郭俊平

宜興市人民醫(yī)院，宜興 214200

HPLC法測(cè)定右旋蘭索拉唑控釋膠囊中左旋異構(gòu)體含量

郭俊平

宜興市人民醫(yī)院，宜興 214200

目的：建立HPLC法對(duì)右旋蘭索拉唑控釋膠囊中左旋和右旋異構(gòu)體進(jìn)行拆分并測(cè)定其中左旋異構(gòu)體含量。方法：采用Chiral-AGP手性柱（4.6 mm×150 mm，5 μm）；流動(dòng)相為乙腈-pH 6.0磷酸鹽緩沖液（10∶90）；流速0.5 mL·min-1；柱溫30℃；檢測(cè)波長(zhǎng)285 nm；進(jìn)樣量20 μL。結(jié)果：蘭索拉唑左旋和右旋異構(gòu)體之間的分離度為3.0，左旋異構(gòu)體的線性范圍為0.51～5.10 μg·mL-1（r=0.9996），檢測(cè)限為2.52 ng，平均回收率（n=9）為98.4%。結(jié)論：該方法操作簡(jiǎn)便，結(jié)果準(zhǔn)確，可用于右旋蘭索拉唑控釋膠囊中左旋異構(gòu)體的含量測(cè)定。

高效液相色譜；手性柱；右旋蘭索拉唑控釋膠囊；左旋異構(gòu)體

右旋蘭索拉唑（dexlansoprazole）是日本武田公司開發(fā)的新一代質(zhì)子泵抑制劑，是該公司曾經(jīng)開發(fā)的蘭索拉唑（lansoprazole）的右旋光學(xué)異構(gòu)體，該制劑采用新型的雙相控釋劑型，可持續(xù)抑制胃酸分泌，效果顯著，耐受性良好[1]。右旋蘭索拉唑控釋膠囊（dexlansoprazole delayed release capsules）已于2009年經(jīng)美國(guó)FDA批準(zhǔn)上市，商品名：DexliantTM。本品分子結(jié)構(gòu)中含有一個(gè)手性中心，可能在生產(chǎn)過程中引入少量的左旋異構(gòu)體，因此建立一個(gè)良好的異構(gòu)體檢查方法對(duì)本品的質(zhì)量控制尤為重要。本文采用手性固定相的HPLC法對(duì)蘭索拉唑異構(gòu)體進(jìn)行拆分并檢測(cè)左旋異構(gòu)體含量，可有效地控制本品的質(zhì)量。

1 材料

1.1 儀器

島津20A高效液相色譜儀，SPD-M20A二極管陣列檢測(cè)器，Labsultion色譜工作站；賽多利斯BT125D電子分析天平；梅特勒FE20 pH計(jì)。

1.2 試藥

右旋蘭索拉唑控釋膠囊（南京源健醫(yī)藥技術(shù)有限公司，批號(hào)：20131201、20131202、20131203；日本武田制藥，批號(hào)：C19323，4批規(guī)格均為60 mg/粒）；蘭索拉唑?qū)φ掌罚ㄖ袊?guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：100709-200902，純度為99.8%）；左旋蘭索拉唑?qū)φ掌罚暇┰唇♂t(yī)藥技術(shù)有限公司，批號(hào)：20131101，標(biāo)定含量為99.5%）；乙腈（色譜純，美國(guó)TEDIA公司）；磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉和磷酸鈉均為分析純。

2 方法和結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱為大賽璐公司Chiral-AGP手性柱（4.6 mm×15 cm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈－磷酸鹽緩沖液（pH 6.0）（10∶90）；流速：0.5 mL·min-1；柱溫：30℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：285 nm；進(jìn)樣量：20 μL。

2.2 溶液配制

2.2.1 磷酸鹽緩沖液（pH 6.0）取156.0 g·L-1磷酸二氫鈉溶液70 mL與179.1 g·L-1磷酸氫二鈉溶液20 mL，用水稀釋至1000 mL，取250 mL加水稀釋至1000 mL。

2.2.2 稀釋液取磷酸鈉（Na3PO4·12H2O）0.68 g與磷酸氫二鈉（Na2HPO4·2H2O）0.62 g，加水適量使溶解并稀釋至100 mL，搖勻。

