周李, 劉群, 王賽,楊榮, 康蓮蓮, 邱園園, 韓金潭

(西南民族大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院, 四川成都, 610041)

抗病毒中藥復(fù)方制劑對(duì)雛雞免疫功能影響的研究

周李, 劉群, 王賽,楊榮, 康蓮蓮, 邱園園, 韓金潭

(西南民族大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院, 四川成都, 610041)

探討抗病毒中藥對(duì)雛雞免疫功能的影響, 為藥理作用和臨床合理用藥提供科學(xué)依據(jù).采用水萃取法制備抗病毒中藥復(fù)方浸膏制劑, 將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為陰性對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組、低劑量中藥組、中劑量中藥組和高劑量中藥組, 在免疫接種NDV-Lasota株滅活疫苗的基礎(chǔ)之上, 以NDV-Ab(雞新城疫病毒抗體)、CD4+/CD8+T淋巴細(xì)胞比值為檢測(cè)指標(biāo),研究中藥復(fù)方制劑對(duì)雛雞免疫功能的影響.實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明: 高劑量中藥組在連續(xù)給藥 5d后, 能夠促進(jìn)實(shí)驗(yàn)雛雞在疫苗接種后7-14d的NDV-Ab水平急劇上升, 14d達(dá)到最高(27.8073ng/L), 極顯著高于陽(yáng)性對(duì)照組的17.8183ng/L(P＜0.01); 3個(gè)劑量中藥組均能提高實(shí)驗(yàn)雛雞在疫苗接種后7-14d外周血T淋巴細(xì)胞CD4+/CD8+比值的作用, 14d達(dá)到最高, 高于陽(yáng)性對(duì)照組(P＜0.05).結(jié)論: 抗病毒中藥復(fù)方制劑具有誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)雛雞體液免疫應(yīng)答的作用, 誘導(dǎo)作用可能與中藥劑量及機(jī)體的免疫狀態(tài)有關(guān).

抗病毒中藥復(fù)方制劑; 雛雞; NDV-Ab; CD4+/CD8+

根據(jù)中醫(yī)藥理論及病毒性疾病的治療原則, 以“祛邪”藥白花蛇舌草、金銀花和“扶正”藥黃芪、甘草等組成抗病毒中藥復(fù)方制劑, 在對(duì)獸醫(yī)臨床自然發(fā)病的雞新城疫(ND)、雞傳染性法氏囊病(IBD)、鴨病毒性肝炎(DH)、禽流感H9(AI)、禽腫頭綜合征等疾病進(jìn)行治療并取得了良好效果的基礎(chǔ)之上［1］, 為了探討其抗病毒作用機(jī)理, 本研究在 14日齡雛雞接種 NDV-Lasota株滅活疫苗的情況下, 連續(xù)給予不同劑量的抗病毒中藥復(fù)方制劑, 以NDV-Ab(新城疫病毒抗體)、CD4+/CD8+(CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞比值)為檢測(cè)指標(biāo), 研究中藥復(fù)方對(duì)雛雞免疫功能的影響, 現(xiàn)將研究結(jié)果報(bào)告如下.

1 材料

1.1 疫苗

NDV油乳劑滅活疫苗, 由華南農(nóng)業(yè)大學(xué)生物藥品有限公司提供(NDV-Lasota株, 批號(hào): 2012001, 生產(chǎn)日期:20120101).

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

14日齡青腳麻羽雛雞, 由成都農(nóng)業(yè)科技職業(yè)學(xué)院提供.

1.3 受試藥物

中藥復(fù)方制劑由白花蛇舌草、金銀花、黃芪、甘草等中藥組成.中藥飲片購(gòu)于四川省成都市北京同仁堂,由四川省獸藥監(jiān)察所鑒定.

1.4 主要試劑和儀器

雞NDV-Ab ELISA試劑盒(北京雅安達(dá)生物技術(shù)有限公司, 201202); 雞外周血淋巴細(xì)胞分離液(天津市灝洋生物制品科技有限責(zé)任公司, 20111201); FITC和 R-PE熒光標(biāo)記小鼠抗雞的 CD4+和 CD8+單克隆抗體(SouthernBiotech, C1706-FN70E、G149-VJ39V); Aria II分選型流式細(xì)胞儀(美國(guó), BD); 抗凝劑(EDTA-2Na); 超速離心機(jī)(德國(guó), Eppendorf); Synergy HT多功能酶標(biāo)儀(美國(guó), BioTek)等.

