馬新華 陳仕勝 金宛宛 溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院皮膚科 溫州 325027

加味五味消毒飲治療中重度痤瘡療效觀察及對(duì)Th17細(xì)胞的影響

馬新華 陳仕勝 金宛宛 溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院皮膚科 溫州 325027

目的 觀察加味五味消毒飲治療中重度痤瘡療效以及對(duì)Th17細(xì)胞的影響。方法 檢測(cè)健康對(duì)照組30名，輕度痤瘡組32例以及中重度痤瘡組45例外周血IL-17水平和Th17細(xì)胞在外周血中占CD4+細(xì)胞比例。45例中重度痤瘡患者隨機(jī)分成兩組，治療組采用加味五味消毒飲治療，對(duì)照組采用異維A酸治療，比較兩組臨床療效和治療前后Th17細(xì)胞相關(guān)指標(biāo)。結(jié)果 健康對(duì)照組、輕度痤瘡組IL-17與Th17細(xì)胞兩項(xiàng)指標(biāo)顯著低于中重度痤瘡組（P＜0.05），健康對(duì)照組和輕度痤瘡組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。中重度痤瘡治療組和對(duì)照組治療后外周血Th17細(xì)胞相關(guān)指標(biāo)顯著降低（P＜0.05）。結(jié)論 加味五味消毒飲能有效治療中重度痤瘡，顯著降低患者外周血IL-17水平和Th17細(xì)胞在外周血中占CD4+細(xì)胞比例。

痤瘡；尋常性；加味五味消毒飲；Th17細(xì)胞

Th17細(xì)胞是一類新近發(fā)現(xiàn)的CD4+T細(xì)胞，研究發(fā)現(xiàn)，Th17細(xì)胞在防御細(xì)菌感染、介導(dǎo)慢性炎癥以及自身免疫病中發(fā)揮重要作用[1]。尋常性痤瘡，特別是中重度痤瘡，臨床表現(xiàn)為大量的丘疹、膿皰甚至結(jié)節(jié)、囊腫，明顯的炎性皮損。本研究通過(guò)研究中重度痤瘡患者外周血IL-17水平以及Th17細(xì)胞占外周血CD4+細(xì)胞比例，探討Th17細(xì)胞在中重度痤瘡發(fā)病及治療中的作用，并探討加味五味消毒飲治療中重度痤瘡的療效及可能機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象 隨機(jī)選取2012年7月—2013年8月我院門診尋常性痤瘡[2]患者77例。按照Pillsbury法[2]分為輕度痤瘡組32例，男14例，女18例，年齡14.2～38.3歲，平均（22.5±5.2）歲；病程3個(gè)月～8年，平均（2.3±0.6）年。中重度痤瘡組45例，男20例，女25例，年齡14.5～35.5歲，平均（21.3±4.2）歲；病程3個(gè)月～9年，平均（2.6±0.9）年。中重度痤瘡組患者隨機(jī)分為治療組25例，男12例，女13例，年齡13.6～36.2歲，平均（23.1±6.2）歲；病程6個(gè)月～6年，平均（2.5±0.8）年。對(duì)照組20例，男8例，女12例，年齡（15.6～40.3）歲，平均（22.5±5.2）歲；病程8個(gè)月～9年，平均（2.6±1.1）年。無(wú)痤瘡正常體檢者30名為健康對(duì)照組，男15名，女15名，年齡16.4～40.6歲，平均（22.5±5.2）歲。所有研究對(duì)象2個(gè)月內(nèi)均未使用皮質(zhì)類固醇激素、免疫抑制劑、抗生素治療。本研究經(jīng)溫州醫(yī)學(xué)院附屬第二醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，并同研究對(duì)象簽署知情同意書。各組年齡、性別、病程差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）.

1.2 主要試劑 培養(yǎng)基RPMI1640購(gòu)自Hyclone公司；滅活胎牛血清，購(gòu)自晶美生物公司；人IL-17ELISA試劑盒為美國(guó)Rapidbio公司產(chǎn)品；淋巴細(xì)胞分離液購(gòu)自由上海華精生物公司；人Th17Flow試劑盒為美國(guó)eBioscience產(chǎn)品。

