李丹 吳海紅 邢桂梅等

摘要[目的] 建立一套完整的‘紫泉萱草組織培養(yǎng)快繁技術體系。[方法]選取‘紫泉萱草的花托及幼嫩的莖段為外植體，旨在建立‘紫泉萱草離體培養(yǎng)的有效再生體系。[結果]適合花托愈傷組織產生的培養(yǎng)基是MS+6BA 2.0 mg/L+NAA 0.01 mg/L，適合莖段愈傷組織產生的培養(yǎng)基是MS+6BA 2.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L。誘導不定芽分化與增殖的最佳培養(yǎng)基為MS+6BA 2.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L，最佳生根培養(yǎng)基為1/2MS+NAA 0.4 mg/L。[結論]為‘紫泉萱草的大規(guī)模生產提供基礎數(shù)據(jù)。

關鍵詞紫泉萱草；組織培養(yǎng)；快速繁殖

中圖分類號S188文獻標識碼A文章編號0517-6611（2014）23-07723-03

作者簡介李丹（1984- ），女，遼寧扶順人，助理研究員，從事花卉組織培養(yǎng)方面的研究。

收稿日期20140710萱草（Hemerocallis）又稱忘憂草、金針菜、黃花菜等，屬百合科萱草屬多年生草本宿根花卉。萱草姿態(tài)優(yōu)美，品種繁多，生長強健，適應性強，是庭園、花壇及街頭綠化的理想花卉，同時，其花可食用，根可入藥，已成為現(xiàn)代人們生活中不可缺少的重要花卉。萱草基因高度雜合，種子繁殖難以保持母本的優(yōu)良性狀，采用分株的方式進行繁殖時，繁殖系數(shù)較低，難以實現(xiàn)規(guī)模化的生產，無法達到萱草商品化生產需求[1]。目前，市場需求日益增加，利用組織培養(yǎng)方法進行萱草種苗的繁育，既可保持優(yōu)良性狀又可在短時間內獲得大量種苗，是實現(xiàn)萱草產業(yè)化快速發(fā)展的有效途徑。

國內外很多植物學專家先后對萱草組織培養(yǎng)進行了研究，但結果不盡相同。這說明萱草品種間差異性大、品種特異性強，因此針對每一萱草品種進行組培快繁研究都很有必要[2-4]。為此，筆者針對‘紫泉萱草的組織培養(yǎng)技術進行研究，旨在建立一套完整的‘紫泉萱草組織培養(yǎng)快繁技術體系。

1材料與方法

1.1試驗材料供試材料為‘紫泉萱草，由遼寧省農科院花卉所提供。

1.2方法

1.2.1外植體消毒和接種。選取生長勢旺盛、強壯的植株，以花托和幼嫩的花莖為外植體。將外植體用洗衣粉清洗，流水沖洗30～40 min。在超凈工作臺上用75%乙醇將外植體浸泡30 s，再用 0.1%的氯化汞溶液消毒10 min。然后用無菌水沖洗3～5次后備用。在無菌培養(yǎng)皿上將花托切成小段，幼嫩花莖切成1 cm左右的莖段接種在愈傷組織誘導培養(yǎng)基中。

1.2.2愈傷組織誘導。采用MS基本培養(yǎng)基，利用不同濃度的6BA、NAA設計試驗，6BA的濃度為1.0、2.0、3.0、4.0 mg/L，NAA濃度為0.01、0.10 mg/L，共8個組合（）。添加蔗糖30 g/L、瓊脂5 g/L，pH 5.8。

將外植體消毒后，分別接種至6BA、NAA以上組合，每處理接種30甁外植體。

不同基本培養(yǎng)基及激素濃度配比對‘紫泉萱草愈傷組織誘導的影響

試驗號培養(yǎng)基類型∥mg/LNAA6BA不同外植體的愈傷誘導率∥﹪花托莖段10.011.028.0234.2520.012.067.0855.0630.013.018.0740.3140.014.08.0321.7750.101.022.0626.5460.102.014.0369.3270.103.025.1241.6980.104.05.3212.18

1.2.3不定芽誘導與增殖培養(yǎng)基篩選。采用MS基本培養(yǎng)基，利用6BA、NAA 2因素進行試驗設計，6BA的濃度為0.5、1.0、2.0 mg/L，NAA濃度為0.01、0.10 、0.50 mg/L，共9個組合（）。添加蔗糖30 g/L、瓊脂5 g/L，pH 5.8。

1.2.4生根培養(yǎng)。基本培養(yǎng)基采用1/2MS，NAA的濃度為0.1、0.2、0.3、0.4 mg/L。添加蔗糖30 g/L、瓊脂5 g/L，pH 5.8。14 d后統(tǒng)計生根率、生根數(shù)、根的長度等。