2 方法

2.1 中藥復(fù)方口服液的制備

將中藥飲片混合, 參照江平康等[2]水萃取工藝: 浸泡0.5小時(shí)、12倍加水量、煎煮3次、煎煮時(shí)間1小時(shí),水提浸膏收率為57.2%, 換算成生藥含量并分別制成2g/ml、1g/ml、0.5g/ml的口服液, 4℃冰箱保存.

2.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及處理

14日齡青腳麻羽雛雞150只, 隨機(jī)分成5組, 每組30只.各組處理如下:

陰性對(duì)照組: 按0.5ml/只頸部皮下注射滅菌生理鹽水, 常規(guī)飼喂.

陽(yáng)性對(duì)照組: 按0.5ml/只頸部皮下注射NDV油乳劑滅活疫苗, 常規(guī)飼喂.

高劑量中藥組: 按0.5ml/只頸部皮下注射NDV油乳劑滅活疫苗, 同時(shí)按4g(生藥)/kg(體重)/天拌料口服中藥復(fù)方口服液, 連續(xù)服用5天.

中劑量中藥組: 按0.5ml/只頸部皮下注射NDV油乳劑滅活疫苗, 同時(shí)按2g(生藥)/kg(體重)/天拌料口服中藥復(fù)方口服液, 連續(xù)服用5天.

低劑量中藥組: 按0.5ml/只頸部皮下注射NDV油乳劑滅活疫苗, 同時(shí)按1g(生藥)/kg(體重)/天拌料口服中藥復(fù)方口服液, 連續(xù)服用5天.

2.3 檢測(cè)指標(biāo)

2.3.1 NDV-Ab測(cè)定

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在分組和處理前隨機(jī)抽取5只雛雞, 翅靜脈采血各1.5ml; 疫苗接種及處理后的第7、14、21、28d,即 14、21、28、35、42日齡, 每組隨機(jī)抽取 5只雛雞、翅靜脈采血各 1.5ml, 血液室溫自然凝固 10-20min后,2000-3000rpm離心20min, 收集血清, 供NDV-Ab的測(cè)定.NDV-Ab的測(cè)定參照雞NDV-Ab ELISA試劑盒使用說(shuō)明書進(jìn)行.

2.3.2 CD4+/CD8+T淋巴細(xì)胞的檢測(cè)

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在分組和處理前隨機(jī)抽取 6只雛雞, 翅靜脈采血各 2ml; 疫苗接種及處理后的的第 7、14、21、28d, 即14、21、28、35、42日齡, 每組隨機(jī)抽取6只雛雞, 翅靜脈采血各2ml, EDTA-2Na抗凝, 加入2mlPBS液稀液并混勻, 按照雞外周血淋巴細(xì)胞分離、雞 CD4+和 CD8+單克隆抗體試劑盒使用說(shuō)明書及流式細(xì)胞儀操作規(guī)程檢測(cè)CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞的含量, 并計(jì)算其比值.

2.3.3 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的處理

3 結(jié)果與分析

3.1 對(duì)雛雞NDV-Ab效價(jià)的影響

3.1.1 NDV-Ab標(biāo)準(zhǔn)品結(jié)果

NDV-Ab標(biāo)準(zhǔn)品結(jié)果見表1, 圖1

表1 NDV-Ab標(biāo)準(zhǔn)品吸光值(450nm)Table1 Absorbance of NDV-Ab standard product(450nm)

圖1 NDV-Ab標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig1 NDV-Ab standard curve

標(biāo)準(zhǔn)曲線是以標(biāo)準(zhǔn)品濃度由低到高, 從左至右作為橫坐標(biāo)X軸, 450nm下讀取的各檢測(cè)孔O.D值作為縱坐標(biāo)Y軸, 在Logit-Log直線回歸模式下繪制的曲線.該曲線相關(guān)系數(shù)(R2)為0.9864, 已達(dá)到實(shí)驗(yàn)要求(＞0.92), 表示標(biāo)準(zhǔn)曲線方程可用.

