陳玉華

(杭州市畜牧獸醫(yī)局，浙江杭州310020)

高致病性豬藍(lán)耳病(PRRS)是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒變異株引起的一種急性高致死性傳染病，以懷孕母豬流產(chǎn)、死胎、木乃伊胎、早產(chǎn)、產(chǎn)弱仔等繁殖障礙和仔豬呼吸困難、高死亡率為特征。該病傳播速度快、發(fā)病面廣，仔豬發(fā)病率可達(dá)100% ，死亡率可達(dá)40%以上，母豬流產(chǎn)率可達(dá)35%以上，生長(zhǎng)豬和育肥豬病情較為緩和，但感染率和死亡率仍然很高［1-3］。

近年來，國家有關(guān)部門全面推廣應(yīng)用高致病性豬藍(lán)耳病疫苗免疫，目前在學(xué)術(shù)界和養(yǎng)豬行業(yè)雖對(duì)PRRS 疫苗免疫問題存在較大爭(zhēng)議，但在臨床上PRRS 疫苗免疫對(duì)緩解臨床癥狀、控制該病疫情仍不失為主要應(yīng)對(duì)措施之一［4-6］。為此，筆者以不同廠家生產(chǎn)的商品化PRRS 弱毒苗和滅活苗、不同劑量的PRRS 弱毒苗進(jìn)行免疫效果試驗(yàn)，以評(píng)價(jià)PRRS疫苗的安全性及免疫效果，以探討適合杭州地區(qū)PRRS 免疫的疫苗種類、免疫程序，降低免疫反應(yīng)，完善免疫技術(shù)方案，為臨床防控高致病性豬藍(lán)耳病提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 疫苗 選擇杭州某獸用生物制品有限公司生產(chǎn)的高致病性豬藍(lán)耳病疫苗滅活苗NVDC-JXA1 株及北京某實(shí)業(yè)股份有限公司生產(chǎn)的高致病性豬藍(lán)耳病弱毒疫苗JXA1-R 株、哈爾濱某生物技術(shù)開發(fā)公司生產(chǎn)的高致病性豬藍(lán)耳病弱毒疫苗CH-1R 株、上海某生物制品有限公司生產(chǎn)的高致病性豬繁殖與呼吸綜合征弱毒疫苗(HuN4-F112 株)進(jìn)行免疫效果試驗(yàn)。

1.2 試劑 藍(lán)耳病抗體監(jiān)測(cè)試劑盒購自美國愛德士(IDEXX)公司，生產(chǎn)批號(hào)為40959-V931，盒內(nèi)包括已包被好重組PRRS 抗原包被板，標(biāo)準(zhǔn)陰性、陽性對(duì)照血清，HRPO 標(biāo)記抗豬IgG 抗體，樣品稀釋液，TMB 底物溶液，終止液、10x 濃縮洗液等。

1.3 試驗(yàn)分組

1.3.1 高致病性豬藍(lán)耳病滅活苗和弱毒苗免疫效果比較 選用高致病性豬藍(lán)耳病疫苗滅活苗NVDC-JXA1 株、高致病性豬藍(lán)耳病弱毒苗JXA1-R株進(jìn)行分組免疫試驗(yàn)，免疫程序按疫苗說明書進(jìn)行，滅活苗NVDC-JXA1 株于25日齡時(shí)首免，55日齡二免，弱毒疫苗CH-1R 株為對(duì)照樣品，免疫劑量均為1頭份。

1.3.2 不同廠家高致病性豬藍(lán)耳弱毒疫苗免疫效果比較 選用不同廠家生產(chǎn)的高致病性豬藍(lán)耳病弱毒疫苗JXA1-R 株(組1，組2，組3)進(jìn)行免疫試驗(yàn)，于仔豬25日齡進(jìn)行免疫接種，劑量為1 頭份。

1.3.3 同一廠家高致病性豬藍(lán)耳病弱毒疫苗不同免疫劑量免疫效果比較 選用同一廠家生產(chǎn)的高致病性豬藍(lán)耳病弱毒疫苗JXA1-R 株進(jìn)行分組試驗(yàn)，組1 劑量為1 頭份，組2 為2 頭份，于仔豬25日齡時(shí)進(jìn)行免疫接種。

1.4 血清樣品 上述各試驗(yàn)組分別于免疫前、免疫后20 d、60 d、90 d 采集血樣，分離血清，分別編號(hào)，置－20℃冰箱中保存，抗體檢測(cè)備用。

