徐利東　任娟　石瑾

【摘要】目的檢測不同程度牙周炎患者齦溝液中NO的含量變化，觀察NO表達(dá)與牙周炎發(fā)生發(fā)展的關(guān)系。方法選擇牙周健康者10例作為正常對照組，選擇輕、中、重度牙周炎患者各10例作為實驗組。分別采集齦溝液樣本，采用硝酸還原酶法檢測NO含量，并對結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)檢驗。結(jié)果實驗組與正常對照組中NO含量具有顯著地統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.01），且各實驗組中NO含量也具有統(tǒng)計學(xué)差異。隨牙周炎的病變程度加重，齦溝液中NO含量存在升高趨勢。結(jié)論NO可以存在于牙周健康及牙周炎患者的齦溝液中，且其含量的變化與牙周炎的發(fā)生發(fā)展存在密切關(guān)系。

【關(guān)鍵詞】一氧化氮；齦溝液；牙周炎

一氧化氮（nitric oxide，NO）是一種毒性強(qiáng)，不穩(wěn)定，易擴(kuò)散，化學(xué)性質(zhì)活潑，半衰期極短的自由基[1-2]，是一種特殊的多功能的信號分子和效應(yīng)分子在機(jī)體內(nèi)可充當(dāng)信使、介質(zhì)和細(xì)胞功能調(diào)節(jié)因子，對多種器官、系統(tǒng)的功能具有重要的調(diào)節(jié)作用，參與眾多的生理病理過程。隨著NO在唾液中的檢出，其在口腔疾病中作用的研究正逐漸成為口腔研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)之一。內(nèi)源性NO以L-精氨酸為底物，由一氧化氮合酶（nitric oxide syntheses，NOS）催化合成，可在體內(nèi)廣泛存在，研究表明，NO可以參與牙周微循環(huán)的調(diào)節(jié)，并且在牙周炎患者與牙周健康者的唾液、齦溝液及牙齦組織中NO的含量有明顯區(qū)別[3]。

本實驗通過檢測不同嚴(yán)重程度牙周炎患者齦溝液中NO的含量，觀察NO的表達(dá)與牙周炎發(fā)生發(fā)展之間的關(guān)系。

1資料與方法

1.1儀器與材料一氧化氮試劑盒（南京建成生物工程研究所）；721型可見光光度計（上海精密科學(xué)儀器有限公司）；高速冷凍離心機(jī)（湖南儀器儀表廠）；可調(diào)式移液器（型號：YYQ-1000P，北京明力普瑞科技有限公司）

1.2研究對象及分組從我院口腔科門診就診患者中隨機(jī)選擇慢性牙周炎患者30例作為研究對象，其中男33例，女27例。納入標(biāo)準(zhǔn)：①1年內(nèi)未進(jìn)行過任何牙周治療。②臨床檢查和X線片診斷為全口多數(shù)牙牙周袋形成，牙槽骨吸收。③每位患者全口余留牙≥20個。④6個月內(nèi)未服用過抗生素或免疫抑制劑。⑤全身健康，無免疫缺陷病、內(nèi)分泌等系統(tǒng)性疾病。⑥女性患者不在妊娠、哺乳期。對研究對象進(jìn)行牙周探診，根據(jù)附著喪失（clinical attachment loss，CAL）程度分別分為輕、中、重度組。輕度組：至少15個位點(diǎn)附著喪失≤4mm；中度組：至少15個位點(diǎn)附著喪失在3-5mm之間；重度組：至少15個位點(diǎn)附著喪失≥5mm[4]。另選牙周健康的本院職工10例作為正常對照組，其中男13例，女15例。所有受試者均知情同意，自愿參加本研究。

1.3實驗方法根據(jù)牙周探診記錄，選擇實驗組牙周炎患者口內(nèi)兩個以上不同象限2-4顆病變最嚴(yán)重牙位和對照組牙周健康者4顆第一磨牙作為取樣牙，均分別在牙齒頰、舌側(cè)的近、遠(yuǎn)中點(diǎn)取樣。去除取樣牙齦上菌斑及牙石，受試者清水漱口后，隔濕取樣牙，輕輕吹干牙面，1min后，將已稱重的2mm×8mm Whatman濾紙條輕輕插入齦溝或牙周袋內(nèi)至遇有輕微阻力時止，留置30s后取出，迅速放入Eppendorf管中。將每顆牙的4條濾紙條作為一份樣本置入同一Eppendorf管中。棄去帶血或明顯被唾液污染的樣本。根據(jù)取樣前、后濾紙條重量差換算出GCF體積，定量后將樣本密封、-20℃凍存、待檢。取樣后記錄CAL、牙周袋探診深度（pocketprobing depth，PPD）和出血指數(shù)（bleeding index，BI）。