2.2.3 蘭索拉唑?qū)φ掌啡芤喝√m索拉唑?qū)φ掌?0 mg，精密稱定，置于100 mL量瓶中，加稀釋液溶解并定容至刻度，搖勻，即得。

2.2.4 左旋對(duì)照品溶液取左旋蘭索拉唑?qū)φ掌?2.5 mg，精密稱定，置于100 mL量瓶中，加稀釋液溶解并定容至刻度，搖勻，作為左旋蘭索拉唑?qū)φ掌穬?chǔ)備液；精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液2 mL，置100 mL量瓶中，用稀釋液溶解定容至刻度，即得。

2.2.5 樣品溶液取右旋蘭索拉唑約25 mg的膠囊內(nèi)容物，精密稱定，置于50 mL量瓶中，加稀釋液溶解并定容至刻度，搖勻，即得。

2.3 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

精密量取蘭索拉唑?qū)φ掌啡芤?、左旋蘭索拉唑?qū)φ掌啡芤汉蜆悠啡芤焊?0 μL，注入液相色譜儀中，左旋蘭索拉唑保留時(shí)間為20.5 min，右旋蘭索拉唑保留時(shí)間13.6 min，兩者分離度達(dá)3.0，理論板數(shù)按左旋蘭索拉唑計(jì)達(dá)3567。色譜圖見圖1。

圖1 右旋蘭索拉唑HPLC色譜圖

2.4 線性關(guān)系考察

取左旋蘭索拉唑?qū)φ掌愤m量，精密稱定，用稀釋液溶解稀釋成0.51、1.02、2.04、3.06、4.08、5.1 μg· mL-1濃度的系列溶液。精密量取各20 μL，分別注入液相色譜儀中，記錄色譜圖。以峰面積（A）為縱坐標(biāo)，濃度（C）為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得方程：A= 4.56×105C-2.14×104（r=0.9996）。左旋蘭索拉唑濃度在0.51～5.10 μg·mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5 檢測(cè)限和定量限

取“2.4”項(xiàng)下左旋蘭索拉唑?qū)φ掌啡芤褐鸺?jí)稀釋，分別進(jìn)樣，按信噪比（S/N）為3，確定本品檢測(cè)限為2.52 ng，按信噪比（S/N）為10，確定本品定量限為7.56 ng。

2.6 進(jìn)樣精密度

取左旋蘭索拉唑?qū)φ掌啡芤哼B續(xù)進(jìn)樣6次，記錄左旋蘭索拉唑峰面積，RSD為0.36%（n=6）。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

取右旋蘭索拉唑控釋膠囊20粒（批號(hào)：20131201），倒出內(nèi)容物，混勻，取混勻后的內(nèi)容物6份，精密稱定，分別加稀釋液溶解并稀釋成濃度為0.5 mg·mL-1的樣品溶液。分別進(jìn)樣，測(cè)定左旋異構(gòu)體的含量。結(jié)果左旋蘭索拉唑含量平均值為0.12%（n=6），RSD為2.5%。表明該方法重復(fù)性良好。

2.8 中間精密度

由不同試驗(yàn)人員在不同的液相色譜儀上測(cè)定同一批右旋蘭索拉唑控釋膠囊（批號(hào)：20131201）中左旋異構(gòu)體含量。結(jié)果左旋蘭索拉唑含量平均值為0.12%（n=12），RSD為2.8%。表明該方法精密度良好。

2.9 回收率試驗(yàn)

取右旋蘭索拉唑約25 mg的膠囊內(nèi)容物（批號(hào)：20131201，左旋異構(gòu)體含量為0.12%），共9份，精密稱定，分別置于50 mL量瓶中，精密加入左旋蘭索拉唑?qū)φ掌穬?chǔ)備液1.0、2.0、3.0 mL各3份，加稀釋液溶解并定容至刻度，搖勻，作為回收率供試品溶液。取回收率供試品溶液分別注入液相色譜儀，按外標(biāo)法計(jì)算回收率。結(jié)果平均回收率為98.4%，RSD為3.5%（n=9）。