3.1.2 各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物組內(nèi)NDV-Ab水平的變化情況

各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物組內(nèi)NDV-Ab水平的動(dòng)態(tài)變化情況見表2

表2 各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物組內(nèi)NDV-Ab水平的動(dòng)態(tài)變化值(ng/L, ±Se, n﹦5)Table2 Dynamic change value of NDV-Ab in each group(ng/L , ±Se, n﹦5)

表2 各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物組內(nèi)NDV-Ab水平的動(dòng)態(tài)變化值(ng/L, ±Se, n﹦5)Table2 Dynamic change value of NDV-Ab in each group(ng/L , ±Se, n﹦5)

注: 同行右肩有相同小寫字母的數(shù)據(jù)表示無(wú)顯著差異, P>0.05; 完全無(wú)相同字母的數(shù)據(jù)表示有顯著差異, P<0.05; 同行右肩有相同大寫字母的數(shù)據(jù)表示無(wú)極顯著差異, P＞0.01; 完全無(wú)相同字母的數(shù)據(jù)表示有極顯著差異, P＜0.01.Note: The dates with different lowercases within a row means significant difference(P＜0.05); and the same lowercase mean no significant difference(P＞0.05); The date with different uppercases within a row means most significant difference(P＜0.01); and the same lowercase mean no most significant difference(P＞0.01).

表2表明: 陰性對(duì)照組在實(shí)驗(yàn)第7d(21日齡), NDV-Ab有所下降(0.01＜P＜0.05), 之后NDV-Ab開始上升并維持至42日齡, 高于實(shí)驗(yàn)前和實(shí)驗(yàn)后第7d的水平(P＜0.01); 其它各組在注射疫苗后第7d, NDV-Ab變化不大,之后開始上升, 其中陽(yáng)性對(duì)照組NDV-Ab在免疫后的14d至28d維持在一個(gè)較高的水平, 均極顯著高于實(shí)驗(yàn)前和免疫后的第 7d(P＜0.01); 高劑量中藥組和低劑量中藥組在免疫后的第 14d, NDV-Ab水平急劇升高(P＜0.01),之后雖明顯下降(P＜0.01), 但仍明顯高于(P＜0.01)實(shí)驗(yàn)前和免疫接種后的第7d的NDV-Ab水平; 中劑量中藥組在免疫接種后 14d, NDV-Ab水平明顯升高(P＜0.01), 之后抗體水平走勢(shì)與陽(yáng)性對(duì)照組相似.實(shí)驗(yàn)表明: 高劑量中藥組在連續(xù)給藥5d后, 能夠促進(jìn)實(shí)驗(yàn)雛雞在接種新城疫滅活疫苗后14d的NDV-Ab水平急劇升高, 之后雖有所下降, 但仍極顯著高于接種前的水平.

3.1.3 各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物組間NDV-Ab水平的動(dòng)態(tài)變化情況

各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物組間NDV-Ab水平的動(dòng)態(tài)變化情況見表3

表3 各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物組間NDV-Ab水平的動(dòng)態(tài)變化值(ng/L, ±Se, n﹦5)Table3 Dynamic change value of NDV-Ab with each group(ng/L , ±Se, n﹦5)

表3 各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物組間NDV-Ab水平的動(dòng)態(tài)變化值(ng/L, ±Se, n﹦5)Table3 Dynamic change value of NDV-Ab with each group(ng/L , ±Se, n﹦5)

注: 同列右肩有相同小寫字母的數(shù)據(jù)表示無(wú)顯著差異, P>0.05; 完全無(wú)相同字母的數(shù)據(jù)表示有顯著差異, P<0.05; 同列右肩有相同大寫字母的數(shù)據(jù)表示無(wú)極顯著差異, P＞0.01; 完全無(wú)相同字母的數(shù)據(jù)表示有極顯著差異, P＜0.01.Note: The dates with different lowercases within a row means significant difference(P＜0.05); and the same lowercase mean no significant difference(P＞0.05); The date with different uppercases within a row means most significant difference(P＜0.01); and the same lowercase mean no most significant difference(P＞0.01).

