王志芳

【摘要】目的探討宮頸癌組織中C-myc和PTEN蛋白表達(dá)的臨床意義。方法應(yīng)用免疫組化PV-9000兩步法檢測宮頸癌、宮頸上皮內(nèi)瘤變（CIN）及正常宮頸組織中C-myc和PTEN的表達(dá)。結(jié)果C-myc蛋白在宮頸癌中表達(dá)明顯高于CIN和正常宮頸組織（P<0.05）；它的表達(dá)在組織學(xué)分級、病理學(xué)類型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等組間差異均有顯著性意義（P<0.05），而與年齡及臨床分期組間比較差異無顯著性意義（P>0.05）；PTEN蛋白的表達(dá)率在正常宮頸組織、CIN及宮頸癌中逐漸下降（P<0.05）；它的表達(dá)在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床分期組間差異均有顯著性意義（P<0.05），而在年齡、組織學(xué)分級及病理學(xué)類型組間比較差異無顯著性意義（P>0.05）；C-myc和PTEN蛋白的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)（r=-0.484，P=0.000）。結(jié)論C-myc和PTEN與宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展可能相關(guān)，二者聯(lián)合檢測可能為宮頸癌的早期診斷和治療提供一定的理論依據(jù)。

【關(guān)鍵詞】宮頸癌；C-myc；PTEN；免疫組織化學(xué)

宮頸癌是女性常見的惡性腫瘤之一，發(fā)病率和死亡率位于第二位，早期診斷一直是人們關(guān)注的焦點(diǎn)。腫瘤的發(fā)生是一個復(fù)雜的過程。其中，癌基因的激活及抑癌基因的失活是腫瘤形成的基礎(chǔ)。癌基因C-myc是myc基因家族的一員。C-myc蛋白的過表達(dá)發(fā)生于人類多種腫瘤。PTEN蛋白是一種腫瘤抑制基因，主要是通過促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的凋亡而在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用。有關(guān)C-myc和PTEN蛋白的表達(dá)在宮頸癌發(fā)生、發(fā)展及相關(guān)性的研究尚少見報(bào)道。本研究應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù)，分別檢測了C-myc和PTEN蛋白在宮頸癌組織中的表達(dá)，并研究二者與臨床病理特征之間的關(guān)系，為宮頸癌的早期診治提供有用的理論依據(jù)。

1資料與方法

1.1病例資料所有標(biāo)本均選自本院2009年12月到2011年12月間手術(shù)切除或門診活檢標(biāo)本共130例。宮頸癌標(biāo)本70例，年齡28-74歲，中位年齡48.4歲，術(shù)前均未進(jìn)行放、化療及內(nèi)分泌治療。按病理學(xué)類型分為：宮頸鱗癌60例，腺癌10例。按組織學(xué)分級：高中分化48例、低分化22例。依據(jù)2009年FIGO臨床分期標(biāo)準(zhǔn)：Ⅰ期20例、Ⅱ期40例、Ⅲ期及以上10例。宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變（CIN）40例和正常宮頸組織20例作為對照。其中CIN包括：I級15例，II級15例，III級10例。所有標(biāo)本均由兩位以上病理醫(yī)師確診。

1.2試劑鼠抗人C-myc單克隆抗體（稀釋濃度1：100）；兔抗人PTEN單克隆抗體（稀釋濃度1：100）；PV-9000免疫組化試劑盒及DAB顯色試劑盒。

1.3方法采用免疫組織化學(xué)PV-9000兩步法：切片（4μm）→脫蠟→高壓抗原修復(fù)→自然冷卻→3%H2O2內(nèi)10min（滅活內(nèi)源性過氧化物酶）→滴加抗體（C-myc、PTEN）→4°C冰箱過夜→PBS液沖洗5min→3次后，滴加試劑1（聚合物輔助劑），37°C溫箱內(nèi)孵育20min→重復(fù)PBS液沖洗，滴加試劑2（辣根酶標(biāo)記羊抗鼠IgG多聚體），37°C溫箱內(nèi)孵育30min→重復(fù)PBS液沖洗5min→3次→DAB顯色→蒸餾水沖洗→蘇木精復(fù)染→乙醇脫水→二甲苯透明、中性樹脂封片。每批均設(shè)已知陽性切片作對照，用PBS緩沖液代替一抗作陰性對照。