1.4NO測定將凍存樣本常溫下解凍，每管加入PBS液（0.01mol/L，pH7.4）300μl，室溫振蕩1h，4℃，10000r/min離心10min，棄去濾紙條，上清液4℃保存。取上清液100μl按NO試劑盒說明通過硝酸還原酶法檢測GCF樣本中NO水平，每樣本均設(shè)復(fù)管，空白對照為100μl雙蒸水。各樣本分別于721型分光光度計550nm波長、0.5cm光徑比色測定光密度，根據(jù)試劑盒提供公式計算GCF樣本中NO濃度，單位為μmol/L。

1.5統(tǒng)計學(xué)處理各指標(biāo)以位點(diǎn)牙為單位，實驗數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（χ±s）表示，采用SPSS11.0軟件包對數(shù)據(jù)進(jìn)行Student t-test檢驗。

2結(jié)果

2.1研究對象及取樣牙位一般情況本組研究對象共40人，男28人、女12人。其中輕、中、重度組10人，平均年齡分別為43.9±2.6、42.5±2.2、43.6±1.8歲；對照組10人，平均年齡43.1±2.6歲，實驗與對照組年齡的差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。四組取樣牙BI、PPD、CAL的差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01），說明各組間牙周狀態(tài)存在顯著差異，見表1。

3討論

NO是一種特殊的多功能的信號分子和效應(yīng)分子在機(jī)體內(nèi)可充當(dāng)信使、介質(zhì)和細(xì)胞功能調(diào)節(jié)因子，對多種器官、系統(tǒng)的功能具有重要的調(diào)節(jié)作用，參與眾多的生理病理過程。

研究顯示，NO信號通路除可以在心血管系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)等發(fā)揮效用外，還可與機(jī)體的免疫功能特別是機(jī)體的非特異性宿主防御反應(yīng)有關(guān)。NO介導(dǎo)了LPS、TNF、IL-1等細(xì)胞因子的病理作用，調(diào)節(jié)白細(xì)胞與EC粘附，抑制T細(xì)胞增殖，提高NK細(xì)胞活性等，這些均顯示了NO與機(jī)體免疫功能密切相關(guān)[5]。而LPS、TNF、IL-1均參與了牙周病的發(fā)生發(fā)展過程。國內(nèi)外已有學(xué)者[3-7]在牙周病患者的唾液及齦溝液中檢測出了NO，說明NO參與了牙周病的進(jìn)程。本實驗在不同程度的牙周炎患者的齦溝液中均檢測出了NO且其含量要高于相對正常對照組，也再一次驗證了這一結(jié)論。

齦溝液從牙齦結(jié)締組織通過溝內(nèi)上皮和結(jié)合上皮滲入到齦溝中的液體，其主要成分與血清相似。包括補(bǔ)體-抗體系統(tǒng)的成分、各種電解質(zhì)、蛋白質(zhì)、葡萄糖、酶等，其他成分來自則可鄰近牙周組織還有細(xì)菌及其他微生物[4]。由于其來自牙周組織，可與牙周病的嚴(yán)重程度和活動期有一定關(guān)系。

齦溝液中成分的變化可較準(zhǔn)確地反映牙周組織的狀態(tài)，對牙周炎活動期的診斷、預(yù)測疾病的發(fā)展等均具有重要意義。目前，各類研究中多采集唾液中的NO來研究其與牙周病的關(guān)系，而分析齦溝液中NO含量變化的文獻(xiàn)仍較少見。通過本研究通過采集不同程度牙周炎患者的齦溝液，采用硝酸還原酶法檢測NO含量發(fā)現(xiàn)，在正常對照組及各實驗組中均存在有NO，但實驗組齦溝液中NO的含量要遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于正常對照組，且隨著牙周炎程度的加重，NO的含量也在增加。本結(jié)果與國內(nèi)學(xué)者葛頌、龔斌[6-7]的研究結(jié)果一致，說明NO參與了牙周炎的發(fā)生與發(fā)展，也為進(jìn)一步研究NO在牙周炎中的作用機(jī)制奠定了實驗基礎(chǔ)。

參考文獻(xiàn)

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