1.3 治療方法 治療組內(nèi)服中藥方劑加味五味消毒飲：金銀花30g，紫花地丁、野菊花各15g，蒲公英、白花蛇舌草、海藻各30g，昆布15g，陳皮10g，青皮6g，當(dāng)歸、川芎各10g，1天1劑，水煎服，治療8周。對(duì)照組予異維A膠丸（商品名：泰爾絲）10mg，口服，1天3次，療程8周。所有患者均外用夫西地酸軟膏（商品名：奧絡(luò)），1天2次。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1 血清樣本以及細(xì)胞準(zhǔn)備 抽取研究對(duì)象外周血3mL，室溫靜置30min，以1500r/min離心15min，取其上清液，于-20℃保存?zhèn)溆?，剩余樣本加PBS液稀釋 1倍混勻后加入分離液 Ficoll-Hypaque，以1500r/min離心10min，收集單個(gè)核細(xì)胞，用RPMI 1640培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞濃度為2×106/mL。

1.4.2 IL-17檢測(cè) 上清液用人IL-17ELISA試劑盒，以及多功能微孔板分析儀，檢測(cè)出各血清吸光度，通過(guò)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出標(biāo)本中IL-17濃度。

1.4.3 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)Th17細(xì)胞 按人Th17Flow試劑盒操作說(shuō)明書，加入滲透洗脫緩沖液重懸細(xì)胞，分別加入FICT標(biāo)記的人CD4抗體和PE標(biāo)記的人IL-17A抗體，作流式細(xì)胞術(shù)分析，用Th17細(xì)胞占外周血CD4+細(xì)胞比例評(píng)價(jià)Th17細(xì)胞水平。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料數(shù)據(jù)以（±s） 表示，采用單因素方差分析和配對(duì)資料t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用Radit分析。以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 療效標(biāo)準(zhǔn)[3]痊愈：治療前后皮損總數(shù)減少90%以上；顯效：治療后皮損總數(shù)減少60%～89%；好轉(zhuǎn)：治療后皮損總數(shù)減少30%～59%；無(wú)效：治療后皮損減少30%以下或加重。

2.2 三組Th17細(xì)胞相關(guān)指標(biāo)比較 中重度痤瘡組IL-17與Th17細(xì)胞均高于健康對(duì)照組和輕度痤瘡組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。輕度痤瘡組與健康對(duì)照組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表1。

表1 三組外周血IL-17、Th17細(xì)胞比較（±s）

表1 三組外周血IL-17、Th17細(xì)胞比較（±s）

注：與健康對(duì)照組及輕度痤瘡組比較，*P＜0.05

組 別n/例IL-17/（ng/L）Th17細(xì)胞/%健康對(duì)照組輕度痤瘡組中重度痤瘡組30 32 45 17.52±1.11 17.93±1.26 25.19±3.25* 2.58±0.43 2.53±0.46 4.80±0.53*

2.3 中重度痤瘡患者兩組療效比較 治療組25例中痊愈7例（28.0%），顯效9例（36.0%），好轉(zhuǎn)5例（20.0%），無(wú)效4例（16.0%），總有效率84.0%。對(duì)照組20例中痊愈6例（30.0%），顯效7例（35.0%），好轉(zhuǎn)4例（20.0%），無(wú)效3例（15.0%），總有效率85.0%。兩組療效差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

2.4 中重度痤瘡患者Th17細(xì)胞相關(guān)指標(biāo)比較 中重度痤瘡患者治療后IL-17、Th17細(xì)胞均明顯下降（P＜0.05），見表2。

表2 兩組血IL-17水平、Th17細(xì)胞比較（±s）

表2 兩組血IL-17水平、Th17細(xì)胞比較（±s）

注：與治療前比較，△P＜0.05

組 別n/例IL-17/（ng/L）Th17細(xì)胞/%治療組25對(duì)照組20治療前治療后治療前治療后25.39±3.63 17.28±2.38△24.95±2.79 18.15±3.27△4.72±0.52 2.44±0.47△4.79±0.51 2.75±0.54△

2.5 不良反應(yīng) 治療組25例出現(xiàn)輕度腹瀉3例，停藥后癥狀消失；對(duì)照組20例出現(xiàn)口唇干燥脫屑17例，血甘油三酯增高3例，谷丙轉(zhuǎn)氨酶輕度增高2例，停藥1個(gè)月后，癥狀消失，血液檢查恢復(fù)正常。

3 討論

輕度痤瘡病理表現(xiàn)為毛囊漏斗內(nèi)的角化細(xì)胞潴留及毛囊漏斗部囊狀擴(kuò)張，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)較少。中重度痤瘡病理表現(xiàn)為毛囊漏斗上皮破裂，中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、巨嗜細(xì)胞、異物巨細(xì)胞聚集，明顯的炎癥臨床及病理表現(xiàn)。

