趙光來

【摘要】目的采用菌體裂解法來對結(jié)核桿菌進(jìn)行研究，分析其對藥物的敏感程度。痰液標(biāo)本。方法將我院收治的110例肺結(jié)核疾病患者作為實(shí)驗(yàn)對象，取患者清晨第一口痰液作為痰液標(biāo)本，首先去除痰液污染，并將去除污染后的標(biāo)本放置于37攝氏度常溫下。然后，將噬菌體放入標(biāo)本，并放入100μL的強(qiáng)效病毒，充分震蕩，靜止，混合體積為5毫升的Medium plus。最后，向平板中加入液態(tài)瓊脂膠，混合均勻后放置于37攝氏度恒溫條件下，靜止一夜。采用噬菌體法測定結(jié)核菌數(shù)量。并采用菌體裂解法檢測痰液標(biāo)本中病菌的陰陽性。結(jié)果該法對于肺結(jié)核的檢出概率為64.5%，而傳統(tǒng)涂片對于肺結(jié)核的檢出率則僅為30%上下，可見裂解法對于肺結(jié)核的檢出率遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于涂片法。正常情況下，涂陰培陰患者的陽性檢出率為21.6%，可以更好的代表檢查的真實(shí)結(jié)果。該法報告的時間為兩至三天，遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于培養(yǎng)痰液標(biāo)本的時間。結(jié)論菌體裂解法可以很好的節(jié)約時間，且檢測結(jié)果準(zhǔn)確，是一種很完美，且頗具研究前景的檢測方式，該法對于細(xì)菌檢查及治療具有鮮明的指導(dǎo)性，同時，具有很高的應(yīng)用價值，建議醫(yī)學(xué)界廣泛推廣應(yīng)用。

【關(guān)鍵詞】菌體裂解法；檢測；結(jié)核桿菌；藥物敏感性；研究

自從結(jié)核病菌被人類發(fā)現(xiàn)以來，人類就一直致力于研究結(jié)核病的發(fā)病機(jī)理，以及尋求一種好的治療方法，可以徹底根治結(jié)核病菌，免除患者的痛苦。隨著科技的發(fā)展和醫(yī)療技術(shù)水平的穩(wěn)步提高，越來越多的方法被人們發(fā)現(xiàn)，對于結(jié)核病菌的實(shí)驗(yàn)診斷來說，傳統(tǒng)的診療方式不僅耗費(fèi)時間長，而且診斷結(jié)果往往還差強(qiáng)人意。因此，對于結(jié)核病菌的檢測和治療，人們一直沒有停止尋求新方法的腳步，醫(yī)療界需要一個快速且準(zhǔn)確的診斷方法來徹底檢測結(jié)核病菌。分支桿菌噬菌體恰恰迎合了人類的這一需求，其對于分支桿菌具有很強(qiáng)的特異性，常常被作為工具應(yīng)用于結(jié)核桿菌的治療中。本文運(yùn)用菌體裂解法檢測結(jié)核桿菌藥物敏感性效果顯著，現(xiàn)將實(shí)驗(yàn)過程陳列如下：

1資料與方法

1.1一般資料將我院2011年6月至2011年10月間收治的110肺結(jié)核患者作為實(shí)驗(yàn)對象，取患者清晨第一口痰液作為痰液標(biāo)本，其中有92例患者從未接受醫(yī)院治療，18例患者則正在接受治療。經(jīng)過藥物敏感實(shí)驗(yàn)得到分離菌株110株，這其中有敏感菌株37株，對異煙肼耐藥性較好的為36株，對利福平耐藥性較好的為37株。

1.2實(shí)驗(yàn)試劑將（法國維達(dá)萊勃公司）生產(chǎn)的TB-CHECK-1結(jié)核桿菌檢測試劑盒作為本次實(shí)驗(yàn)試劑。

1.3試驗(yàn)方法①使用N-乙酰-L-半胱氨酸-NaOH法去除2毫升的痰液標(biāo)本所受的污染，并用15毫升的PhageTek MB Medi Plus溶液洗滌，并將處理過的痰液標(biāo)本放置于37℃的恒溫環(huán)境中，擱置時間長度為一夜。②感染噬菌體的操作：將質(zhì)量為100μL的噬菌體加入痰液標(biāo)本里，在37℃的恒溫條件下放置一小時。③消滅結(jié)核外部分散的噬菌體：將質(zhì)量為100μL的強(qiáng)效病毒加入痰液標(biāo)本里面，晃蕩均勻，并將其放置5分鐘。④將體積為5毫升的Medium plus與痰液標(biāo)本混合，并放置一段時間。⑤將體積為1毫升的幫助細(xì)胞放入痰液標(biāo)本中，并將混合液放置于培養(yǎng)器皿中，向器皿中放入體積為5毫升的液態(tài)瓊脂膠，快速將容器轉(zhuǎn)動，使二者混合均勻。將其放置于37℃的恒溫環(huán)境中，靜止一夜。

