佟林峰　楊紹斌

摘要 [目的]研究蛹蟲草多糖與復(fù)合果蔬酵素的復(fù)合物對(duì)動(dòng)物細(xì)胞的抗氧化性。[方法]試驗(yàn)將蛹蟲草多糖與復(fù)合果蔬酵素的復(fù)合物分別飼喂和注射給小鼠，觀察該復(fù)合物在小鼠體內(nèi)的作用和在小鼠體外對(duì)超氧陰離子自由基、羥自由基的清除作用。[結(jié)果]試驗(yàn)表明，該復(fù)合物在小鼠體內(nèi)可使SOD明顯增加，在體外可有效清除超氧陰離子自由基、羥自由基，具有較強(qiáng)的抗氧化性作用。[結(jié)論]研究可為含有蟲草多糖的新型復(fù)合果蔬酵素新品規(guī)?；a(chǎn)提供理論依據(jù)。

關(guān)鍵詞 蛹蟲草；復(fù)合果蔬酵素；抗氧化性；蟲草多糖

中圖分類號(hào) S567 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 0517-6611（2014）20-06769-02

Antioxidation Research of Fruit and Vegetable Enzyme with Cordyceps militaris Polysaccharide

TONG Linfeng，YANG Shaobin

（School of Life Science and Engineering， Shenyang University， Shenyang， Liaoning 110044）

Abstract [Objective] To study antioxidation of Cordyceps militaris polysaccharide and compound fruit and vegetable enzyme on animal cells. [Method] The complexes were fed and injected into mice， the compound in mice and effect on scavenging superoxide anion free radical， hydroxyl radical in mice were observed. [Result] The results showed that the compound can increase SOD in mice， can scavenge superoxide ion radical， hydroxyl radical， with strong antioxidation. [Conclusion] The study can provide theoretical basis for large scale production of new compound fruit and vegetable enzyme with Cordyceps militaris polysaccharide.

Key words Cordyceps militaris； Compound fruit and vegetable enzyme； Antioxidation； Cordyceps polysaccharide

蛹蟲草多糖是蛹蟲草中重要的活性物質(zhì)，國(guó)內(nèi)外科研人員對(duì)蛹蟲草多糖的結(jié)構(gòu)有較多研究。蟲草多糖已被證實(shí)具有降血糖等作用，同時(shí)對(duì)單核巨嗜細(xì)胞系統(tǒng)的功能具有增強(qiáng)作用，還能提高免疫功能及治療肝的病毒性感染等，具有廣闊的開發(fā)前景。

復(fù)合果蔬酵素是以生鮮果蔬菌類等有機(jī)食品為原料，通過分選、去雜、漂洗、壓汁、過濾、離心、萃取、純化等食品加工工藝和酶工程技術(shù)，獲取果蔬酶液粗品。該制劑具有保護(hù)肝臟免受毒素以及酒精的傷害；幫助消化系統(tǒng)更好地吸收食品中營(yíng)養(yǎng)的同時(shí)分解并排除身體積存的多余脂肪和膽固醇；對(duì)血管中的壞膽固醇可以溶解并清潔血管；清脂、清宿便、排毒、加速代謝、養(yǎng)顏美容、瘦身；抗氧化，提高人體免疫力等營(yíng)養(yǎng)和保健作用。

筆者研究了蛹蟲草多糖配合果蔬酵素的抗氧化作用，經(jīng)配方優(yōu)化，按照17∶1的比例在果蔬酵素中加入蟲草多糖使產(chǎn)品的抗氧化性更強(qiáng)，具有更高的保健作用。筆者對(duì)該改良制劑的抗氧化性進(jìn)行了研究，以期為含有蟲草多糖的新型復(fù)合果蔬酵素新品規(guī)?；a(chǎn)提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

復(fù)合果蔬酵素，沈陽天益堂生物科技有限公司；

蛹蟲草子實(shí)體，遼寧省農(nóng)業(yè)科學(xué)院；

小鼠，沈陽醫(yī)科大學(xué)。主要試劑：硫酸亞鐵、過氧化氫、水楊酸、Tris、EDTA、鄰苯三酚、氫氧化鈉、氯化鈉、碘酸鉀、碘化鉀、無水磷酸氫二鈉、無水磷酸二氫鉀等；DPPH（分析純）、橄欖油、酚酞，沈陽化學(xué)試劑廠。主要儀器設(shè)備：UV2300紫外可見分光光度計(jì)，恒溫水浴鍋，高速組織搗碎機(jī)，離心機(jī)。

1.2 方法

1.2.1

含有蛹蟲草多糖的復(fù)合果蔬酵素制劑生產(chǎn)流程。

①果蔬酵素生產(chǎn)流程：選取果蔬原料→剝皮→打漿→果汁過濾（排出種子，得到新鮮純果汁）→調(diào)整糖度→殺滅空氣中的微生物和雜菌→添加專用酵母→發(fā)酵→殺滅酵母→終止發(fā)酵→得到含有果肉和全部酵素的發(fā)酵液→過濾得到酵素[1]。②堿提蛹蟲草多糖工藝流程：樣品稱重→浸泡→堿液浸提→離心→中和→濃縮→乙醇沉淀→離心分離→洗滌沉淀→烘干→蛹蟲草粗多糖。③將提取得到的蛹蟲草多糖與復(fù)合果蔬酵素的比例按照17∶1的比例混合，即配得含有蛹蟲草多糖的復(fù)合果蔬酵素制劑。