表3表明: 免疫后第7d, 低劑量中藥組NDV-Ab水平均顯著高于其它實(shí)驗(yàn)動(dòng)物組(P＜0.05); 免疫后第14d,除中劑量中藥組外, 其它各組 NDV-Ab水平均高于陰性對(duì)照組, 差異極顯著(P＜0.01), 尤其是高劑量中藥組NDV-Ab水平同時(shí)高于陽(yáng)性對(duì)照組和低劑量中藥組, 差異極顯著(P＜0.01); 免疫后第21天, 除中劑量中藥組外,其它各組 NDV-Ab水平均顯著高于陰性對(duì)照組(P＜0.05), 且高劑量組差異達(dá)到極顯著水平(P＜0.01), 高劑量中藥組和低劑量中藥組水平相當(dāng), 雖與中劑量中藥組無(wú)極顯著差異(P＞0.01), 但仍具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05); 免疫后第28天, 高劑量中藥組NDV-Ab水平高于其它各組, 差異極顯著(P＜0.01), 其他各組間均無(wú)顯著差異(P＞0.05).實(shí)驗(yàn)表明: 高劑量中藥組在連續(xù)給藥5d后, 能夠促進(jìn)實(shí)驗(yàn)雛雞在接種新城疫滅活疫苗后14d的NDV-Ab水平急劇升高, 極顯著高于陽(yáng)性對(duì)照組(P＜0.01), 之后雖有所下降, 但仍然高于陽(yáng)性對(duì)照組和中、低劑量中藥組的NDV-Ab水平(P＜0.05).

綜合以上分析, 結(jié)合各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物NDV-Ab水平變化折線圖2.

圖2 各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物NDV-Ab水平的動(dòng)態(tài)變化折線圖Fig2 The line graph of dynamic Change of NDV-Ab with each group

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明: 高劑量中藥組在連續(xù)給藥 5d后, 能夠促進(jìn)實(shí)驗(yàn)雛雞在接種新城疫滅活疫苗后 7-14d的NDV-Ab水平急劇升高, 免疫14d后達(dá)到最高(27.8073ng/L), 極顯著高于陽(yáng)性對(duì)照組的17.8183ng/L, 之后雖有所下降, 但仍然高于陽(yáng)性對(duì)照組和中、低劑量中藥組的 NDV-Ab水平(P＜0.05), 表明大劑量的抗病毒中藥復(fù)方制劑具有促進(jìn)實(shí)驗(yàn)雛雞在接種新城疫疫苗后新城疫抗體生成的作用.

3.2 對(duì)雛雞CD4+/CD8+T淋巴細(xì)胞水平的影響

3.2.1 各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物組內(nèi)CD4+/CD8+T淋巴細(xì)胞比值的變化情況

各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物組內(nèi)CD4+/CD8+T淋巴細(xì)胞水平的動(dòng)態(tài)變化情況見表4

表4 各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物組內(nèi)CD4+/CD8+T淋巴細(xì)胞水平的動(dòng)態(tài)變化值(±Se, n﹦6)Table4 Dynamic change value of CD4+/CD8+Tlymphocytes in each group(±Se, n﹦6)

表4 各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物組內(nèi)CD4+/CD8+T淋巴細(xì)胞水平的動(dòng)態(tài)變化值(±Se, n﹦6)Table4 Dynamic change value of CD4+/CD8+Tlymphocytes in each group(±Se, n﹦6)

注: 同行右肩有相同小寫字母的數(shù)據(jù)表示無(wú)顯著差異, P>0.05; 完全無(wú)相同字母的數(shù)據(jù)表示有顯著差異, P<0.05; 同行右肩有相同大寫字母的數(shù)據(jù)表示無(wú)極顯著差異, P＞0.01; 完全無(wú)相同字母的數(shù)據(jù)表示有極顯著差異, P＜0.01.Note: The dates with different lowercases within a row means significant difference(P＜0.05); and the same lowercase mean no significant difference(P＞0.05); The date with different uppercases within a row means most significant difference(P＜0.01); and the same lowercase mean no most significant difference(P＞0.01).

