葛謙　茍春林　姜瑞

摘要[目的]評(píng)價(jià)30%醚菌酯懸浮劑在設(shè)施栽培黃瓜上使用后的殘留行為及環(huán)境安全性。[方法]參照《農(nóng)藥殘留試驗(yàn)準(zhǔn)則》，通過氣相色譜法檢測(cè)分析黃瓜中醚菌酯含量，研究了30%醚菌酯懸浮劑在黃瓜上的殘留動(dòng)態(tài)。[結(jié)果]醚菌酯在銀川、長(zhǎng)沙、哈爾濱黃瓜中的半衰期分別為2.8～3.1、2.4～3.7、2.1～5.1 d，施藥3、5、7 d黃瓜中醚菌酯的殘留量均低于0.500 0 mg/kg，未超出國(guó)家限量標(biāo)準(zhǔn)。[結(jié)論]建議設(shè)施栽培條件下，最高制劑用藥量270 g.a.i/ha（制劑0.09 g/m2），最多施藥3 次，安全間隔期3～5 d。

關(guān)鍵詞30%醚菌酯懸浮劑；黃瓜殘留；消解動(dòng)態(tài)；殘留分析

中圖分類號(hào)S481+.3文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A文章編號(hào)0517-6611（2014）22-07422-04

黃瓜（Cucumis sativus Linn.）屬葫蘆科，是我國(guó)主要出口蔬菜品種之一。黃瓜對(duì)環(huán)境條件要求嚴(yán)格且抗逆性較差。隨著栽培方式的變化，病蟲害已成為黃瓜生產(chǎn)中突出的問題，嚴(yán)重影響黃瓜的產(chǎn)量和品質(zhì)。病蟲防控過程中不合理使用農(nóng)藥及安全間隔期過短已成為影響蔬菜農(nóng)藥殘留超標(biāo)的重要因素，農(nóng)產(chǎn)品常常因農(nóng)藥殘留問題而影響出口，黃瓜生產(chǎn)中如何控制農(nóng)藥殘留以保證其食用安全已成為一個(gè)迫切需要解決的問題。

醚菌酯[1-3]是一種高效、廣譜、新型殺菌劑。 其對(duì)由半知菌、子囊菌、擔(dān)子菌、卵菌綱等真菌引起的多種病害具有很好的活性，如葡萄白粉病、小麥銹病、馬鈴薯疫病、南瓜疫病、水稻稻瘟病等病害。 醚菌酯不僅具有廣譜的殺菌活性，同時(shí)兼具有良好的保護(hù)和治療作用。與其他常用的殺菌劑無(wú)交互抗性，且比常規(guī)殺菌劑持效期長(zhǎng)。 醚菌酯具有高度的選擇性，對(duì)作物、人畜及有益生物安全，對(duì)環(huán)境基本無(wú)污染。有關(guān)其殘留分析方法常用的有氣相色譜法（GC）[4-7]、液相色譜法（LC）[8]、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法（GCMS）[9-10]和高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（HPLCMS/MS）[11]等。有關(guān)其消解方面，已有研究表明醚菌酯在蘋果及其土壤中的消解半衰期分別為7～10和12 ～13 d[12]，在草莓及其土壤中的半衰期分別為 5～6和8～12 d[13]，但就其殘留降解行為和對(duì)環(huán)境生態(tài)的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估等研究較少。為此，筆者參照《農(nóng)藥殘留試驗(yàn)準(zhǔn)則》，采用氣相色譜法分析了銀川、長(zhǎng)沙、哈爾濱三地30%醚菌酯懸浮劑在黃瓜和土壤中的殘留降解動(dòng)態(tài)，旨在為該制劑在蔬菜安全生產(chǎn)中的應(yīng)用提供借鑒。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1供試品種及試驗(yàn)地概況。供試黃瓜品種為板橋白，采用保護(hù)地栽培方式。試驗(yàn)于2012年6月至2013年9月在寧夏賀蘭縣洪廣鎮(zhèn)金鑫村、黑龍江省哈爾濱市、湖南省長(zhǎng)沙市進(jìn)行。寧夏平均日照時(shí)數(shù)830～1 550 h，平均氣溫20.7 ℃，平均降水量167～408 mm，土壤類型為淡灰鈣土，pH 8.23；黑龍江平均日照時(shí)數(shù)2 808 h，平均氣溫16.0 ℃，平均降水量300～700 mm， 土壤類型為黑鈣土，pH 5.76；湖南平均日照時(shí)數(shù)602～635 h，平均氣溫26.0～3.0 ℃，平均降水量450～510 mm，土壤類型為粘土，pH 6.20。

