藏玉婷 張楊 王彬 宋揚(yáng) 孫德君 丁國杰

摘 要：試驗(yàn)用小鵝瘟免疫原按8種免疫程序接種120日齡產(chǎn)蛋雞，分別在接種后不同時(shí)間瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)試驗(yàn)檢測(cè)卵黃抗體效價(jià)，篩選出最佳免疫接種程序?；A(chǔ)免疫，產(chǎn)蛋雞每只肌肉注射小鵝瘟活疫苗1.0 mL（5羽份）；在基礎(chǔ)免疫后14 d進(jìn)行第2次接種，加強(qiáng)免疫，產(chǎn)蛋雞每只肌肉多點(diǎn)注射小鵝瘟滅活疫苗2.0 mL；在加強(qiáng)免疫后14 d進(jìn)行第3次接種，強(qiáng)化免疫，產(chǎn)蛋雞每只肌肉多點(diǎn)注射小鵝瘟滅活疫苗3.0 mL。

關(guān)鍵詞：卵黃抗體；抗體效價(jià)；產(chǎn)蛋雞；免疫程序

雞卵黃免疫球蛋白（Immunoglobulin of Yolk，IgY）是母雞受到免疫刺激后選擇性將其血清中相應(yīng)的特異性IgG轉(zhuǎn)移至卵黃中并蓄積而成的[1]。目前在IgY的形成、生物學(xué)特性等方面已研究得比較清楚，并且IgY作為診斷試劑和防治藥物的研究愈來愈受到關(guān)注[2-3]。為此，本實(shí)驗(yàn)將產(chǎn)蛋雞按不同免疫程序接種免疫原，通過比較抗小鵝瘟IgY效價(jià)高低來確定雞群免疫程序，現(xiàn)將試驗(yàn)結(jié)果報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 小鵝瘟免疫原 小鵝瘟活疫苗（GD株），疫苗批號(hào)GD201001；小鵝瘟滅活疫苗（H株），疫苗批號(hào)H201001；上述兩種疫苗均由哈藥集團(tuán)生物疫苗有限公司制備。

1.1.2 試驗(yàn)用產(chǎn)蛋雞 120日齡產(chǎn)蛋雞420只，由哈藥集團(tuán)生物疫苗有限公司實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供；達(dá)到《生產(chǎn)用產(chǎn)蛋雞質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》要求。

1.1.3 小鵝瘟陽性血清 東北農(nóng)業(yè)大學(xué)王君偉教授惠贈(zèng)。

1.1.4 小鵝瘟瓊擴(kuò)抗原 參照“小鵝瘟診斷技術(shù)” [4]的方法制備。

1.2 方法

1.2.1 試驗(yàn)分組 將400只產(chǎn)蛋雞分成8組，每組50只。同時(shí)另設(shè)健康對(duì)照20只，隔離飼養(yǎng)。

1.2.2 免疫程序設(shè)定 基礎(chǔ)免疫，其中4組產(chǎn)蛋雞每只肌肉注射小鵝瘟活疫苗1.0 mL（5羽份），另外4組產(chǎn)蛋雞每只肌肉注射小鵝瘟滅活疫苗1.0 mL；加強(qiáng)免疫，在基礎(chǔ)免疫后14 d進(jìn)行第2次接種，產(chǎn)蛋雞每只肌肉多點(diǎn)注射不同劑量小鵝瘟滅活疫苗；強(qiáng)化免疫，在加強(qiáng)免疫后14 d進(jìn)行第3次接種，產(chǎn)蛋雞每只肌肉多點(diǎn)注射不同劑量小鵝瘟滅活疫苗，對(duì)照組與試驗(yàn)組同時(shí)進(jìn)行生理鹽水注射，具體免疫程序見表1。

1.2.3 抽樣 分別于基礎(chǔ)免疫前、加強(qiáng)免疫前、強(qiáng)化免疫前和強(qiáng)化免疫后14 d 4個(gè)時(shí)間點(diǎn)采集雞蛋，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)從不同組分別收集雞蛋10枚，打蛋分離卵黃，無菌混合卵黃液各10 mL作為待檢樣品，用于抗體效價(jià)測(cè)定。