表4表明: 陰性對(duì)照組, 在實(shí)驗(yàn)第7d, CD4+/CD8+T淋巴細(xì)胞并沒(méi)有顯著變化, 第14d比值顯著上升(P＜0.01)并維持在較高的狀態(tài), 與實(shí)驗(yàn)前差異極顯著(P＜0.01); 陽(yáng)性對(duì)照組, 免疫接種后第7d, CD4+/CD8+T淋巴細(xì)胞比值極顯著上升并達(dá)到最高峰, 維持到免疫接種后的 14d, 差異極顯著(P＜0.01), 之后略有下降, 但仍顯著高于實(shí)驗(yàn)前的水平(P＜0.05); 3個(gè)中藥劑量組在免疫接種后第7d, CD4+/CD8+T淋巴細(xì)胞開始上升并達(dá)到最高峰, 差異極顯著(P＜0.01), 其中高劑量中藥組和中劑量中藥組在免疫接種后第 14d有所下降, 但仍極顯著高于實(shí)驗(yàn)前水平(P＜0.01), 低劑量中藥組在免疫接種后第14d, CD4+/CD8+T淋巴細(xì)胞比值開始下降, 到免疫接種后的21d與實(shí)驗(yàn)前的 CD4+/CD8+T淋巴細(xì)胞比值無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05).實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明: 大劑量的中藥復(fù)方制劑具有極顯著提高實(shí)驗(yàn)雛雞在接種新城疫疫苗后第7d外周血淋巴細(xì)胞(PBL)CD4+/CD8+T淋巴細(xì)胞比值的作用.

3.2.2 各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物組間CD4+/CD8+T淋巴細(xì)胞比值的變化情況

各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物組間CD4+/CD8+T淋巴細(xì)胞比值的動(dòng)態(tài)變化情況見表5

表5 各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物組間CD4+/CD8+T淋巴細(xì)胞水平的動(dòng)態(tài)變化值(±Se, n﹦6)Table 5 Dynamic change value of CD4+/CD8+Tlymphocytes with each group(±Se, n﹦6)

表5 各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物組間CD4+/CD8+T淋巴細(xì)胞水平的動(dòng)態(tài)變化值(±Se, n﹦6)Table 5 Dynamic change value of CD4+/CD8+Tlymphocytes with each group(±Se, n﹦6)

注: 同列右肩有相同小寫字母的數(shù)據(jù)表示無(wú)顯著差異, P>0.05; 完全無(wú)相同字母的數(shù)據(jù)表示有顯著差異, P<0.05; 同列右肩有相同大寫字母的數(shù)據(jù)表示無(wú)極顯著差異, P＞0.01; 完全無(wú)相同字母的數(shù)據(jù)表示有極顯著差異, P＜0.01.Note: The dates with different lowercases within a row means significant difference(P＜0.05); and the same lowercase mean no significant difference(P＞0.05); The date with different uppercases within a row means most significant difference(P＜0.01); and the same lowercase mean no most significant difference(P＞0.01).

表5表明: 實(shí)驗(yàn)第7d, 陽(yáng)性對(duì)照組和3個(gè)中藥劑量組, CD4+/CD8+T淋巴細(xì)胞比值和陰性對(duì)照組相比較, 差異極顯著(P＜0.01); 免疫接種后第14d, 陽(yáng)性對(duì)照組和中、低劑量中藥組CD4+/CD8+T淋巴細(xì)胞水平與陰性對(duì)照組相比較, 差異極顯著(P＜0.01),高劑量中藥組具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05); 免疫接種后第21d, 陽(yáng)性對(duì)照組、低劑量中藥組CD4+/CD8+T淋巴細(xì)胞水平高于陰性對(duì)照組, 但沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05), 高劑量中藥組、中劑量中藥組與陰性對(duì)照組相比較, 差異顯著(P＜0.05), 且中劑量中藥組差異極顯著(P＜0.01); 免疫接種后第 28d, 除中劑量中藥組外, 其它各組與陰性對(duì)照組均沒(méi)有顯著差異(P＞0.05), 中劑量中藥組差異極顯著(P＜0.01).實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明: 中藥組在連續(xù)給藥5d后, 能夠促進(jìn)實(shí)驗(yàn)雛雞在接種新城疫滅活疫苗后7-14d的CD4+/CD8+T淋巴細(xì)胞水平升高, 免疫后 14d達(dá)到最高, 之后雖有所下降, 但仍然高于陰性對(duì)照組, 尤其是中劑量中藥組的CD4+/CD8+T淋巴細(xì)胞比值高于陽(yáng)性對(duì)照組的水平(P＜0.05).

綜合以上分析, 結(jié)合各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物CD4+/CD8+T淋巴細(xì)胞比值變化折線圖3.