1.1.2藥劑。供試農(nóng)藥30%醚菌酯懸浮劑由海南力智工程有限責(zé)任公司生產(chǎn)。

1.1.3儀器。Agilent 6890N氣相色譜儀，配ECD檢測(cè)器（美國(guó)安捷倫公司）；高速勻漿機(jī)（德國(guó)T18basic型）； 組織搗碎機(jī)（吉列布朗K600）；漩渦混勻器（德國(guó)MS3 digital）；電子天平（精度0.01 g，梅特勒-托利多國(guó)際股份有限公司）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（瑞士步琪R15）；離心機(jī)（TD40L，上海安亭科學(xué)儀器廠）；電熱鼓風(fēng)干燥箱（DHG9240A型，上海一恒科學(xué)儀器有限公司）。

1.1.4試劑。醚菌酯標(biāo)準(zhǔn)品：純度98.0%，由德國(guó)DR公司提供；乙腈：色譜純；石油醚：分析純；正己烷：色譜純；丙酮：色譜純；去離子水；氯化鈉：分析純，140 ℃烘烤4 h；無(wú)水硫酸鈉：分析純，550 ℃高溫干燥；弗羅里硅土（60～100目）：550 ℃活化，4%蒸餾水滅活；弗羅里硅柱：玻璃層析柱底部塞棉花，按1 cm無(wú)水硫酸鈉、3 cm弗羅里硅土、1 cm無(wú)水硫酸鈉分別裝入填料，備用。

1.2方法

1.2.1消解動(dòng)態(tài)試驗(yàn)。

1.2.1.1黃瓜樣品。施藥時(shí)期為黃瓜果實(shí)生長(zhǎng)至成熟個(gè)體半大時(shí)，噴霧。施藥時(shí)應(yīng)保證用于動(dòng)態(tài)試驗(yàn)的黃瓜均勻著藥，對(duì)著藥黃瓜進(jìn)行標(biāo)記。施藥劑量為360 g.a.i/ha（制劑1 200 g/hm2），對(duì)水稀釋（900 kg/hm2），施藥后2 h、1、2、3、5、7、10、14、21、30、45 d采集黃瓜果實(shí)，每處理3次重復(fù)，處理間設(shè)保護(hù)隔離區(qū)，另設(shè)清水對(duì)照。隨機(jī)在試驗(yàn)小區(qū)內(nèi)采集12個(gè)以上無(wú)病害的黃瓜果實(shí)，將采集好的黃瓜田間樣本用不銹鋼刀切成1 cm大小的碎塊，充分混勻，用四分法縮分樣品，分成2份150.00 g的樣品，分別裝入封口樣品容器中，于-20 ℃冰柜中保存。小區(qū)邊行和每行距離兩端0.5 m內(nèi)不采樣。

1.2.1.2土壤樣品。選一塊30 m2的地塊，單獨(dú)施藥，施藥濃度為制劑量0.15 g.a.i/m2（制劑0.5 g/m2），對(duì)水稀釋（900 kg/hm2），施藥后2 h、1、2、3、5、7、10、14、21、30、45 d采樣，另設(shè)清水對(duì)照。隨機(jī)選擇12個(gè)采樣點(diǎn)，用土鉆取0～10 cm土層，每小區(qū)每次采集土壤樣本2.00 kg，去除碎石雜草等雜物，混勻，四分法取200.00 g裝入封口袋，于-20 ℃冰柜中保存。

