雷 蕾葉 斌王西川

（1 成都市第六人民醫(yī)院腫瘤科，四川 成都 610051；2 成都市第六人民醫(yī)院病理科，四川 成都 610051）

P53和Ki67在食管癌中的表達(dá)及其臨床意義

雷 蕾1葉 斌1王西川2

（1 成都市第六人民醫(yī)院腫瘤科，四川 成都 610051；2 成都市第六人民醫(yī)院病理科，四川 成都 610051）

目的 研究P53蛋白、Ki67在食管癌中的表達(dá)，探討其臨床意義。方法 采用免疫組化法檢測(cè)35例食管癌，13例食管炎組織中P53蛋白和Ki67的表達(dá)水平，分析其與臨床及病理各參數(shù)的相關(guān)性。結(jié)果 P53蛋白、Ki67在食管癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于食管炎，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.046，P=0.001）。在食管癌組織中P53蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率在臨床分期、浸潤(rùn)程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及組織學(xué)分化程度方面有明顯差異（P＜0.05），Ki67的陽(yáng)性表達(dá)率僅與食管癌的臨床分期和浸潤(rùn)深度有關(guān)（P＜0.05），與組織學(xué)分化程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān)（P＞0.05）。食管癌組織中P53蛋白和Ki67的表達(dá)密切相關(guān)（P=0.006）。結(jié)論 P53蛋白和Ki67與食管癌的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)，二者協(xié)作檢測(cè)對(duì)判斷食管癌惡性程度和預(yù)后具有重要的臨床意義。

食管癌；P53蛋白；Ki67

食管癌是發(fā)生在食管上皮組織的惡性腫瘤，我國(guó)是食管癌高發(fā)國(guó)家，也是食管癌病死率最高的國(guó)家[1]。其發(fā)病因素目前還不明確，研究表明，食管癌發(fā)生與環(huán)境、飲食、遺傳、不良生活習(xí)慣、遺傳等因素關(guān)系密切，是多種因素同時(shí)作用的結(jié)果[2]。影響食管癌預(yù)后的因素主要有臨床病理分期、浸潤(rùn)程度、生長(zhǎng)方式、組織級(jí)別以及患者抗腫瘤的免疫能力等。早期診斷和早期手術(shù)治療是根治食管癌和獲得長(zhǎng)期生存最有效的方法[3]。

食管癌標(biāo)志物的檢測(cè)可反映腫瘤的生物學(xué)特性，對(duì)診斷、治療及預(yù)后具有重要意義。P53基因是重要的抑瘤基因，分為野生和突變兩種亞型，是細(xì)胞增生的主要負(fù)調(diào)控子，該基因的突變或缺失是導(dǎo)致許多腫瘤發(fā)生的原因。Ki67是1種細(xì)胞增殖核抗原，其表達(dá)與多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移有關(guān)。本研究采用免疫組化方法檢測(cè)食管炎和食管癌組織中P53蛋白和Ki67表達(dá)情況，以探討其臨床意義。

1 材料與方法

1.1 一般資料

收集我院普外科2007年4月至2012年4月的35例食管癌手術(shù)標(biāo)本，其中男性20例，女性15例，年齡32～84歲，中位年齡60歲；同時(shí)收集食管炎標(biāo)本13例用于對(duì)照，其中男9例，女性4例，年齡37～81歲，中位年齡63歲。標(biāo)本均經(jīng)組織病理確診；患者術(shù)前均未接受過放化療。食管癌患者臨床分期按2007版AJCC頒布的食管癌TNM分期標(biāo)準(zhǔn)：Ⅰ期6例，Ⅱ期10例，Ⅲ期11例，Ⅳ期8例。食管癌分化程度：高分化腺癌15例，中分化腺癌12例，低分化腺癌8例。胃癌浸潤(rùn)深度：浸潤(rùn)達(dá)黏膜層者18例，浸潤(rùn)未達(dá)黏膜層者17例。周圍淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況：發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者19例，未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者16例。

1.2 方法

采用免疫組化PV-9000法。所有抗體均購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。石蠟包埋，制成4 μm厚的切片。脫蠟、水化組織切片；高壓鍋抗原熱修復(fù)；3%H2O2去離子水孵育以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶；滴加一抗，4 ℃過夜；PBS沖洗，滴加聚合酶輔助劑，37 ℃孵育20 min；PBS沖洗后滴加辣根酶標(biāo)記山羊抗小鼠IgG多聚體，37 ℃孵育30 min；應(yīng)用DAB溶液顯色；自來水沖洗、復(fù)染、脫水、透明、封片。

1.3 結(jié)果判斷

于顯微鏡下觀察，每例觀察2張切片，每張切片隨機(jī)選擇10個(gè)高倍視野，每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)腫瘤細(xì)胞，取其平均值為細(xì)胞的陽(yáng)性率。P53的結(jié)果判斷：細(xì)胞核呈現(xiàn)清晰的棕黃色顆粒為陽(yáng)性，按陽(yáng)性細(xì)胞所占的比例及顯色深度分為，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)所占比例＜10%為陰性(-)；10%～25%為弱陽(yáng)性(+)，顯色淺，顆粒細(xì)；26%～50%為中度陽(yáng)性(++)，顯色較深；＞50%為強(qiáng)陽(yáng)性(+++)，顯色深，顆粒粗。Ki67的結(jié)果判斷與P53同。

