孫輝

【摘要】目的對(duì)臨床化學(xué)發(fā)光免疫法檢測(cè)AFP的分析性能驗(yàn)證及實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行分析與探討。方法對(duì)我院2013年1月至2013年3月的60例臨床送檢血清標(biāo)本的臨床資料進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，將上述案例隨機(jī)性地分成兩組，每組30人，即對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組。對(duì)照組：采用醫(yī)院放射免疫法，實(shí)驗(yàn)組：采用化學(xué)發(fā)光免疫法檢測(cè)。結(jié)果對(duì)臨床資料進(jìn)行統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)，實(shí)驗(yàn)組的對(duì)照組，無(wú)顯著性差異，有很好的相關(guān)性。結(jié)論化學(xué)發(fā)光免疫法的準(zhǔn)確性與精密度均優(yōu)于放射免疫法。

【關(guān)鍵詞】化學(xué)發(fā)光免疫法；放射免疫法；AFP；分析性能；實(shí)驗(yàn)方法

doi：10.3969/j.issn.1004-7484（s）.2014.01.672文章編號(hào)：1004-7484（2014）-01-0556-02

化學(xué)發(fā)光免疫分析是一種新型的標(biāo)記免疫分析技術(shù)，是繼放射免疫、酶免疫、熒光免疫分析等分析方法之后的新一代標(biāo)記免疫分析技術(shù)，是將免疫測(cè)定與化學(xué)發(fā)光相結(jié)合的新型技術(shù)。整個(gè)過(guò)程均在全封閉的反應(yīng)體系中進(jìn)行，且能夠全自動(dòng)操作，儀器具有反應(yīng)迅速，靈敏度高，檢測(cè)限低等優(yōu)點(diǎn)，總的來(lái)說(shuō)包括抗原抗體特異性結(jié)合與化學(xué)發(fā)光兩部分過(guò)程[1]。甲胎蛋白（AFP）是原是胚胎的肝細(xì)胞，嬰兒兩個(gè)月便逐漸消失，但近些年發(fā)現(xiàn)AFP在部分成人體內(nèi)出現(xiàn)，并發(fā)現(xiàn)它是原發(fā)性肝癌最靈敏，也是最特異的腫瘤標(biāo)志物。為了進(jìn)一步考察該儀器對(duì)AFP生物檢測(cè)限和AFP功能靈敏度的測(cè)量，我院參照IUPAC（國(guó)際純粹和應(yīng)用化學(xué)聯(lián)合會(huì)）的規(guī)定評(píng)價(jià)方案，現(xiàn)將60例臨床送檢血清標(biāo)本的臨床資料進(jìn)行報(bào)道如下：

1材料與實(shí)驗(yàn)方法

1.1應(yīng)用材料與儀器檢測(cè)樣選用我院2013年1月至2013年3月的60例臨床送檢血清標(biāo)本。

儀器采用美國(guó)Bayer Centaur 240全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光儀，并配套相關(guān)檢測(cè)試液（包括標(biāo)記的抗原抗體、含磁性的固相顆粒、稀釋液、AFP清洗液、發(fā)光試劑等），均采用拜耳公司提供的試劑。放射免疫法采用上海產(chǎn)的γ計(jì)數(shù)儀（SN-682 型），并配套運(yùn)用 AFP 試劑盒（中國(guó)原子能科學(xué)研究所研制）。

1.2方法檢測(cè)時(shí)運(yùn)用AFP稀釋液作為空白樣品，取一新鮮的血清作為試樣，做重復(fù)性實(shí)驗(yàn)，記錄每次檢測(cè)的濃度值和光強(qiáng)度值。核實(shí)兩者的精密度、靈敏度與檢出限等，數(shù)據(jù)處理采用線性回歸處理。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法根據(jù)SPSS13.0軟件對(duì)提供的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)的分析，計(jì)量資料為t檢驗(yàn)，對(duì)所有統(tǒng)計(jì)結(jié)果采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（χ±s）的形式表示，運(yùn)用軟件進(jìn)行處理（檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05，雙側(cè)檢驗(yàn)）作為統(tǒng)計(jì)學(xué)的評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)的差異。

2結(jié)果

2.1線性試驗(yàn)以AFP稀釋液作為空白試劑，再根據(jù)要求將標(biāo)準(zhǔn)溶液稀釋成不同濃度的溶液，放射免疫法取5ppb、10ppb、50ppb、200ppb、400ppb為標(biāo)準(zhǔn)濃度測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線，化學(xué)發(fā)光免疫法取5ppb、10ppb、50ppb、200ppb、400ppb、800ppb為標(biāo)準(zhǔn)濃度測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果兩組數(shù)據(jù)均有較好的線性關(guān)系。

2.2重復(fù)性試驗(yàn)取一新鮮的血清作為試樣，兩種方法均進(jìn)樣10次，查看兩者的重復(fù)性差別，兩組儀器均能滿足RSD<10%的標(biāo)準(zhǔn)。