2.10 溶液穩(wěn)定性

取右旋蘭索拉唑約50 mg的膠囊內(nèi)容物（批號(hào)：20131201），精密稱定，分別置于100 mL量瓶中，加稀釋液溶解并定容至刻度，搖勻，室溫放置。分別于配制后0、2、4、6、8、10 h進(jìn)樣，記錄色譜圖。其中左旋異構(gòu)體峰面積RSD為1.1%（n=6），表明樣品溶液在室溫條件下放置10 h穩(wěn)定。

2.11 樣品測(cè)定

取右旋蘭索拉唑約25 mg的膠囊內(nèi)容物（南京源健，批號(hào)：20131201、20131202、20131203；日本武田，批號(hào)：C19323），精密稱定，分別置于50 mL量瓶中，加稀釋液溶解并定容至刻度，搖勻，分別進(jìn)樣測(cè)定，4批制劑左旋異構(gòu)體的含量分別為0.12%、0.15%、0.10%、0.13%（n=2）。均符合產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的含量限度（0.5%）。

3 討論

3.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的確定

取蘭索拉唑?qū)φ掌?、左旋蘭索拉唑?qū)φ掌泛陀倚m索拉唑原料，用稀釋液溶解并稀釋成10 μg· mL-1的溶液，在紫外200～400 nm的波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描，結(jié)果發(fā)現(xiàn)三者在285 nm附近均有最大吸收，所以將285 nm作為本品的檢測(cè)波長(zhǎng)。

3.2 色譜柱的選擇

據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道[2]，Chiralcel OD、Chiralcel AD和Chiral AGP手性柱均可用于蘭索拉唑?qū)τ丑w的分離和檢測(cè)。使用Chiralcel OD和Chiralcel AD手性柱均需要使用正相稀釋液（異丙醇、正己烷），對(duì)環(huán)境污染較大；而Chiral AGP手性柱可使用乙腈和磷酸鹽溶液的反相稀釋液系統(tǒng)，不需要專門的正相設(shè)備，對(duì)環(huán)境污染小。故選擇Chiral AGP手性柱。

3.3 耐用性試驗(yàn)

微調(diào)檢測(cè)波長(zhǎng)（±5 nm）、柱溫（±5℃）及稀釋液比例（±2%），在蘭索拉唑色譜中，右旋和左旋異構(gòu)體分離度均符合要求，左旋蘭索拉唑?qū)φ掌分鞣逯Х弦?。說明該測(cè)定方法適合本品測(cè)定，具有良好的耐用性。

[1] 房超，包泳初，陳慶華.右旋蘭索拉唑雙相控釋制劑的藥動(dòng)學(xué)研究及其臨床療效[J].世界臨床藥物，2011，32（7）：429-32.

[2] 崔欣，付芳敏，朱槿，等.奧美拉唑、蘭索拉唑?qū)τ丑w及相關(guān)物質(zhì)在不同手性柱的分離比較[J].分析化學(xué)，2002，30（12）：1494-6.

S-isomer Determination in Dexlansoprazole Delayed Release Capsules Using an HPLC Method

GUO Jun-ping
People’s Hospital in Yixing,Yixing 214200,China

Objective：To establish an HPLC method for enantio-separation of S-and R-lansoprazole and quantitation of the S-isomer.Methods：The separation was performed on an AGP chiral column (DAICEL CHIRALPAK,150 mm×4.6 mm,5 μm)．The mobile phase was acetonitrile－pH 6.0 sodium phosphate buffer(10∶90)at the flow rate of 0.5 mL·min-1.The column temperature was 30℃,and the UV detection was set at 285 nm.The injection volume was 20 μL.Results：The resolution of the isomers was 3.0,the linear range of the s-isomer was 0.51～5.10 μg·mL-1(r=0.9996),the detection limit was 2.52 ng and the average recovery(n=9)was 98.4%.Conclusion：The method is simple and accurate and can be used for S-isomer assay in dexlansoprazole delayed release capsules．

HPLC;Chiral column;Dexlansoprazole delayed release capsules;S-isomer

R927.2

A

1673-7806（2014）03-228-03

郭俊平，男，副主任藥師

E-mail:staff187@yxph.com

2014-03-17

2014-04-15