1.4 統(tǒng)計(jì)處理

采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)和相關(guān)性分析。

2 結(jié) 果

2.1 癌組織與食管炎組織中P53和Ki67的表達(dá)及比較

免疫組化的結(jié)果顯示，P53蛋白和Ki67主要表達(dá)于細(xì)胞核。35例食管癌標(biāo)本中P53蛋白和Ki67表達(dá)陽(yáng)性率分別為37.14%（13/35）和74.29%（26/35）；13例食管炎標(biāo)本中P53蛋白和Ki67表達(dá)陽(yáng)性率分別為7.69%（1/13）和23.08%（3/13）；二者比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（表1）。

表1 食管癌組織和食管炎組織中P53蛋白和Ki67的表達(dá)[n（%）]

表2 食管癌組織和食管炎組織中P53蛋白和Ki67的表達(dá)[n（%）]

2.2 食管癌組織中P53和Ki67蛋白表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系

35例食管癌中，P53蛋白的陽(yáng)性表達(dá)與臨床分期、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和組織學(xué)分化程度有關(guān)（P＜0.05）。Ki67的陽(yáng)性表達(dá)與臨床分期和浸潤(rùn)深度有關(guān)（P＜0.05）；但與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和組織學(xué)分化程度無關(guān)（P＞0.05）（表2）。

2.3 食管癌組織中P53和Ki67蛋白表達(dá)之間的關(guān)系

35例食管癌中，P53和Ki67蛋白同為陽(yáng)性者13例，同為陰性者9例，二者之間呈顯著相關(guān)（r=0.452，P=0.006），（表3）。

表3 P53和Ki67在食管癌組織中表達(dá)的相關(guān)性分析（例）

3 討 論

P53蛋白是重要的細(xì)胞生長(zhǎng)負(fù)調(diào)節(jié)因子，P53基因突變導(dǎo)致對(duì)細(xì)胞周期的調(diào)節(jié)功能喪失，使細(xì)胞異常增殖和惡性轉(zhuǎn)化[4]。它與細(xì)胞周期蛋白（cyclins）結(jié)合形成復(fù)合體，抑制依賴細(xì)胞周期蛋白的相關(guān)激酶（CDKs）活性，使細(xì)胞停滯在G1期或引起細(xì)胞程序性死亡，從而消除可能癌變的異常細(xì)胞[5]。P53基因大約有50%[6]的突變率，當(dāng)P53基因發(fā)生突變時(shí)，可導(dǎo)致穩(wěn)定的蛋白質(zhì)不能完成抑制細(xì)胞增殖的作用，并且促進(jìn)細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化，使P53基因由抑癌基因轉(zhuǎn)為原癌基因[7]由于野生型P53蛋白代謝不穩(wěn)定，半衰期僅20～30 min，且細(xì)胞內(nèi)含量低，因此，用免疫組化方法不能檢出；突變型P53蛋白半衰期延長(zhǎng)(數(shù)小時(shí))[8]，細(xì)胞核內(nèi)出現(xiàn)突變型P53蛋白的集聚，因而用免疫組化方法能夠檢出[9]。本研究結(jié)果顯示，P53蛋白在食管癌組織的陽(yáng)性表達(dá)率為37.14%，明顯高于食管炎組織，結(jié)果與王斌等[10]相符。李華川等[11]及夏長(zhǎng)華等[12]報(bào)道腫瘤細(xì)胞分化越差、浸潤(rùn)范圍越廣，淋巴結(jié)陽(yáng)性，P53表達(dá)水平就越高。在本研究中，蛋白P53的陽(yáng)性表達(dá)與浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和組織學(xué)分化程度有關(guān)（P＜0.05），與上述報(bào)道相符，且蛋白P53在Ⅲ、Ⅳ期的陽(yáng)性表達(dá)顯著高于Ⅰ期和Ⅱ期(P＜0.05)。上述結(jié)果提示P53突變與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展，惡性細(xì)胞的侵襲、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。

Ki-67抗原是Gerdes等于1983年發(fā)現(xiàn)的在增殖細(xì)胞中表達(dá)的一種核抗原，也是目前較為肯定的核增殖標(biāo)志。主要功能與細(xì)胞合成代謝有關(guān)。除了G0期和G1早期外，其他各期均有此抗原表達(dá)，M期達(dá)到高峰[13]。已有研究顯示，Ki-67抗原與肺癌、淋巴瘤、乳腺癌、頭頸部癌、消化道腫瘤等密切相關(guān)，可能與這些腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、分級(jí)、分期、浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)及預(yù)后等各方面均有相關(guān)性[14,15]，可作為診斷、預(yù)測(cè)療效和預(yù)后等方面的標(biāo)志物。