2.3相關(guān)性試驗(yàn)采用2.2中的方法用上述兩種檢測(cè)法對(duì)受檢血清標(biāo)本進(jìn)行適當(dāng)定量分析。結(jié)果顯示，兩種方法無(wú)顯著差異（P>0.05），且相關(guān)系數(shù)r=0.995，回歸方程為y=-1.059+0.921x，兩組方法所得數(shù)據(jù)的相關(guān)性良好。

2.4回收率試驗(yàn)取混合血清后，再加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)定值血清，用兩組方法分別對(duì)其進(jìn)行平均回歸率實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)得出，放射免疫法的回收率為91.2-108.1%，化學(xué)發(fā)光免疫法的回收率為92.0-107.8%。化學(xué)發(fā)光免疫法略優(yōu)于放射免疫法。

2.5檢出限以每次做的空白R(shí)LUs為基值，以該空白的RLUs值的3倍作為樣品中具有的AFP量，或稱本法的檢測(cè)低限。分別對(duì)兩種方法進(jìn)行檢出限測(cè)量，得出化學(xué)發(fā)光免疫法的檢出限為0.95ppb，放射免疫法的檢出限為5ppb?；瘜W(xué)免疫法在檢出限上明顯優(yōu)于放射免疫法[2]。

2.6精密度試驗(yàn)取三個(gè)梯度濃度（分為低、中、高三個(gè)梯度）的試劑分別進(jìn)行精密度實(shí)驗(yàn)，并運(yùn)用兩種方法進(jìn)行整理對(duì)比，見(jiàn)表1。

3討論

化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)作為一種新型的分析技術(shù)，既具有運(yùn)用發(fā)光檢測(cè)時(shí)的高度敏感性，也同時(shí)具有免疫分析時(shí)的高度特異性。其原理為將激發(fā)態(tài)分子回到基態(tài)時(shí)所釋放而產(chǎn)生的發(fā)光現(xiàn)象，再運(yùn)用化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)來(lái)為抗原抗體的結(jié)合反應(yīng)做指示系統(tǒng)，從而進(jìn)行定量檢測(cè)抗原或抗體的濃度方法，是一種直接的運(yùn)用發(fā)光劑標(biāo)記抗體的免疫分析方法。由于運(yùn)用丫啶酯發(fā)光劑的優(yōu)點(diǎn)可以很好的減少非特異性干擾，反應(yīng)較為簡(jiǎn)單且迅速，反應(yīng)靈敏度高，據(jù)有關(guān)資料顯示，該發(fā)光劑也很穩(wěn)定（有效期可長(zhǎng)達(dá)1年以上）。

放射免疫法是目前臨床上較為常用的分析方法，其原理是放射性標(biāo)記的抗原和非標(biāo)記抗原全部同時(shí)與限量的特異性抗體進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)性可逆的結(jié)合反應(yīng)，反應(yīng)的靈敏度較低，標(biāo)記物的有效期也較短（一般只有1個(gè)月左右）。從工作人員角度來(lái)說(shuō)，也會(huì)對(duì)他們的身體健康帶來(lái)很多負(fù)面影響。從以上的結(jié)論可以看出，兩種方法的檢測(cè)結(jié)果無(wú)顯著性差異，且相關(guān)性較好。但從檢出限、靈敏度、精密度等方面進(jìn)行比較，化學(xué)發(fā)光免疫法就明顯優(yōu)于放射免疫法，而且其試劑穩(wěn)定性高、毒性小，對(duì)環(huán)境無(wú)過(guò)大污染，方便、易操作且安全。

本實(shí)驗(yàn)采用的全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光儀可以很好地對(duì)血清標(biāo)本進(jìn)行很好地采樣，處理和檢測(cè)，基本上能夠達(dá)到樣品隨到隨測(cè)，檢測(cè)迅速，很快可以得到檢測(cè)結(jié)果，大大縮短了檢測(cè)所用的時(shí)間，能滿足臨床上的檢驗(yàn)需求[3]。從上述數(shù)據(jù)可以確認(rèn)，該方法的檢測(cè)結(jié)果均可以達(dá)到臨床運(yùn)用水平，又基于其高度特異性、靈敏度高、重復(fù)性好等優(yōu)勢(shì)，值得臨床進(jìn)一步廣泛應(yīng)用。

參考文獻(xiàn)

[1]張紅祥.化學(xué)發(fā)光免疫法與放射免疫法檢測(cè)血清AFP臨床分析[J].中國(guó)現(xiàn)代藥學(xué)應(yīng)用，2010，4（7）：41-42.

[2]孫蕾，鄭松柏，徐建華，張秀明，林蓮英.化學(xué)發(fā)光免疫法檢測(cè)AFP的分析靈敏度核實(shí)實(shí)驗(yàn)及評(píng)價(jià)[J].現(xiàn)代檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2007，22（3）：61-62.

[3]張泉，杜英，秦東春.磁微粒甲胎蛋白（AFP）化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)系統(tǒng)的研究及臨床應(yīng)用[D].鄭州：鄭州大學(xué)，2011：1-77.