1.2.2

復(fù)合物對(duì)小鼠的影響。選取沈陽醫(yī)科大培育的健康雄性小鼠76只，體重27～33 g，隨機(jī)分成4組：復(fù)合物灌胃組1 g/kg，復(fù)合物灌胃組3 g/kg，復(fù)合物腹腔注射組1 g/kg和等量生理鹽水對(duì)照組。每天給藥1次，接連給藥5 d和15 d。試驗(yàn)結(jié)束后首先將小鼠處死并迅速取出小鼠的肝臟置于冰浴中，準(zhǔn)確稱取肝組織1 g，加入冰生理鹽水在玻璃勻漿器中制成勻漿，在600 r/min離心機(jī)中離心10 min，去除沉渣。勻漿部分采用微量指血鄰苯三酚自氧化法測(cè)定超氧化物歧化酶（SOD ），采用DTNB化學(xué)比色法測(cè)定谷胱甘肽過氧化物酶（GSHPX）。蛋白質(zhì)的含量按Lowry法測(cè)定[2]。

1.2.3

對(duì)超氧陰離子自由基清除作用的測(cè)定。取4.5 ml、0.05 mol/L、 pH 8.2的TrisHCl 緩沖液，置于25 ℃水浴鍋中預(yù)熱25 min，分別加不同濃度的復(fù)合物1 ml和25 mmo l/L的鄰苯三酚溶液0.4 ml，將二者混勻，然后于25 ℃水浴中反應(yīng)8 min，加入8 mol/L HCl 1.0 ml以終止反應(yīng)[3]，用TrisHCl緩沖液作為參照，在波長(zhǎng)299 nm處測(cè)定吸光度，并計(jì)算清除率?？瞻讓?duì)照組用1 ml去離子水代替樣品，每樣反應(yīng)做5組，計(jì)算平均值[4]。

清除率的計(jì)算公式：

清除率（%）= （A2-A1）/A2×100%

式中，A1為樣品的平均吸光度；A2為空白的平均吸光度。

1.2.4

復(fù)合物對(duì)羥自由基清除作用的測(cè)定。

羥自由基是由Fenton反應(yīng)產(chǎn)生[5]，因?yàn)椤H氧化水楊酸產(chǎn)生對(duì)波長(zhǎng)510 nm光有特征吸收，所以可以通過測(cè)定產(chǎn)物的吸光度來檢測(cè)清除率。首先在30 ml比色管中分別按順序加入5 mmol/L水楊酸3 ml、2 mmol/L硫酸亞鐵3 ml、1 mmol/L過氧化氫3 ml，在加入的過程中注意搖勻，在37 ℃水浴加熱20 min后取出，測(cè)定吸光度A0。然后分別加入特定濃度的待測(cè)液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0 ml，然后再按順序逐步加入去離子水0.9、0.8、0.7、0.6、0.5、0.4、0.3、0.2、0.1、0 ml，搖勻，繼續(xù)在恒溫水浴條件下加熱15 min，然后取出測(cè)其吸光度Ax，為數(shù)據(jù)可靠，每組試驗(yàn)重復(fù)3次取平均值。清除率公式[6]：

清除率（%）=（A0-Ax）/A0×100%

2 結(jié)果與分析

2.1 復(fù)合物對(duì)小鼠的影響

由表1可見，取復(fù)合物3 g/kg，對(duì)小鼠連續(xù)給藥14 d，增加肝組織SOD的含量，與對(duì)照組比較，有非常顯著性差異（P<0.01），復(fù)合物對(duì)GSHPX的影響，與對(duì)照組比較無顯著性差異（P>0.05）。表明復(fù)合物能增加小鼠肝組織SOD的含量。

2.2 復(fù)合物對(duì)超氧陰離子自由基的清除作用

由于復(fù)合物本身具有紅顏色，在波長(zhǎng)299 nm下有一定的吸光度值，所以在試驗(yàn)過程中吸光度值A(chǔ)2為減去不同濃度的酵素自身的在波長(zhǎng)299 nm下吸光度值后的數(shù)值。

從圖1中可以看出，復(fù)合果蔬酵素對(duì)超氧陰離子自由基

2.3 復(fù)合物對(duì)羥自由基的清除作用

羥基自由基是活性

氧中化學(xué)性質(zhì)最活潑的自由基，因此可通過分光光度法測(cè)定

其含量來檢測(cè)待測(cè)物清除羥基自由基的能力。試驗(yàn)中取濃度為50%的復(fù)合物作為樣品，結(jié)果見圖2。

圖2 濃度為50%的復(fù)合物對(duì)羥自由的基清除效果

從圖2中可以看出，隨著復(fù)合物加入量的增多，對(duì)羥自由基的清除率也在隨著增加，當(dāng)加入復(fù)合物的體積為1.0 ml時(shí)，其清除率為48.5%。同時(shí)又用復(fù)合物原液進(jìn)行試驗(yàn)，加入體積為1.0 ml時(shí)，其清除率仍在50%左右，說明該復(fù)合物對(duì)羥基自由基清除能力稍差。

3 結(jié)論

該研究采用不同的自由基體系對(duì)復(fù)合果蔬酵素體外抗氧化活性和酵素內(nèi)酶活性進(jìn)行了較為全面的研究，從試驗(yàn)結(jié)果可以看出以下結(jié)論：

新型蛹蟲草多糖與果蔬酵素復(fù)合物對(duì)超氧陰離子自由基具有很強(qiáng)的清除作用，并對(duì)羥自由基也有一定的清除作用；新型復(fù)合物內(nèi)SOD酶活性也很高，具有很好的保健功效。因此可以得出，新型復(fù)合物具有抗氧化、抗衰老、增強(qiáng)免疫力、預(yù)防各種疾病的功效。

參考文獻(xiàn)

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