本研究中，Ki67抗原在食管癌組織的陽(yáng)性表達(dá)率為74.29%，明顯高于食管炎組織，有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）。Ki67的陽(yáng)性表達(dá)在不同臨床分期和浸潤(rùn)深度的食管癌標(biāo)本中差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；而在食管癌有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和不同組織學(xué)分化程度，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。以上結(jié)果提示Ki67對(duì)鑒別食管癌及食管炎有重大的意義，且與食管癌的診斷及預(yù)后有一定的相關(guān)性。

綜上所述，食管癌中P53及Ki67基因表達(dá)上調(diào)，與食管癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，將二者作為生物標(biāo)志物進(jìn)行聯(lián)合檢測(cè)，有利于對(duì)食管癌患者惡性程度及預(yù)后的評(píng)估。

[1] 朱俊宇,雷君,高尚蘭.烏魯木齊地區(qū)食管癌危險(xiǎn)因素的病例對(duì)照研究[J].新疆醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2009(10):1434-1435.

[2] Parkin DM,Bray F,Ferlay J,et a1.Globalcancer statistics 2002[J]. CA Cancer J Clin,2010,55(2):74-108.

[3] 毛友生,趙曉航,張德超,等.食管癌腫瘤標(biāo)志物研究進(jìn)展[J].世界華人消化雜志,2002(11):1321-1323.

[4] 潘曉琳,高志斌,陸天才,等.卵巢癌中k-ras基因點(diǎn)突變及p53蛋白表達(dá)[J].臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志,2005,21(1):66-69.

[5] 王喜梅,羅光霞,張雪梅,等.宮頸腺癌HPV18/18感染與ki67、p53蛋白表達(dá)的關(guān)系[J].實(shí)用癌癥雜志,2009,24(1):22-25.

[6] Vikhanskaya FD,Incalci M,Broggini M.P73 competes with P53 and attenuates its response in human ovarian cancer cell line[J]. Nucleic Acids Res,2000,28(2):513-519.

[7] 于永亮,尚亞非.P53蛋白表達(dá)對(duì)結(jié)腸癌術(shù)后腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移預(yù)后的關(guān)系[J].實(shí)用醫(yī)技雜志,2007,14(36): 5014-5015.

[8] 周橋,楊光華.p53研究的一些新進(jìn)展[J].中華病理學(xué)雜志,1995, 24(2):267.

[9] Toshikats U,Fumio I,Yokosuka O,et al.Expression of p53 andp21/WAFI proteins in gastric and esophageal cancer comparion with mutation of the p53 gene[J].Dig Dis Sci,1998,43(2):279.

[10] 王斌.HPV感染與P53在食道癌患者中的表達(dá)意義及臨床觀察[J].遼寧醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2013,34(3):62-63.

[11] 李華川,陸士新.食管廟和責(zé)門癌組織中p53基因突變的研究[J].中華種瘤雜志,1994,16(3):172-176.

[12] 夏長(zhǎng)華,胡巧英,姚偉強(qiáng),等.P53在食管癌中的表達(dá)及其臨床意義[J].中國(guó)癌癥雜志,1996,6(4):243-245.

[13] 陳燕昌,林舜國(guó),鄭宇輝,等.乳腺癌ki67抗原和DNA倍體的相關(guān)性及臨床意義[J].福建醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2005,39(1):48-49.

[14] 李維嘉,李建秋.K-i67和FasL在食管癌中的表達(dá)及意義[J].實(shí)用醫(yī)藥雜志,2003,20(5):361-362.

[15] 黃宇,胡曉樺,劉志輝.Ki-67表達(dá)與鼻咽癌、乳腺癌化療療效及預(yù)后的臨床分析[J].中華臨床醫(yī)師雜志,2013,7(2):641-645.

Expression of P53, Ki67 in Esophageal Cancer and Its Clinical Significance

LEI Lei1, YE Bin1, WANG Xi-chuan2
(1 Department of Oncology, Sixth People’s Hospital of Chengdu, Chengdu 610051, China; 2 Department of Pathology, Sixth People’s Hospital of Chengdu, Chengdu 610051, China)

Objective To investigate the expression of protein P53 and Ki67 in esophageal cancer and analyze its clinical significance. Methods The expression of P53 and Ki67 in esophageal cancer of 35 cases and esophagitis of 13 cases were detected through immunohistochemistry, respectively. The relationship between theirs clinical and pathological parameters was analyzed. Results The expression rate of protein P53 and Ki67 in 35 cases of esophageal cancer were significantly higher than that in esophagitis, the difference was statistically significant among two groups (P=0.046,P=0.001). In esophageal cancer, the results showed that there was significant difference of expression of protein P53 between the depth of invasion, lymph node metastasis, clinical staging and the degree of differentiation（P＜0.05). While the expression of Ki67 was only significantly associated with the depth of invasion (P=0.042) and clinical staging (P=0.025). But it was not associated with the degree of differentiation and lymph node metastasis (P＞0.05). The positive expression of protein P53 and Ki6 were closely related（P=0.006）. Conclution The expression of P53 and Ki67 were associated with the occurrence and development of esophageal cancer. Therefore, The two joint detection had important clinical value to predict the degree of malignancy and prognosis of esophageal cancer.

Esophageal cancer; P53 protein; Ki67

R735.1

B

1671-8194（2014）19-0010-03