張春林，張莉（1.重慶福安藥業(yè)集團(tuán)禮邦藥物開(kāi)發(fā)有限公司，重慶 40111；.重慶華邦制藥有限公司，重慶 40111）

葡甲胺（Meglumine）[1-3]為白色至淡黃色結(jié)晶性粉末，無(wú)臭或微臭，由于其可與一些藥物生成鹽從而增加藥物的溶解度，故作為助溶劑被廣泛應(yīng)用于注射用制劑中。本品常用量下安全無(wú)毒，目前已被收載于《英國(guó)藥典》（BP）、《日本藥典》（JP）、《美國(guó)藥典》（USP）及美國(guó)FDA《非活性組分指南》（注射劑）中，近年來(lái)在我國(guó)也已得到國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局認(rèn)可用于注射劑中。2010年版《中國(guó)藥典》二部[4]采用滴定法測(cè)定其含量。為建立一種更簡(jiǎn)單、快速、準(zhǔn)確測(cè)定葡甲胺含量的方法，筆者查閱相關(guān)文獻(xiàn)[5-8]并對(duì)信息進(jìn)行整理，根據(jù)葡甲胺的性質(zhì)及各種分析方法的特點(diǎn)建立了測(cè)定其含量的高效液相色譜-示差折光檢測(cè)（HPLC-RID）法，并進(jìn)行了方法學(xué)研究，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料

1.1 儀器

LC-20AD HPLC儀（包括自動(dòng)進(jìn)樣器、四元輸液泵、柱溫箱）、RID-10A示差折光檢測(cè)器（日本島津公司）。

1.2 藥品與試劑

葡甲胺對(duì)照品（美國(guó)藥典委員會(huì)，批號(hào):FOD385，含量:100.0%）；葡甲胺原料藥（西安力邦制藥有限公司，批號(hào):120702B、120905B、130305B，純度:99.6%、99.7%、99.5%）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:月旭Ultimate?AQ-C18（250 mm×4.6 mm，5μm）；流動(dòng)相:水（用磷酸調(diào)節(jié)pH 2.5）-甲醇（95∶5），流速:0.5 ml/min；示差折光檢測(cè)器池溫為40℃；柱溫:35℃；進(jìn)樣量:20μl。

2.2 對(duì)照品溶液的配制

精密稱取葡甲胺對(duì)照品75 mg，置于25 ml量瓶中，用流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。

2.3 供試品溶液的配制

精密稱定葡甲胺樣品75 mg，置于25 ml量瓶中，用流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.4 測(cè)定方法

取對(duì)照品溶液和供試品溶液各20μl進(jìn)樣，按上述色譜條件進(jìn)行色譜分析，記錄葡甲胺的色譜峰面積，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算葡甲胺的含量。

2.5 空白試驗(yàn)及系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

2.5.1 空白試驗(yàn)。取流動(dòng)相作為空白溶液，按上述色譜條件進(jìn)樣分析，色譜圖見(jiàn)圖1A。

2.5.2 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)。取對(duì)照品溶液進(jìn)樣分析，結(jié)果葡甲胺的保留時(shí)間為7.224 min，理論板數(shù)為7678，對(duì)稱因子為1.019，色譜圖見(jiàn)圖1B。

2.6 線性關(guān)系試驗(yàn)

圖1 高效液相色譜圖A.空白溶液；B.對(duì)照品；C.供試品；1.葡甲胺Fig 1 HPLC chromatogramsA.blank solution；B.substance control；C.test sample；1.meglumine

精密稱定葡甲胺對(duì)照品1.5214 g，用流動(dòng)相溶解并稀釋至50 ml，搖勻，作為對(duì)照品貯備液。精密量取貯備液5、6、8、10、12、15 ml分別用流動(dòng)相稀釋定容至100 ml，得葡甲胺質(zhì)量濃度分別為1.52、1.83、2.43、3.04、3.65、4.56 mg/ml。測(cè)定對(duì)照品溶液主峰峰面積，以峰面積為縱坐標(biāo)（y）、質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（x）進(jìn)行線性回歸，得葡甲胺線性方程為:y＝390794x+2393.1（r＝0.9999）。結(jié)果表明，葡甲胺檢測(cè)質(zhì)量濃度線性范圍為1.52～4.56 mg/ml。

2.7 溶液的穩(wěn)定性試驗(yàn)

