呂彪 劉三俠 宋志元 儲(chǔ)君 劉建 孫雪峰 張要齊

摘 要：不同工藝制備替米考星固體分散體并研究其溶出特性。通過單因素考察選擇載體與藥載比后，采用正交設(shè)計(jì)優(yōu)選替米考星固體分散體制備工藝，以藥物溶出率為考察指標(biāo)，攪拌速度、攪拌時(shí)間、固化時(shí)間作為影響因素，每個(gè)因素取3個(gè)水平，并利用HPLC法測(cè)定替米考星含量。結(jié)果表明，采用熔融法，以Poloxamer l88為載體，藥載比為1∶3，中速攪拌45 min，固化12 h，優(yōu)化得到的工藝穩(wěn)定可行，溶出效果較好。

關(guān)鍵詞：替米考星；固體分散體；HPLC；溶出度

替米考星是一種由泰樂菌素半合成[1，2]的大環(huán)內(nèi)酯類畜禽專用抗生素，口服給藥是臨床最常用的給藥方式，但由于其水溶性差，難以被胃腸道吸收，導(dǎo)致口服生物利用度低。為解決其難溶問題，本研究以聚乙二醇4000 （PEG4000）、聚乙二醇6000 （PEG6000）、Poloxamer 188（Lutrol F68）、聚乙烯吡咯烷酮（PVPK30）等親水性高分子化合物為載體，制備替米考星固體分散體，研究其溶解特性，并以藥物在水中的溶出度為指標(biāo)對(duì)處方進(jìn)行篩選。

1 材料

1.1 試劑藥品

替米考星，石家莊制藥集團(tuán)化盛制藥有限公司；無水乙醇、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉，分析純，天津市風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司；PEG 4000，化學(xué)純，南京威爾化工有限公司；PEG 6000，化學(xué)純，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司；PVPK30，化學(xué)純，博愛新開源制藥有限公司；Poloxamer 188，化學(xué)純，南京威爾化工有限公司；乙腈，色譜純，天津市江天化工技術(shù)有限公司；磷酸、鹽酸、四氫呋喃、二丁胺為分析純。

1.2 主要儀器

CP214電子天平，奧豪斯儀器（上海）有限公司；XMTD-4000電熱恒溫水浴鍋，北京市永光明醫(yī)療儀器有限公司；KQ5200DB數(shù)控超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司；XK78-2磁力加熱攪拌器，姜堰市新康醫(yī)療器械有限公司；UV-5300PC紫外可見光分光光度計(jì)，上海美譜達(dá)儀器有限公司；BCD-182ZM2冰箱，合肥美菱股份有限公司；智能溶出試驗(yàn)儀 *ZRS-8G 天津大學(xué)精密儀器廠；高效液相色譜儀 LC600 北京創(chuàng)新通恒科技有限公司；101-2電熱鼓風(fēng)干燥箱 北京中興偉業(yè)儀器有限公司；SHA-C水浴恒溫振蕩器 金壇市科析儀器有限公司；pH計(jì) pHs-3C 天津市賽得利斯實(shí)驗(yàn)分析儀器制造廠。

2 方法與結(jié)果

2.1 替米考星含量檢測(cè)方法的驗(yàn)證

2.1.1色譜條件選擇

色譜條件：C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈-四氫呋喃-二丁胺磷酸鹽緩沖液-水，體積比為10∶5∶5∶80[3]，pH 2.50；檢測(cè)波長(zhǎng)：290 nm；流速：1.0 mL/min；進(jìn)樣量：20 μL。

二丁胺磷酸緩沖液的配制：將10 mL磷酸（ 體積分?jǐn)?shù)為85%） 緩慢地加到 50 mL 純化水中，定容至100 mL，配制成10%磷酸溶液。將10%磷酸溶液70 mL 加到16.8 mL二丁胺中，邊加邊攪拌，待溶液冷卻至室溫，用85%磷酸調(diào)節(jié)pH至2.5，加超純水定容至100 mL。

稀釋液的配制：將5.7 mL磷酸（ 85%）加入1 000 mL超純水中，用100 g/L NaOH溶液調(diào)節(jié)pH至2.5，密封保存。

替米考星待測(cè)液（ 0.5 mg/mL ）的配制：精確稱取25 mg替米考星至50 mL 的容量瓶中，先加入10 mL乙腈溶解，然后用稀釋液定容至50 mL，再以0.22 μm 有機(jī)濾膜過濾備用。

替米考星高效液相色譜圖見圖1。在此色譜條件下替米考星順式結(jié)構(gòu)與反式結(jié)構(gòu)分離度較好，峰形較佳，而且保留時(shí)間適中，各項(xiàng)參數(shù)達(dá)到最優(yōu)狀態(tài)。

