.1.4 儀器

Kendro BB15 CO2培養(yǎng)箱、Multiskan MK3酶標儀。

1.2 方法

1.2.1 腫瘤細胞的制備

（1）無菌條件下剔除壞死組織及正常組織，用生理鹽水沖洗2次；（2）充分剪碎腫瘤組織，經(jīng)200目不銹鋼網(wǎng)擠壓過濾，收集細胞；（3）將細胞懸液加入離心管中，1 000 r/min離心5 min；（4）用生理鹽水理性離心洗滌2次，棄上清，加入適量培養(yǎng)基重新懸浮細胞。

1.2.2 藥敏試驗

（1）立即將腫瘤細胞懸液以103～104微升/孔接種于96孔培養(yǎng)板（200微升/孔），同時加入事先確定的各種化療藥物。在37℃、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24～48 h。（2）每孔加入MTT（5 mg/mL）10μL，37 ℃作用12 h。（3）1 500 r/min離心5 min，棄去上清。每孔加入DMSO 100μL，振蕩，使藍紫色沉淀充分溶解，用酶標儀在波長490 nm處測定吸光度（A）。（4）各藥物組設3個平行孔，實驗重復3次，取平均值計算藥物作用后腫瘤細胞生長抑制率，公式如下：細胞生長抑制率（%）=（A對照組-A實驗組）/A對照組×100%。

2 結(jié)果

將細胞生長抑制率結(jié)果列表，并計算出敏感率，排序發(fā)現(xiàn)肺鱗癌對16種化療藥物敏感率高的為：草酸鉑（60%），順鉑、環(huán)磷酰胺、紫杉醇（40%）。肺腺癌對16種化療藥物敏感率高的為：蓋諾、紫杉醇、氟尿嘧啶（63%）（表1）。食管鱗癌對16種化療藥物敏感率高的為：蓋諾、長春新堿、羥喜樹堿（75%）（表2）。

表1 肺癌 （13例）對16種試驗化療藥物的敏感率

表2 食管鱗癌（4例）對16種試驗化療藥物的敏感率

3 討 論

腫瘤藥物敏感試驗出現(xiàn)較早，其主要目的在于化療前預測藥物對腫瘤的敏感性，從而淘汰無效化療藥物，實現(xiàn)個體化化療，提高腫瘤的化療效果。近年來隨著細胞培養(yǎng)技術的不斷提高，藥物敏感試驗方法的不斷改進。特別是MTT法的出現(xiàn)與成熟，腫瘤藥物敏感試驗成為腫瘤治療研究中的熱點之一[2]。對肺癌有效的抗腫瘤藥很多，包括紫杉類、喜樹堿衍生物CPT-11（依立替康）和長春瑞賓（蓋諾）等。草酸鉑對非小細胞肺癌（NSCLC）有一定療效，有效率為10%～26%[3]。表柔比星作為單藥治療NSCLC，有效率只有7%[3]，但體外腫瘤細胞藥敏試驗顯示對NSCLC也具有較高的敏感率。本實驗結(jié)果顯示，肺鱗癌對16種化療藥物敏感率高的為：草酸鉑（60%），順鉑、環(huán)磷酰胺、紫杉醇（40%）。肺腺癌對16種化療藥物敏感率高的為：蓋諾、紫杉醇、氟尿嘧啶（63%），順鉑、依立替康、表柔比星（50%）。食管鱗癌對16種化療藥物敏感率較高的為：蓋諾、長春新堿、羥喜樹堿（75%），卡鉑、依立替康、紫杉醇、氟尿嘧啶、吡柔比星（50%）。

MTT藥敏試驗仍然存在著假陽性及假陰性，使試驗的特異性有一定的誤差[4]，可能與以下因素有關：（1）體外培養(yǎng)的為原代肺癌細胞，不象細胞株那樣，具有很強生長和增殖能力，有一部分細胞在體外會因為環(huán)境的變化而不適應，自然死亡，且有一部分細胞在分離過程中受到機械性損傷；（2）體內(nèi)外環(huán)境不一樣，體內(nèi)較復雜，存在影響化療藥物代謝及作用的因素；（3）體內(nèi)外提供細胞損傷后修復的環(huán)境不一樣，在體外腫瘤細胞的修復能力下降；（4）體外細胞處于機械損傷和環(huán)境損傷狀態(tài)[5]。但就目前眾多藥敏試驗方法中，它以較高的臨床相關性以及符合率，方法簡便又經(jīng)濟的特點為廣大醫(yī)院所接受。以藥敏實驗結(jié)果為依據(jù)進行個體化治療，可望提高療效，減少無效藥物的投入，減少毒副作用的發(fā)生，并且有可能提高患者生存率。

4 結(jié)論

通過體外腫瘤細胞對常用化療藥物敏感性的分析，為臨床對化療藥物的選擇提供參考，從而減少臨床對化療藥物選擇的盲目性，更好地實行個體化治療，體外腫瘤細胞藥敏試驗對化療藥物的合理選擇具有指導意義。

[1]季宇彬, 周建華, 左明新, 等. 新型 TopoⅠ抑制劑 CPUY013 對胃腺癌細胞 BGC823 的體內(nèi)外作用[J]. 藥學學報, 2008, 43(8):811-818.

[2]IYISOY A, AMASYALI B, KILIC A, et al. Relationship be-tween noni-nvasive reperfusion criteria and pulsed-wavetissue Dopplerparameters in patientswith acutemyocardialinfarction receiving thrombolytic therapy[J]. Echocardio-graphy, 2003, 20(3):237-248.

[3]張翠卿. 腫瘤體外藥敏試驗與臨床優(yōu)化治療方案的研究進展[J]. 四川腫瘤防治, 2006, 19(4): 281.

[4]段國辰, 杜錦波, 牛占叢. 腫瘤細胞體外藥敏試驗臨床研究進展[J]. 河北醫(yī)藥, 2012, 34(21): 3304-3306.

[5]劉敏, 王朝暉. 體外腫瘤細胞培養(yǎng)法對非小細胞肺癌化療藥物敏感性的研究[J]. 臨床醫(yī)學, 2009, 29(12): 66.