1.2.4 抗體效價(jià)測(cè)定 在8.0%氯化鈉溶液100 mL中加入1 g優(yōu)質(zhì)瓊脂粉，加熱融化后，加入終濃度為0.01%硫柳汞防腐，澆制凝膠板。在其上按中央1孔外圍6孔打孔，孔徑5 mm，間距3 mm。將抗體作2倍系列稀釋后進(jìn)行試驗(yàn)，抗原及其抗體加樣量以孔滿為度（約25 μL），加樣后置37～38℃濕盒孵育24～48 h。當(dāng)陰、陽性血清對(duì)照成立時(shí)，與標(biāo)準(zhǔn)抗原形成白色沉淀線的抗體最大稀釋倍數(shù)即為卵黃抗體的效價(jià)。

2 結(jié)果

2.1 不同時(shí)間點(diǎn)抗體測(cè)定結(jié)果

8組免疫程序接種產(chǎn)蛋雞后不同時(shí)間點(diǎn)，瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)檢測(cè)卵黃抗體效價(jià)，基礎(chǔ)免疫中小鵝瘟活疫苗（GD株）的免疫效果優(yōu)于小鵝瘟滅活疫苗（H株）的免疫效果，而在以活苗作為基礎(chǔ)免疫的試驗(yàn)組中，第4組=第3組>第2組>第1組。第4組和第3組抗體效價(jià)無差異，確定第3組免疫程序?yàn)樾※Z瘟卵黃抗體最佳免疫程序（表2）。

2.2 小鵝瘟卵黃抗體最佳免疫程序

小鵝瘟卵黃抗體最佳免疫程序詳見表3。

3 討論

用小鵝瘟免疫原按不同免疫程序接種120日齡產(chǎn)蛋雞，8組免疫程序接種產(chǎn)蛋雞后不同時(shí)間點(diǎn)卵黃抗體效價(jià)檢測(cè)，基礎(chǔ)免疫中小鵝瘟活疫苗（GD株）免疫后14 d，瓊擴(kuò)效價(jià)達(dá)到1∶8，而基礎(chǔ)免疫中小鵝瘟滅活疫苗（H株）免疫后14 d，瓊擴(kuò)效價(jià)只達(dá)到1∶4，因此基礎(chǔ)免疫中小鵝瘟活疫苗（GD株）的免疫效果優(yōu)于小鵝瘟滅活疫苗（H株）的免疫效果；而在以活苗作為基礎(chǔ)免疫的試驗(yàn)組中，加強(qiáng)免疫多點(diǎn)注射小鵝瘟滅活疫苗2.0 mL 優(yōu)于1.0 mL；強(qiáng)化免疫接種3.0 mL與4.0 mL免疫效果相同，考慮到節(jié)約疫苗用量以及避免免疫抑制問題，因此，加強(qiáng)免疫選擇肌肉多點(diǎn)注射小鵝瘟滅活疫苗3.0 mL。通過比較接種后不同時(shí)間卵黃抗體效價(jià)，確定小鵝瘟卵黃抗體免疫程序?yàn)椋夯A(chǔ)免疫接種，產(chǎn)蛋雞每只肌肉注射小鵝瘟活疫苗1.0 mL（5羽份）；加強(qiáng)免疫接種，在基礎(chǔ)免疫后14 d進(jìn)行第2次接種，產(chǎn)蛋雞每只肌肉多點(diǎn)注射小鵝瘟滅活疫苗2.0 mL；強(qiáng)化免疫接種，在加強(qiáng)免疫后14 d進(jìn)行第3次接種，產(chǎn)蛋雞每只肌肉多點(diǎn)注射小鵝瘟滅活疫苗3.0 mL?！觯ň庉嫞旱一郏?/p>

參考文獻(xiàn)：

[1] Peterson R. Antibody production and transfer to egg yolk in chicken [J].Immunol.1962，89：272.

[2] 張玲，蒙永祥，等.雞蛋黃免疫球蛋白IgY的特性及其應(yīng)用[J].新中醫(yī)，2003（4）： 78-79.

[3] 羅函祿.高免卵黃抗體的應(yīng)用及其展望（二）[J].江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，1997（6）： 59-60.

[4] 中國標(biāo)準(zhǔn)出版社第一編輯室編. 動(dòng)物防疫標(biāo)準(zhǔn)匯編[M].北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2004，473-478.