2.1.2線性關(guān)系考察

精密稱取替米考星對(duì)照品50 mg，置50 mL的容量瓶中，加入乙腈5 mL溶解，再加流動(dòng)相至刻度，搖勻，得濃度為1 000 μg/mL的對(duì)照品貯備液。分別精密量取對(duì)照品貯備液1.0 mL、2.0 mL、3.0 mL、5.0 mL、10.0 mL至25 mL容量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，作對(duì)照品溶液。將上述各濃度的對(duì)照品溶液，分別進(jìn)樣20 μL，記錄峰面積。濃度對(duì)峰面積作線性回歸，標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖2。替米考星在40～400 μg/mL范圍內(nèi)，濃度與峰面線性關(guān)系良好。

2.1.3精密度試驗(yàn)

精密吸取120 μg/mL 對(duì)照品溶液20 μL，重復(fù)進(jìn)樣6 次，測(cè)量峰面積，峰面積 RSD：0.62%（n=6），精密度良好。

2.1.4穩(wěn)定性試驗(yàn)

分別精密吸取120 μg/mL 對(duì)照品溶液20 μL于0 h、2 h、4 h、8 h、10 h、12 h、24 h進(jìn)樣，測(cè)量峰面積，求得峰面積的RSD：0.57%（n=7），穩(wěn)定性良好。

2.1.5回收率試驗(yàn)

取替米考星對(duì)照品約 0.005 g，0.010 g，0.015 g，精密稱定，分別置 50 mL 的容量瓶中，加乙腈 5 mL 溶解，然后加入已知含量的樣品溶液（300 μg/mL） 5 mL，加流動(dòng)相至刻度，搖勻，進(jìn)樣，測(cè)定替米考星的含量，除去樣品本底，計(jì)算回收率及 RSD，結(jié)果平均回收率：100.08%，RSD：1.77%（n=3）。

2.2 替米考星固體分散體的制備

2.2.1熔融法制備替米考星-PEG和替米考星-Poloxamer l88固體分散體

取 3 g PEG 或 Poloxamer l88 置于燒杯中，63℃左右水浴加熱使其熔融，加入1 g 替米考星，邊加邊攪拌，使替米考星完全融于介質(zhì)中，繼續(xù)攪拌60 min。然后從水浴中取出燒杯，迅速倒入預(yù)冷的金屬托盤中，然后轉(zhuǎn)移至-20℃的冰箱固化24 h，取出置37℃鼓風(fēng)干燥箱干燥24 h，從托盤中取出，研碎，過80目篩，置干燥器避光保存。

2.2.2溶劑法制備替米考星-PVP K30固體分散體

稱取替米考星1 g和PVP K30 3 g于燒杯中，加入50 mL無水乙醇溶解，攪拌，直至替米考星和PVPK30均溶解于乙醇而形成澄明溶液，繼續(xù)攪拌60 min后，減壓蒸發(fā)乙醇至黏稠狀時(shí)，迅速倒入預(yù)冷的金屬托盤中，然后轉(zhuǎn)移至-20℃的冰箱固化24 h，取出，粉碎成20目的小粒，在50℃鼓風(fēng)干燥箱中烘24 h以徹底除去溶劑，研細(xì)，過80目篩，置干燥器避光保存。

2.3 替米考星固體分散體制備工藝及處方篩選

2.3.1 篩選方法

主要通過考察各工藝及處方下制備替米考星的溶出特性進(jìn)行篩選。溶出度的測(cè)定方法照中國(guó)藥典2010年版附錄ⅩC第三法[4]操作。取供試樣品，照溶出度測(cè)定三法（小杯法），以200 mL蒸餾水為溶出介質(zhì)，轉(zhuǎn)速為35 r/min，溫度為37℃，依法操作，于2 min、5 min、10 min、15 min、25 min、35 min和60 min取樣5 mL，經(jīng)0.22 μm微孔濾膜濾過，備用，并及時(shí)在操作容器中補(bǔ)充相同釋放介質(zhì)5 mL。高效液相色譜法分別測(cè)定峰面積，計(jì)算出不同時(shí)間樣品液的濃度，求算藥物的累積溶出百分率計(jì)算累積溶出度，繪制溶出曲線。

2.3.2 初步篩選

2.3.2.1載體篩選 分別取替米考星與 PEG、Poloxamer l88、PVP K30 按上述方法形成固體分散體，藥物與載體的比例為1∶3，測(cè)定樣品溶出度，繪制溶出曲線，見圖3，由圖可知，替米考星-Poloxamer l88固體分散體累積溶出量最大，替米考星原料累積溶出量最小。

2.3.2.2藥-載比篩選 分別取替米考星與Poloxamer l88按“2.2.1”方法制備固體分散體，藥物與載體的比例為1∶1、1∶3、1∶5、1∶7、1∶9，測(cè)定樣品溶出度，溶出曲線見圖4，由圖可知，藥載比1∶3時(shí)溶出效果最好，1∶1時(shí)溶出效果最差。