圖3 各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物CD4+/CD8+T淋巴細(xì)胞水平的動(dòng)態(tài)變化折線圖Fig3 The line graph of dynamic Change of CD4+/CD8+T lymphocytes with each group

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明: 3個(gè)劑量中藥組在連續(xù)給藥 5d后, 能夠促進(jìn)實(shí)驗(yàn)雛雞在接種新城疫滅活疫苗后 7d的CD4+/CD8+T淋巴細(xì)胞比值水平升高并高于陽(yáng)性對(duì)照組, 之后雖略有下降, 但中劑量中藥組的CD4+/CD8+T淋巴細(xì)胞比值仍高于陽(yáng)性對(duì)照組并且維持到免疫接種后的第 28d.表明抗病毒中藥復(fù)方制劑具有提高雞的高抗體免疫應(yīng)答過(guò)程中 CD4+/CD8+T淋巴細(xì)胞比值的作用, 并預(yù)示這種作用可能與藥物劑量和機(jī)體的免疫狀態(tài)等因素有關(guān).

4 討論與結(jié)論

本研究采用雞NDV-Ab-ELISA法測(cè)定血清標(biāo)本中雞NDV-Ab水平: 用純化的雞NDV抗原包被微孔板制成固相抗原, 依次與NDV-Ab和與HRP標(biāo)記的雞NDV抗原結(jié)合, 形成抗原-抗體-酶標(biāo)抗原復(fù)合物, 加底物TMB顯色, 顏色的深淺與樣本中NDV-Ab呈正相關(guān), 通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣品中雞NDV-Ab的濃度(ng/L).實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明: 高劑量中藥組在連續(xù)給藥5d后, 能夠促進(jìn)實(shí)驗(yàn)雛雞在接種新城疫滅活疫苗后7-14d的NDV-Ab水平急劇升高, 免疫14d后達(dá)到最高(27.8073ng/L), 極顯著高于陽(yáng)性對(duì)照組的17.8183ng/L, 之后雖有所下降, 但仍然高于陽(yáng)性對(duì)照組和中、低劑量中藥組的NDV-Ab水平(P＜0.05), 表明大劑量的該中藥復(fù)方制劑具有促進(jìn)實(shí)驗(yàn)雛雞在接種新城疫疫苗后新城疫抗體生成的作用.

CD4和CD8分子是動(dòng)物白細(xì)胞表面重要的分化抗原, 主要分布在 T淋巴細(xì)胞的表面, 作為免疫粘附因子,通過(guò)MHC的限制性, 在雞的免疫應(yīng)激和疾病感染過(guò)程中發(fā)揮著重要作用[3].CD4抗原是Th(輔助性T細(xì)胞)的重要表面標(biāo)志, 能識(shí)別結(jié)合在 MHC-Ⅱ類抗原上的異抗原, 分泌多種淋巴因子(如巨噬細(xì)胞游走抑制因子, 淋巴毒素, γ-干擾素等), 既能輔助B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生體液免疫應(yīng)答, 又能輔助T細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞免疫應(yīng)答, 是擴(kuò)大免疫應(yīng)答的主要成分; CD8抗原是Tc細(xì)胞(細(xì)胞毒性T細(xì)胞)的重要表面標(biāo)志, 能識(shí)別結(jié)合在MHC-Ⅰ類抗原上的異抗原,能特異地殺傷靶細(xì)胞, 是細(xì)胞免疫應(yīng)答的主要成分.在雞的高抗體免疫應(yīng)答過(guò)程中CD4T淋巴細(xì)胞比例高, CD4＋/CD8＋比值增加, 在低抗體免疫應(yīng)答過(guò)程中CD8T淋巴細(xì)胞比例高, CD4＋/CD8＋比值下降[4].CD4和CD8作為T淋巴細(xì)胞表面重要的標(biāo)記分子, 目前主要采用基于標(biāo)記的單克隆抗體的流式細(xì)胞術(shù)和免疫組化法對(duì)CD4、CD8T淋巴細(xì)胞進(jìn)行定量檢測(cè)[5].