1.4判定標(biāo)準(zhǔn)①若在培養(yǎng)器皿中發(fā)現(xiàn)有0至20個菌斑，則說明結(jié)果呈陽性，代表痰液標(biāo)本中結(jié)核桿菌已經(jīng)全部死亡。②若在培養(yǎng)器皿中發(fā)現(xiàn)有21個或大于21個菌斑，則說明結(jié)果呈陰性，代表痰液標(biāo)本中有未死的結(jié)核桿菌。

2結(jié)果

2.1將20例結(jié)核分枝桿菌放置于100、500、1000、10000、100000cFu/ml濃度的環(huán)境中，并運(yùn)用噬菌體法來對結(jié)核菌的數(shù)量進(jìn)行測定，測定結(jié)果見表1。

3討論

結(jié)核病細(xì)菌學(xué)檢查一直以來都是國內(nèi)外醫(yī)學(xué)關(guān)注的焦點(diǎn)。在國外，醫(yī)療技術(shù)水平較國內(nèi)水平略高，對于結(jié)核桿菌藥物敏感性的研究也就更為深入。目前，國外以分枝桿菌噬菌體為研究基礎(chǔ)的細(xì)菌學(xué)主要有以下幾個分類，結(jié)核桿菌分子生物學(xué)，結(jié)核病耐藥性的檢測，治療結(jié)核疾病新藥的研發(fā)及篩選等，其中對于結(jié)核桿菌藥物敏感性的研究最為熱烈。

本次試驗(yàn)研究主要使用菌體裂解法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，其原理主要是裂解性噬菌體在宿主體內(nèi)進(jìn)行繁殖時，會裂解四周宿主，從而留下噬菌斑，因?yàn)槭删叩臄?shù)量和未死的宿主菌數(shù)量成正比，因此可以以此為依據(jù)對結(jié)核菌進(jìn)行培養(yǎng)和實(shí)驗(yàn)其對于藥物的敏感程度。經(jīng)過噬菌體裂解法檢驗(yàn)可知，結(jié)核桿菌有很好的敏感性，當(dāng)菌液的濃度為102cfu/ml時，即可進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。該法對于肺結(jié)核的檢出概率為64.5%，而傳統(tǒng)涂片對于肺結(jié)核的檢出率則僅為30%上下，可見裂解法對于肺結(jié)核的檢出率遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于涂片法。正常情況下，涂陰培陰患者的陽性檢出率為21.6%，可以更好的代表檢查的真實(shí)結(jié)果。該法報告的時間為兩至三天，遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于培養(yǎng)痰液標(biāo)本的時間。根據(jù)以上種種情況，可以判定菌體裂解法可以很好的節(jié)約時間，且檢測結(jié)果準(zhǔn)確，是一種很完美，且頗具研究前景的檢測方式，該法對于細(xì)菌檢查及治療具有鮮明的指導(dǎo)性，同時，具有很高的應(yīng)用價值，建議醫(yī)學(xué)界廣泛推廣應(yīng)用。

本次研究中有4例患者的涂陽培陽檢測顯示結(jié)果為陰性，調(diào)查發(fā)現(xiàn)，該兩例病患均為在我院接受一個月治療后的肺結(jié)核患者，之所以菌體數(shù)減輕，分析可能是經(jīng)過短暫治療后，致病菌的活力減退。本次試驗(yàn)，筆者總結(jié)出一些值得注意之處，總結(jié)如下：①菌體裂解法檢測的陽性菌種有以下幾種：結(jié)核分枝桿菌，牛分支桿菌，非洲分支桿菌。三種菌種在檢測時顯示均未死亡。②在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時，要嚴(yán)格按照相關(guān)規(guī)定進(jìn)行，設(shè)立陰、陽兩性進(jìn)行對比，且在操作時嚴(yán)格注意進(jìn)行無菌操作你，嚴(yán)禁菌體遭受外界污染。③在對痰液標(biāo)本進(jìn)行處理時，方法要規(guī)范，尤其要注意徹底混合殺毒試劑。④在向平板中添加瓊脂時，要嚴(yán)格控制瓊脂溫度，最好將其控制在50攝氏度到60攝氏度之間，以免傷害噬菌體。

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