2.3.3 正交篩選

2.3.3.1正交試驗(yàn)設(shè)計(jì) 通過單因素試驗(yàn)，對(duì)替米考星固體分散體的載體及藥-載比進(jìn)行了研究，結(jié)果表明替米考星：Poloxamer l88以1∶3為最佳。在此基礎(chǔ)上采用正交試驗(yàn)以累積溶出率為指標(biāo)進(jìn)一步篩選，以攪拌速度、攪拌時(shí)間和固化時(shí)間三個(gè)因素按正交設(shè)計(jì)L9（34）作三因素三水平的試驗(yàn)篩選。L9（34）正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)因素水平見表1，對(duì)各因素分配正交表，得出9個(gè)實(shí)驗(yàn)處方，具體處方安排見表2：

2.3.3.2正交試驗(yàn)結(jié)果分析 正交試驗(yàn)分析結(jié)果如表2所示，可知：IIA>IIIA>IA，IB>IIIB>IIB，IC>IIC>IIIC，因此各因素最優(yōu)水平組合為A2B1C1，即攪拌轉(zhuǎn)速為中速，攪拌時(shí)間為 45 min，固化時(shí)間為12 h。方差分析結(jié)果見表3和表4，由表可知攪拌時(shí)間對(duì)指標(biāo)累積溶出率的影響顯著（P<0.01），而攪拌速度和固化時(shí)間對(duì)指標(biāo)累積溶出率具有一定影響（0.01

綜合正交試驗(yàn)篩選，得到替米考星固體分散體的優(yōu)化處方和工藝。

處方：替米考星 1 g，Poloxamer l88 3 g。

工藝：取3 g Poloxamer l88置于燒杯中，60℃左右水浴加熱使其熔融，加入1 g 替米考星，邊加邊攪拌，使替米考星完全融于介質(zhì)中，保持中速繼續(xù)攪拌45 min。然后從水浴中取出燒杯，迅速倒入預(yù)冷的金屬托盤中，轉(zhuǎn)移至-20℃的冰箱，固化12 h，取出置37℃鼓風(fēng)干燥箱干燥24 h，從托盤中取出，研碎，過80目篩，置干燥器避光保存。

3 分析與討論

固體分散體常用制備方法有熔融法、溶劑法、溶劑-熔融法等。其它有利用共熔原理，用研磨法形成低共熔混合物，以及藥物溶于有機(jī)溶劑并分散吸附于惰性材料形成粉狀溶液等。在固體分散體中，藥物溶出速率很大程度上取決于載體的性質(zhì)與制備工藝。對(duì)載體的要求是生理惰性、無毒；不與主藥發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，不影響主藥的化學(xué)穩(wěn)定性，不影響藥物的藥效與含量測(cè)定；能使藥物呈最佳分散狀態(tài)；來源容易、成本低廉。目前，固體分散體常用的載體主要分為水溶性、難溶性、腸溶性載體。其中水溶性的載體有：高分子類如PEG4000、PEG6000、PVP K30；表面活性劑類如Poloxamer188等；非表面活性劑類如尿素、枸櫞酸、琥珀酸、半乳糖、蔗糖和右旋糖酐等。對(duì)于難溶性藥物而言，利用水溶性載體制備的固體分散體，對(duì)提高藥物溶解度，加快藥物溶出速率，提高藥物的生物利用度方面具有重要的意義。

泊洛沙姆（Poloxamer）為聚氧乙烯聚氧丙烯醚嵌段共聚物，此類聚合物隨著聚合度的增大，形態(tài)從液體、半固體至蠟狀固體，性質(zhì)從難溶于水的液體到易溶于水的固體。Poloxamer188是一種優(yōu)良的水溶性非離子型表面活性劑。以Poloxamer188為載體，用熔融法或溶劑法制備固體分散體，載藥量大，能抑制產(chǎn)品結(jié)晶，可大大提高藥物的溶出速率和生物利用度[5]。泊洛沙姆性能優(yōu)良、毒性小、對(duì)黏膜幾乎無刺激性、過敏性，可用于靜脈注射，增加藥物溶出的效果明顯優(yōu)于PEG載體，是一種較理想的速效固體分散體載體?！觯ň庉嫞旱一郏?/p>

參考文獻(xiàn)：

[1] 張宏哲，吳春麗，彭宗強(qiáng)，等.替米考星的合成[J].河南化工，2005（22）：21-22.

[2] 劉曉萍，趙恒壽.替米考星的研究新進(jìn)展及其應(yīng)用[J].四川畜牧獸醫(yī)，2008，（4）：33-37.

[3] 劉德金，劉愛玲，劉桂蘭，等.檢測(cè)替米考星含量的高效液相色譜法改良[J].南京農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2011，34（3）：135-139.

[4] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典[M]. 2010年版（二部）.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010： 1031-1032.

[5] 鄭俊民.藥用高分子材料學(xué)[M].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2004，166-169.