1.5 PRRS 抗體檢測(cè) 將待檢樣品(血清)進(jìn)行40倍稀釋，取100 μL 稀釋好樣品(血清)分別加入酶標(biāo)板反應(yīng)孔，各加陰陽性對(duì)照血清100 μL 兩孔，室溫培養(yǎng)30 min。用洗滌液洗滌3～5 次，甩盡孔內(nèi)液體，并在濾紙上拍干。每孔加入HRPO 標(biāo)記抗豬IgG 抗體100 μL，室溫作用30 min，用洗滌液洗滌3～5 次，甩盡孔內(nèi)液體，并在濾紙上拍干。每孔加入100 μL 底物(TMP)溶液，室溫作用15 min，然后每孔加入100 μL 終止液，混勻，于BIO-RAD680 型酶標(biāo)儀上650 nm 處讀數(shù)，利用XCHEK 軟件系統(tǒng)處理數(shù)據(jù)。

2 結(jié)果與分析

2.1 高致病性豬藍(lán)耳病滅活苗和弱毒苗免疫效果比較 詳見表1，表2。

表2 乙豬場(chǎng)PRRS 弱毒苗和滅活苗免疫效果比較

由表1、表2可見，高致病性豬藍(lán)耳病滅活疫苗免疫后20 d 和60 d，甲豬場(chǎng)和乙豬場(chǎng)的PRRS 抗體均為陰性，免疫后90 d，PRRS 抗體水平開始轉(zhuǎn)陽，甲豬場(chǎng)有7 頭豬PRRS 抗體檢測(cè)為陽性，S/P 均值為1.78，乙豬場(chǎng)試驗(yàn)豬的免疫抗體檢測(cè)均為陽性，S/P 均值為2.025。

采用高致病豬藍(lán)耳病弱毒疫苗免疫后，甲、乙兩豬場(chǎng)在免疫后20 d 豬群PRRS 抗體檢測(cè)均為陽性，甲豬場(chǎng)S/P 均值為2.0 以上，且持續(xù)到免疫后60 d以上，免疫后90 d S/P 均值有所下降;乙豬場(chǎng)S/P均值在1.1 以上，抗體水平均一性較好。

2.2 不同廠家生產(chǎn)的高致病性豬藍(lán)耳病弱毒苗免疫效果比較 詳見表3。

表3 不同廠家生產(chǎn)的PRRS 弱毒苗免疫效果比較

由表3可見，采用不同廠家生產(chǎn)的高致病性藍(lán)耳病弱毒疫苗進(jìn)行分組免疫后20 d PRRS 抗體水平檢測(cè)均轉(zhuǎn)陽，免疫后90 d 抗體水平仍保持較高水平，免疫60 d 組1 S/P 均值明顯高于組2 和組3 水平，其中組2 免疫后20 d 豬群全部轉(zhuǎn)陽，S/P 均值均在1.1 以上，經(jīng)方差分析(P ＞0.5)，3 組組間差異不顯著。

2.3 同種疫苗不同免疫劑量的免疫效果比較 詳見表4。

表4 同種疫苗不同免疫劑量的免疫效果比較

由表4可見，采用不同劑量的PRRS 疫苗進(jìn)行免疫，免疫后20 d 抗體水平均轉(zhuǎn)陽，且S/P 均值均大于1，至免疫后90 d 以上，其中組2 抗體水平明顯高于組1，標(biāo)準(zhǔn)差小，離散度均衡，t 檢驗(yàn)，二者差異極顯著(P ＜0.01)。

3 小結(jié)與討論

本試驗(yàn)表明，PRRS 弱毒疫苗的免疫效果明顯優(yōu)于滅活苗;不同廠家生產(chǎn)的弱毒疫苗，在使用相同免疫劑量的情況下，總體比較理想，且免疫安全性較好。經(jīng)不同劑量的PRRS 弱毒疫苗免疫效果比較，2頭份免疫劑量效果較1 頭份免疫劑量好，且抗體水平較均衡，離散度較小。與曹斌等(2010)［7］、母安雄等(2008)［8］對(duì)PRRS 進(jìn)行進(jìn)口弱毒疫苗、國產(chǎn)弱毒疫苗、普通滅活疫苗、滅活疫苗的免疫效果試驗(yàn)比較，認(rèn)為國產(chǎn)弱毒疫苗與進(jìn)口弱毒疫苗均優(yōu)于滅活疫苗，可產(chǎn)生較高的抗體水平。目前市場(chǎng)上提供的PRRS 抗體檢測(cè)試劑盒雖對(duì)檢測(cè)不同PRRS 毒株的敏感性較高，但只能評(píng)估豬只是否感染PRRSV，無法區(qū)分是自然感染或人工免疫疫苗。因此在臨床實(shí)踐中，還需結(jié)合臨床觀察，包括發(fā)病死亡情況，特別是母豬繁殖障礙和早產(chǎn)、流產(chǎn)情況來確定PRRS 場(chǎng)內(nèi)控制情況。