1.2.5試管苗煉苗及移栽。當甁苗的根長3～4 cm時，進行煉苗移栽。扦插前打開瓶蓋，在自然散射光條件下煉苗2～3 d，然后用鑷子小心地從培養(yǎng)瓶中取出苗，并用自來水沖掉粘在根上的培養(yǎng)基。而后移栽到蛭石、細河沙、草炭∶沙子=1∶1和蛭石∶珍珠巖=1∶1 4種不同基質中，溫室內保持溫度在20～25 ℃，相對濕度在80%左右，并用遮陰網遮陰，噴水2次/d，待幼苗挺直、葉片展開時，可去掉遮蔭網，28 d后調查不同煉苗天數(shù)和不同基質中試管苗的成活率及生長情況。

不同激素濃度配比對‘紫泉萱草不定芽誘導與增殖的影響

試驗號培養(yǎng)基類型∥mg/LNAA6BA接種愈傷

組織塊數(shù) 誘導出不定

芽塊數(shù)誘導率

2結果與分析

2.1愈傷組織的誘導選取‘紫泉萱草的花托及幼嫩的莖段作為外植體分別接種到8種培養(yǎng)基上?；ㄍ性诮臃N14 d后產生愈傷組織，愈傷組織呈淡綠色，形成瘤狀突起（），花托于MS+6BA ‘紫泉萱草花托誘導出的愈傷組織2.0 mg/L+ NAA0.01 mg/L培養(yǎng)基上誘導率較高，可見6BA濃度為2.0 mg/L，NAA濃度為0.01 mg/L的激素比例適合花托愈傷組織的產生。

幼嫩的莖段接種于培養(yǎng)基上20 d后，與培養(yǎng)基接觸部位開始膨大，30 d左右開始出現(xiàn)愈傷組織（），莖段在8種培養(yǎng)基中均能誘導出愈傷組織，但不同激素配比對愈傷組織的誘導率有很大影響，在MS+6BA2.0 mg/L+NAA0.1 mg/L培養(yǎng)基中的誘導率最高，說明莖段是初代培養(yǎng)較適宜的外植體，合適的激素濃度為6BA2.0 mg/L、NAA0.1 mg/L有利于誘導莖段產生愈傷組織。

‘紫泉萱草花莖誘導出的愈傷組織2.2不同激素濃度配比對‘紫泉萱草不定芽誘導與增殖的影響將上述誘導出的愈傷組織轉接到9種不定芽誘導培養(yǎng)基上，14 d后愈傷組織上可見不定芽，繼續(xù)培養(yǎng)，不定芽可長成具有明顯莖葉結構的小植株（圖 3）。將長至5 cm左右的小苗切下接種到生根培養(yǎng)基上生根，將帶有不定芽的愈傷組織切塊接種到分化培養(yǎng)基，不定芽可不斷增殖。

‘紫泉萱草愈傷組織分化不定芽由可知，‘紫泉萱草不定芽誘導與增殖得最佳激素配比為6BA濃度為2.0 mg/L，NAA濃度為0.1 mg/L。

2.3不同NAA濃度對‘紫泉萱草試管苗生根的影響從可以看出，不同NAA濃度對‘紫泉萱草生根情況的影響，所設置的4個濃度之間存在差異，生根率和根長均隨著NAA濃度增加而增加，當NAA濃度為0.1 mg/L時，雖然根有一定的長度，但生根率和平均根數(shù)較低，NAA濃度為0.2 mg/L與NAA濃度為0.3 mg/L各項指標之間差異均不顯著，當NAA濃度達到0.4 mg/L時生根率﹑平均根數(shù)和根長都達到較好狀態(tài)，綜上所述，適合‘紫泉萱草不定芽生根的培養(yǎng)基為1/2MS+NAA 0.4 mg/L（）。

2.4煉苗與移栽試驗表明，煉苗時間短，試管苗對外界環(huán)境不適應，嚴重影響了移栽成活率，試管苗煉苗1 d的移栽成活率極低，煉苗2、3 d的移栽成活率均達到90%以上，因此萱草試管苗煉苗時間應以2～3 d為宜。細河沙或蛭石∶草炭=1∶1較適合作為‘紫泉萱草的移栽基質。

（1）莖段和花托適合作為‘紫泉萱草組培快繁的外植體。

（2）‘紫泉萱草不同部位的外植體都可以以MS作為基本培養(yǎng)基使用，但不同外植體對激素配比的要求不同，這就要求根據(jù)不同類型的外植體配置不同的激素濃度，才能達到更好的培養(yǎng)效果。

參考文獻

[1] 高鳳，王雪.萱草引進新品種“Forgotten Dreams”的組織培養(yǎng)技術[J].江蘇農業(yè)科學，2012，40（8）：60-62.

[2] 何月秋，祝志勇.大花萱草新品種“御衣黃”組織培養(yǎng)及植株再生[J].江蘇林業(yè)科技，2011，38（3）：12-15.

[3] 姜風英，欒紹武.多倍體萱草“金娃娃”的離體培養(yǎng)研究[J].遼寧農業(yè)科學，2007（1）：51-52.

[4] 蘭麗婷，李沖，任爽英，等.萱草新品種組織再生體系的建立[J].東北林業(yè)大學學報，2011，39（4）：15-17.4