本實(shí)驗(yàn)對(duì)雛雞CD4+/CD8+T淋巴細(xì)胞水平的研究結(jié)果表明: 免疫接種后第7-14d, 陽(yáng)性對(duì)照組和高、中、低劑量中藥組, CD4+/CD8+T淋巴細(xì)胞比值和陰性對(duì)照組相比較差異顯著(P＜0.01、P＜0.05), 說(shuō)明接種NDV-Lasota油乳劑滅活疫苗后引起機(jī)體體液免疫應(yīng)答為主; 免疫接種后第21d, 陽(yáng)性對(duì)照組、低劑量中藥組CD4+/CD8+T淋巴細(xì)胞水平雖然高于陰性對(duì)照組, 但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05), 高劑量中藥組、中劑量中藥組與陰性對(duì)照組相比較,差異顯著(P＜0.05), 且中劑量中藥組差異極顯著(P＜0.01); 免疫接種后第 28d, 除中劑量中藥組外, 其它各組與陰性對(duì)照組比較均沒(méi)有顯著差異(P＞0.05), 中劑量中藥組差異極顯著(P＜0.01)并顯著高于陽(yáng)性對(duì)照組, 實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明中藥組在連續(xù)給藥5d后, 能夠促進(jìn)實(shí)驗(yàn)雛雞在接種新城疫滅活疫苗后7-14d的CD4+/CD8+T淋巴細(xì)胞水平升高, 免疫后 14d達(dá)到最高, 之后雖有所下降, 但仍然高于陰性對(duì)照組, 尤其是中劑量中藥組的CD4+/CD8+T淋巴細(xì)胞比值高于陽(yáng)性對(duì)照組的水平(P＜0.05).

綜合實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分析: 3個(gè)劑量中藥組在連續(xù)給藥 5d后, 能夠促進(jìn)實(shí)驗(yàn)雛雞在接種新城疫滅活疫苗后 7d的CD4+/CD8+T淋巴細(xì)胞比值水平升高并高于陽(yáng)性對(duì)照組, 之后雖略有下降, 但中劑量中藥組的CD4+/CD8+T淋巴細(xì)胞比值仍高于陽(yáng)性對(duì)照組并且維持到免疫接種后的第 28d.表明該中藥復(fù)方制劑具有提高雞的高抗體免疫應(yīng)答過(guò)程中CD4T淋巴細(xì)胞比例的作用, 并預(yù)示這種作用可能與藥物劑量和機(jī)體的免疫狀態(tài)等因素有關(guān).

[1]劉群, 朱子鳳, 周李, 等.中藥復(fù)方對(duì)家禽病毒性疾病的治療效果[J].安徵農(nóng)業(yè)科學(xué), 2011, 39(6): 3630-3632.

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Research on the effect of the antiviral Chinese herbal compound on the immune function of the chicks

ZHOU Li, LIU Qun, WANG Sai, KANG Lian-lian, YANG Rong, QIU Yuan-yuan, HAN Jin-tan
(College of Life Science and Technology, Southwest University for Nationalities, Chengdu 610041, P.R.C.)

This paper studies the effect of the Chinese herbal compound on the immune function of chicks, which would provide some references for its pharmacological research and its safe and logical clinical medication.The water extraction method was adopted to produce Chinese herbal compound extractum, and different doses of extractum were mixed with fodder to feed the chicks.All the experimental animals were divided into five groups: positive control group, low dose group, midst dose group, high dose group, and negative control group.After they were immunized with inactivated vaccine of NDV-Lasota,NDV-Ab, CD4+/CD8+were taken as the testing indexes to study the effect of the Chinese herbal compound on immunity function of the chicks.The results showed that: the level of NDV-Ab of high dose group rose sharply between 7thand 14thday,and by the 14thday it reached the highest level of 27.8073ng/L, which was significantly higher than that of control group(17.8183ng/L)(P＜0.01).The level of CD4+/CD8+in all the three different does groups rose, and reached the highest level on 14thday, which was higher than that of control group (P＜0.05).Conclusion: Chinese herbal compound could induce the humoral immune response, while this effect could be relative with the factors of drug dosage and immune state.

Antiviral Chinese herbal compound; chick; NDV-Ab; CD4+/CD8+

S853.7

A

1003-4271(2014)02-0179-07

10.3969/j.issn.1003-4271.2014.02.04

2013-12-19

劉群(1965-), 男, 博士, 副教授, Email: liuqun2567@qq.com.

國(guó)家“十二五”科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目(2011BAD34B02-4); 中央高?；究蒲袠I(yè)務(wù)費(fèi)科研建設(shè)平臺(tái)(11NPT03).