PRRSV 屬披膜病毒科動(dòng)脈炎病毒屬的RNA 病毒，新生仔豬肺泡巨噬細(xì)胞是PRRSV 最易感部位，通過感染組織巨噬細(xì)胞和單核細(xì)胞及局部淋巴組織向全身擴(kuò)散，嚴(yán)重降低機(jī)體免疫機(jī)能，誘發(fā)各種形式(如細(xì)菌病或病毒病)的繼發(fā)感染，導(dǎo)致臨癥的復(fù)雜化［9］。從我國目前PRRS 流行情況看，適宜的高致病性豬藍(lán)耳病疫苗免疫，在預(yù)防該病發(fā)生和減輕臨床癥狀上具有一定作用，若堅(jiān)持長(zhǎng)期、科學(xué)、規(guī)范的免疫和抗體監(jiān)測(cè)，發(fā)生PRRS 疾病的幾率將大幅下降。因此，定期對(duì)PRRS 病毒感染情況進(jìn)行監(jiān)測(cè)和免疫接種仍是控制該病流行的主要措施［10－11］。2007年開始農(nóng)業(yè)部把PRRS 納入國家強(qiáng)制免疫疫病范疇，同時(shí)逐步加大了對(duì)PRRS 疫病監(jiān)測(cè)和流行調(diào)查。目前，杭州市對(duì)所有豬場(chǎng)實(shí)施高致病性豬藍(lán)耳病疫苗強(qiáng)制免疫，效果明顯。

基于PRRS 弱毒疫苗較滅活苗具有免疫效果好、免疫期長(zhǎng)等優(yōu)點(diǎn)，且目前杭州地區(qū)尚難找出PRRS 陰性場(chǎng)，選擇PRRS 弱毒苗進(jìn)行免疫注射是可取的，同時(shí)有針對(duì)性的開展高致病性豬藍(lán)耳病的流行病學(xué)調(diào)查和疫苗免疫效果評(píng)價(jià)，尋找切合自身場(chǎng)戶的科學(xué)免疫程序及實(shí)施綜合防控措施才是預(yù)防和控制該病的重要手段。

［1］嚴(yán)玉霖，高洪.豬繁殖與呼吸綜合征診斷技術(shù)研究進(jìn)展［J］.動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2008，29(7):81－85.

［2］文利新，丁小波，羅維.豬高致病性藍(lán)耳病的發(fā)病特點(diǎn)及其防治技術(shù)［J］.湖南農(nóng)業(yè)科學(xué)，2008(4):153－154.

［3］王斌，張智鵬，范陸.高致病性豬藍(lán)耳病的綜合防制［J］.中國畜牧獸醫(yī)，2008(11):137－140.

［4］郭寶清，陳章水，劉文興，等.從疑似PRRS 流產(chǎn)胎兒分離PRRSV 的研究［J］.中國畜禽傳染病，1996(2):1－4.

［5］王君瑋，徐天剛，吳延功，等.山東部分地區(qū)豬繁殖與呼吸綜合征的流行病學(xué)調(diào)查［J］.畜牧與獸醫(yī)，2004(4):32.

［6］魯杏華.豬繁殖呼吸綜合征血清學(xué)調(diào)查［J］.中國動(dòng)物檢疫，2000(8):41.

［7］曹斌，王海燕，周廣生，等.不同類型豬藍(lán)耳病疫苗的體液免疫效果比較［J］.中國動(dòng)物檢疫，2010(8):51－52.

［8］母安雄，楊宗照，嚴(yán)惠群，等.仔豬PRRS 母源抗體消長(zhǎng)規(guī)律及疫苗免疫效果觀察［J］.浙江農(nóng)業(yè)科學(xué)，2008(1):110－112.

［9］吳東來，郭寶清，李桂芝，等.豬生殖呼吸道綜合癥病毒抗原在死胎及新生仔豬體內(nèi)的分布［J］.中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào)，1999，2 (21):128－129.

［10］池海蓬，于闖，趙崇，等.高致病性豬藍(lán)耳病現(xiàn)場(chǎng)診斷及預(yù)防措施［J］.現(xiàn)代畜牧獸醫(yī)，2009(8):15.

［11］紀(jì)海旺，王亞超.高致病性豬藍(lán)耳病特點(diǎn)及其防控措施［J］.當(dāng)代畜牧，2007(9):17－18.