1.2.2最終殘留試驗(yàn)。設(shè)2個(gè)施藥劑量：低劑量和高劑量。低劑量按制劑量180 g.a.i/ha（制劑600 g/hm2），高劑量按制劑量270 g.a.i/ha（制劑900 g/hm2）施藥。各設(shè)3次施藥和4次施藥2個(gè)處理，每個(gè)處理3次重復(fù)，小區(qū)面積30 m2，按照試驗(yàn)設(shè)計(jì)時(shí)間開始第1次施藥，施藥間隔期7 d。采樣時(shí)間距離最后一次施藥的間隔時(shí)間為2、3、5、7 d。另設(shè)清水對(duì)照，處理間設(shè)保護(hù)帶。黃瓜樣本的采集同“1.2.1.1”，土壤樣本的采集同“1.2.1.2”。

1.2.3分析方法。

1.2.3.1黃瓜樣品的提取。稱取10.00 g試樣于50 ml離心管中，加入20.0 ml乙腈，用均質(zhì)器在15 000 r/min下勻漿提取1 min，加入5.00 g已烘烤的氯化鈉，搖勻，將離心管在3 000 r/min下離心5 min，取上清液10.0 ml于濃縮瓶中（相當(dāng)于5.00 g試樣量），待凈化。

1.2.3.2土壤樣品的提取。稱取5.00 g試樣于50 ml離心管中，加入20.0 ml乙腈，室溫振蕩1 h，加入5.00 g干燥氯化鈉，搖勻，將離心管在3 000 r/min下離心5 min，取上清液10.0 ml于濃縮瓶中（相當(dāng)于2.50 g試樣量），待凈化。

1.2.3.3凈化。將盛有上清液的濃縮瓶置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上，35 ℃水浴蒸發(fā)近干，加入2.5 ml丙酮+石油醚（10+90）待凈化。將弗羅里硅柱用10.0 ml石油醚預(yù)淋洗，條件化，當(dāng)溶劑液面到達(dá)吸附層表面時(shí)，立即倒入上述待凈化溶液，用濃縮瓶接受洗脫液，用丙酮+石油醚（10+90）沖洗濃縮瓶后淋洗弗羅里硅柱，并重復(fù)1次。將盛有淋洗液的濃縮瓶置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上，在水浴溫度35 ℃下蒸發(fā)至干。用正己烷定容至5.0 ml，在旋渦混合器上混勻，待測(cè)。

1.2.3.4儀器分析條件。色譜柱：DB35MS色譜柱（30 m×0.25 mm，0.25 μm）；模式：不分流；載氣：N2；加熱器：290 ℃；壓力：27.41 Psi；總流量：101 ml/min；流量：3.2 ml/min；平均線速度：59 cm/s；柱箱溫度：60～300 ℃；尾吹氣流量：N2，60 ml/min；進(jìn)樣量：1.0 μl。在上述條件下，醚菌酯保留時(shí)間為10.6 min左右。

2結(jié)果與分析

2.1標(biāo)準(zhǔn)曲線將1.0 mg/ml醚菌酯標(biāo)準(zhǔn)溶液用正己烷稀釋配制0.02、0.05、0.10、0.20、1.00、2.00 mg/L系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，在“1.2.3.4”液相色譜條件下進(jìn)行測(cè)定，以醚菌酯標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度與峰面積作標(biāo)準(zhǔn)曲線。標(biāo)樣線性方程為：y=36 703x-255.95，相關(guān)系數(shù)（r）為0.999 8，其中y為醚菌酯峰面積，x為標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度（圖1）。

圖1醚菌酯標(biāo)準(zhǔn)曲線2.2添加回收率與相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別在空白黃瓜和土壤樣品中添加0.05、0.20、0.50 mg/kg 3個(gè)濃度的醚菌酯標(biāo)準(zhǔn)溶液，每個(gè)濃度5次重復(fù)，測(cè)定回收率。由表1可知，黃瓜中回收率為80.2%～114.0%，變異系數(shù)為2.1%～5.8%；土壤中回收率為95.1%～106.5%，變異系數(shù)為3.1%～7.3%，醚菌酯的最低檢出量為2.5×10-2 ng，最低檢出濃度為2.5 μg/kg。