1.4結(jié)果判定C-myc蛋白陽性表達(dá)產(chǎn)物定位于細(xì)胞核，PTEN蛋白陽性表達(dá)產(chǎn)物位于細(xì)胞漿，均呈棕黃色顆粒。由兩位以上病理醫(yī)師采用雙盲法觀察每張切片：每張切片隨機(jī)選取5個高倍視野（×400），共計(jì)數(shù)1000個細(xì)胞。按染色細(xì)胞的百分比評分（A）：染色細(xì)胞未見為0分，<25%為1分，25-50%為2分，>50%為3分；按染色深淺度評分（B）：無色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。（A）×（B）記為陽性標(biāo)記指數(shù)（labelindex，LI），并通過LI判斷表達(dá)強(qiáng)度：0分為陰性（-），1-3分為弱陽性（+），4-6分為中等陽性（++），7-9分為強(qiáng)陽性（+++）。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析處理，各組間率比較采用x2檢驗(yàn)，分析C-myc、PTEN蛋白間關(guān)系采用Spearman秩相關(guān)分析。P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1C-myc和PTEN蛋白在宮頸癌、CIN及正常宮頸組織中的表達(dá)由表1知，C-myc蛋白在宮頸癌、CIN及正常組織中陽性表達(dá)率分別為72.9%、42.5%、10%。在宮頸癌中的陽性表達(dá)率顯著高于CIN和正常組織（P<0.05）。PTEN蛋白在宮頸癌、CIN及正常組織中陽性表達(dá)率分別為35.7%、57.5%、90%，在宮頸癌組織中的陽性表達(dá)率明顯低于CIN及正常組織中的陽性表達(dá)率，兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

2.2C-myc和PTEN蛋白表達(dá)與宮頸癌臨床病理特征的關(guān)系C-myc蛋白的表達(dá)在組織學(xué)分級、病理學(xué)類型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），而在年齡及臨床分期組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；PTEN蛋白的表達(dá)在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床分期組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），而在年齡、組織學(xué)分級及病理學(xué)類型組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表2。

2.3C-myc和PTEN蛋白在宮頸癌中表達(dá)的相關(guān)性在70例宮頸癌中，C-myc和PTEN蛋白同時表達(dá)陽性的例數(shù)11例，同時表達(dá)陰性的例數(shù)5例，應(yīng)用Spearman相關(guān)分析C-myc和PTEN蛋白的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)（r=-0.484，P=0.000）。見表3。

3討論

C-myc基因是myc基因家族成員之一，主要功能是參與腫瘤細(xì)胞的增殖、分化和凋亡[1]。它是一個原癌基因，定位于8q24區(qū)，是近年來分子生物學(xué)研究的一個熱點(diǎn)。C-myc蛋白的過表達(dá)參與人類多種腫廇的形成。PTEN基因定位于10q23.3區(qū)，參與細(xì)胞周期調(diào)控、誘導(dǎo)凋亡、細(xì)胞的粘附和轉(zhuǎn)移[2]。它的功能是具有PTPs（蛋白質(zhì)酪氨酸磷酸酶）活性[3]，可通過拮抗PTKs（酪氨酸蛋白激酶）抑制腫瘤細(xì)胞的生長，從而起到抑瘤作用。因此，聯(lián)合研究C-myc和PTEN蛋白可能為腫瘤的預(yù)防、早期診斷和治療起到指導(dǎo)作用。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：①隨著宮頸病變惡性度的增加，C-myc蛋白的表達(dá)逐漸增高，提示其過表達(dá)可能導(dǎo)致宮頸癌細(xì)胞失控性分化、增殖，從而誘發(fā)腫瘤形成。其表達(dá)與組織學(xué)分級、病理學(xué)類型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等組間差異均有顯著性意義，而與年齡及臨床分期組間比較差異無顯著性意義。提示C-myc蛋白的持續(xù)過表達(dá)可能參與宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移。②PTEN蛋白在宮頸癌、CIN及正常宮頸組織中陽性表達(dá)率分別為35.7%、57.5%及90%，其表達(dá)缺失可能與宮頸癌的發(fā)展有關(guān)，提示其可能是一種保護(hù)性蛋白。其表達(dá)與年齡、組織學(xué)分級及病理學(xué)類型無關(guān)，而與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和臨床分期有關(guān)，說明隨著臨床分期的升高、淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移，其表達(dá)下降，提示PTEN低表達(dá)與宮頸癌的侵襲和轉(zhuǎn)移有關(guān)。③C-myc蛋白的表達(dá)隨著宮頸癌惡變程度的增加而上升；PTEN蛋白隨著宮頸癌惡性程度的增加而表達(dá)下降。應(yīng)用Spearman相關(guān)分析，C-myc和PTEN蛋白的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)（r=-0.484，P=0.000）。提示C-myc和PTEN蛋白在宮頸癌發(fā)生、發(fā)展中可能起著重要的協(xié)同作用。

綜上所述，C-myc高表達(dá)和PTEN低表達(dá)與宮頸癌的發(fā)展密切相關(guān)，臨床上聯(lián)合檢測C-myc和PTEN的表達(dá)可能會成為宮頸癌病情發(fā)展程度的判定指標(biāo)，對判斷患者預(yù)后，采取適當(dāng)治療方案有所幫助。

參考文獻(xiàn)

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