取3 mg/ml的供試品溶液1份，分別于0、2、4、8、12、24 h時(shí)間點(diǎn)測(cè)定葡甲胺的峰面積，結(jié)果在室溫條件下24 h內(nèi)峰面積的RSD＝0.27%（n＝6），表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 重復(fù)性試驗(yàn)

精密稱取葡甲胺樣品6份，配制成供試品溶液，分別進(jìn)樣20μl，測(cè)定葡甲胺的含量，結(jié)果葡甲胺含量的RSD＝0.1%（n＝6），表明方法重復(fù)性良好。

2.9 精密度試驗(yàn)

取已配制好的對(duì)照品溶液1份，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)得葡甲胺的峰面積的RSD＝0.14%（n＝6），表明方法精密度好。

2.10 回收率試驗(yàn)

精密稱取已知含量的同一批葡甲胺樣品（批號(hào):120702B）適量，置于25 ml量瓶中，共9份；再分別精密加入葡甲胺對(duì)照品（約60、75、90 mg各3份），加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻作為回收率供試品溶液，按上述方法進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算加樣回收率，試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果（n＝3）Tab 1 Result of recovery tests（n＝3）

表1結(jié)果顯示，葡甲胺的平均回收率為99.7%，RSD＝0.63%（n＝3），表明方法的準(zhǔn)確度好。

2.11 樣品含量測(cè)定

按“2.4”項(xiàng)下方法測(cè)定多批葡甲胺樣品的含量，同時(shí)與《中國(guó)藥典》方法測(cè)定結(jié)果進(jìn)行比較，結(jié)果見(jiàn)表2；供試品溶液（批號(hào):120720B）代表性圖譜見(jiàn)圖1C。

表2 兩種方法測(cè)定樣品中葡甲胺含量的比較（%）Tab 2 Comparison of the contents of meglumine in samples determined by 2 methods（%）

3 討論

3.1 檢測(cè)器的選擇

葡甲胺分子結(jié)構(gòu)中不含C＝C等發(fā)色基團(tuán)，除紫外末端外基本無(wú)吸收，所以決定采用通用型檢測(cè)器即RID對(duì)葡甲胺進(jìn)行含量測(cè)定。

3.2 流動(dòng)相及色譜柱的選擇

因葡甲胺分子結(jié)構(gòu)中含有5個(gè)醇羥基和1個(gè)氨基，分子極性很強(qiáng)，同時(shí)由于葡甲胺為堿性藥物，在常用反相色譜柱上保留較差，因此筆者通過(guò)多次嘗試及條件篩選，決定采用以水（用磷酸調(diào)節(jié)pH 2.5）-甲醇（95∶5）為流動(dòng)相；以月旭Ultimate?AQ-C18為色譜柱對(duì)葡甲胺進(jìn)行含量測(cè)定，結(jié)果表明分析效果理想。

采用本文所述方法測(cè)定多批葡甲胺樣品，測(cè)定結(jié)果與藥典方法一致，但采用本法可省去滴定法的煩瑣操作。同時(shí)，本方法也可用于葡甲胺制劑及部分藥物中功能性輔料葡甲胺含量的測(cè)定。

[1]（美）舍斯基，（英）韋勒.藥用輔料手冊(cè)[M].鄭俊民，譯.4版.北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2004:440-442.

[2]羅明生，高天惠，宋民憲.中國(guó)藥用輔料[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2006:705-706.

[3]侯惠民，王浩，張光杰.藥用輔料應(yīng)用技術(shù)[M].2版.北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2002:293-294.

[4]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典:二部[S].2010年版.北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010:926.

[5]岳云飛，張麗英，劉永成.HPLC法測(cè)定葡甲胺中的有關(guān)物質(zhì)[J].中國(guó)藥品標(biāo)準(zhǔn)，2011，12（3）:184.

[6]劉娜，張津楓，高瑞昶.葡萄糖與甲胺還原胺化產(chǎn)物的高效液相色譜分析[J].光譜實(shí)驗(yàn)室，2006，23（1）:35.

[7]曹玲，王亞超，馮有龍，等.茵梔黃注射液中助溶劑葡甲胺2種含量測(cè)定方法比較[J].藥物分析雜志，2011，31（6）:1126.

[8]李瑞萍，黃駿雄.親水作用色譜及其在堿性藥物分析中的應(yīng)用[J].化學(xué)進(jìn)展，2006，18（11）:1508.