我們研究發(fā)現(xiàn)，尋常性痤瘡患者皮損炎癥程度與外周血Th17細(xì)胞和IL-17有相關(guān)性，中重度痤瘡患者外周血Th17細(xì)胞和IL-17明顯高于健康對(duì)照組以及輕度痤瘡患者（P＜0.05），而輕度痤瘡患者與正常對(duì)照組之間無(wú)顯著差異。這些結(jié)果提示，Th17細(xì)胞可能在中重度痤瘡炎癥性的皮疹形成中發(fā)揮重要作用[4]。

加味五味消毒飲由五味消毒飲合海藻、昆布、陳皮、當(dāng)歸、川芎、青皮組成，具有清熱解毒，涼血清腫，活血祛瘀，軟堅(jiān)散結(jié)功效。維甲酸類藥物具有抗炎活性，抑制皮脂腺活性、減少皮脂分泌、減慢上皮細(xì)胞角化、抑制痤瘡丙酸桿菌的作用。臨床用于痤瘡特別是中重度痤瘡治療[5]。

本組結(jié)果顯示，加味五味消毒飲和異維A酸治療中重度痤瘡，外周血IL-17和外周血中Th17細(xì)胞占CD4+細(xì)胞的比例均下降。顯示異維A酸有抑制炎癥反應(yīng)的作用。而加味五味消毒飲治療后外周血Thl7細(xì)胞及其效應(yīng)因子IL-17明顯降低，可能與該方劑抑制炎癥作用機(jī)制有關(guān)。但加味五味消毒飲對(duì)中重度痤瘡的治療機(jī)制以及下調(diào)Th17細(xì)胞及其細(xì)胞因子的機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。

［1］Bettelli E，Korn T，Kuchroo VK.Th17：the third member of the effector T cell trilogy［J］.Curr Opin Immunol，2007，19（6）：652-657.

［2］趙辨.中國(guó)臨床皮膚病學(xué)［M］.南京：江蘇科學(xué)技術(shù)出版社，2009：1165-1169.

［3］中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部.中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則（第三輯）［S］.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，1997：89-90.

［4］馬新華，邵文俊，金宛宛，等.尋常痤瘡皮損炎癥程度與外周血Th17細(xì)胞和IL-17的關(guān)系［J］.中國(guó)麻風(fēng)皮膚病雜志，2014，30（2）：79-81.

［5］周展超.國(guó)產(chǎn)異維A酸治療尋常痤瘡的10年回顧［J］.中華皮膚科雜志，2007，40（5）：320-321.

Therapeutic Effect of Jiawei Wuweixiaodu Decoction on Treatment of Moderate or Severe Acne Vulgaris and ItsEffect on Th17 Cells in Patients

MA Xinhua,CHEN Shisheng,JlN Wanwan.Department of Dermatology,Second Affiliated Hospital of Wenzhou Medical University,Wenzhou(325027),China

Objective To investigate the effect of Jiawei Wuweixiaodu decoction（JWD）on patients with moderate or severe acne vulgaris（MSAV）and its effect on Th17 cells.Methods Peripheral blood samples were drawn from 30 healthy controls,32 patients with mild acne vulgaris,and 45 patients with MSAV to detect serum level of IL-17 and the proportion of Th17 cells.The 45 patients with MSAV were divided into two subgroups by random: treatment group（n=25）and control group（n=20）,receiving JWD and isotretinoin,respectively.The therapeutic effect and the level of IL-17 and the proportion of Th17 were compared between two groups.Results The serum level of IL-17 and the proportion of Th17 in healthy controls and mild acne vulgaris groups were lower than those in MSAV group（P＜0.05）,but no significant difference was found between healthy controls and patients with mild acne vulgaris（P＞0.05）.The total effective rate in treatment group and control group was 84%and 85%,respectively. The serum level of IL-17 and the proportion of Th17 were decreased after treatment compared with those before treatment in both two groups（P＜0.05）.Conclusion JWD can effectively treat patients with MSAV by lowering serum IL-17 level and the proportion of Th17 cells.

acne；vulgaris；Jiawei Wuweixiaodu decoction；Th17 cells

2014-03-09

修回日期：2014-06-06

浙江省溫州市科技計(jì)劃項(xiàng)目（No.Y20120173）