章立華 劉力 林小鳳等

摘要[目的]研究福建七葉蓮揮發(fā)油的化學成分，探討七葉蓮揮發(fā)油的抗炎鎮(zhèn)痛作用。[方法]采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)對七葉蓮揮發(fā)油的化學成分進行了分析，結(jié)合計算機檢索技術(shù)對分離的化合物進行鑒定，應用面積歸一法計算各成分的相對含量，采用醋酸扭體法、小鼠耳二甲苯致炎腫脹法評價七葉蓮揮發(fā)油的抗炎鎮(zhèn)痛效果。[結(jié)果]從七葉蓮部分揮發(fā)油中共分離出61種成分，并鑒定確認了其中53種主要成分，其中主要化合物和含量分別為4萜品醇20.40%、（-）-斯巴醇16.01%、氧化石竹烯8.90%等；七葉蓮揮發(fā)油可明顯減少小鼠醋酸所致的扭體次數(shù)，可明顯緩解小鼠二甲苯所致的耳廓腫脹。[結(jié)論]福建七葉蓮揮發(fā)油中主要含萜品烯、醇類化合物，且其揮發(fā)油具有明顯抗炎鎮(zhèn)痛作用。

關(guān)鍵詞七葉蓮；揮發(fā)油；氣相色譜-質(zhì)譜法；抗炎鎮(zhèn)痛作用

中圖分類號S567文獻標識碼A文章編號0517-6611（2014）23-07732-04

基金項目新疆醫(yī)科大學大學生創(chuàng)新基金（CX2014035，XJC2011117）。

作者簡介章立華（1987- ），男，江西南昌人，碩士研究生，研究方向：天然藥物的開發(fā)。*通訊作者，副教授，碩士，從事天然藥物化學研究。

收稿日期20140707七葉蓮（Schefflera arboricola Hayata），五加科鵝掌柴屬植物七葉蓮，別名小葉鴨腳木、漢桃葉、七葉爛、七葉藤、七加皮、狗腳蹄、沒骨消等，產(chǎn)于福建、臺灣、廣東等地，全年可采，以根、莖、葉入藥[1]。本品性苦味甘、祛風除濕、活血止痛，對三叉神經(jīng)痛、偏頭痛、各種癌癥及手術(shù)后的疼痛均有良好的療效?！吨袊幍洹罚ㄒ徊浚?977年版對七葉蓮有收載。近年來，一些學者對其藥理作用、植物化學成分開展了大量研究[2-3]，目前相關(guān)文獻報道七葉蓮中含有三萜皂苷、揮發(fā)油、油脂、黃酮及苷等[4] 。藥理研究表明該植物對中樞神經(jīng)系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)有較強作用，此外還具有抗腫瘤、抑制平滑肌收縮等作用[5-6]。筆者采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)[7-8]測定福建七葉蓮揮發(fā)油的化學成分，采用醋酸扭體法、小鼠耳二甲苯致炎腫脹法[9] 評價七葉蓮揮發(fā)油的抗炎鎮(zhèn)痛作用，為進一步研究七葉蓮揮發(fā)油的藥理作用提供理論依據(jù)。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1研究對象。試驗所用的七葉蓮采自泉州市清源山，經(jīng)華僑大學分子藥物學研究院副教授劉建福鑒定為七葉蓮（Schefflera arboricola Hayata）的莖、葉。

1.1.2主要儀器。GC/MS 聯(lián)用儀，TURBOMASSAUTOSYSTEM XL型（PE公司）；電子天平，AB135S（Mettler Toledo公司）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，RE5298A（上海亞榮生化儀器廠）；循環(huán)水式多用真空泵，SHBⅢS（鄭州長城科工貿(mào)有限公司）；三用恒溫水箱，HHW600（江蘇省金壇市醫(yī)療儀器廠）。

1.1.3主要試劑。二甲苯（批號20100126，沈陽市新化試劑廠生產(chǎn)）；角叉菜膠（批號G1013-05G，Sigma 公司產(chǎn)品）；吲哚美辛（批號840643，上海第十七制藥廠）；醋酸地塞米松（批號091105，浙江仙琚制藥股份有限公司）；其余試劑均為分析純。

1.2方法

1.2.1七葉蓮葉揮發(fā)油提取與分離。 取新鮮七葉蓮葉15 kg，水蒸汽蒸餾取餾出液，用乙醚萃取3 次，合并乙醚萃取液，減壓蒸餾回收乙醚，用無水硫酸鈉干燥24 h 后，過濾，得到具有特殊氣味的無色揮發(fā)油5.97 g。

1.2.2GC/MS 聯(lián)用儀條件。

1.2.2.1色譜條件。Supelcowax10 彈性石英毛細管柱，色譜柱長60 m，內(nèi)徑0.25 mm，分流進樣，分流比60∶1，進樣量0.25 μl，載氣氦氣（99.999%），載氣流速16 psi，流量1.09 ml/min。進樣口溫度240 ℃，初始柱溫65 ℃，以3.3 ℃/min的速率升至230 ℃，并保持10 min。

1.2.2.2質(zhì)譜條件。電離方式為EI，功率70 eV，光電倍增270 V，質(zhì)量掃描范圍35～500 u，掃描間隔0.2 s，電子能量70 eV；離子源200 ℃，接口溫度220 ℃，進樣量0.2 μl。工作站名稱Turbmass 4.1，標準質(zhì)譜庫NIST98，WILEY庫。

1.2.3揮發(fā)油的成分鑒定。用GCMS聯(lián)用儀進行全掃描分析；用化學工作站數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)檢NIST98圖譜庫進行譜圖解析并確認揮發(fā)油中各成分的化學結(jié)構(gòu)；利用該儀器所配的NIST98和Wiley7譜庫進行自動檢索，在對所得的譜圖進行人工核對和補充檢索，用面積歸一法測得各組分的百分含量。

1.2.4小鼠足趾測定裝置。根據(jù)毛細管放大法，用導管、活塞和移液管等自制而成。清潔級昆明種小鼠，雌雄兼用，體重20～22 g，購自福州市吳氏實驗動物中心，合格證號2007000516322。喂食鼠顆粒飼料和自來水，給藥前禁食12 h。

1.2.5醋酸扭體法鎮(zhèn)痛試驗。小鼠50只，雌雄各半，隨機分成5 組。陰性對照組給予2% 吐溫80溶液10 ml/kg，連續(xù)灌胃5 d；陽性對照組給予吲哚美辛溶液0.4 mg/kg，第4 天開始灌胃給藥；樣品組給予相應藥物，連續(xù)灌胃5 d。末次給藥后0.5 h，腹腔注射0.6% 醋酸溶液0.2 ml，用相機錄像（常規(guī)方法上改進，保證記錄時間的平行性），觀察并記錄小鼠15 min 的扭體反應次數(shù)，并計算扭體抑制率。

1.2.6對二甲苯誘發(fā)小鼠耳腫脹試驗。雄性小鼠50只，隨機分5組。陰性對照組給予2% 吐溫80 溶液10 ml/kg，連續(xù)灌胃給藥5 d；陽性對照組給予地塞米松溶液0.4 mg/kg，第4 天開始灌胃給藥；樣品組連續(xù)灌胃5 d。末次給藥后0.5 h，小鼠左耳正反面各注射二甲苯于10 μl 致炎，15 min 后脫臼致死，用直徑為8 mm 的打孔器沿左右耳片同一部位打下圓耳片，稱重，左右耳的重量差作為腫脹度，比較組間差異顯著性。其中，腫脹抑制率（%）=（對照組平均腫脹度-給藥組平均腫脹度）/對照組平均腫脹度×100%。

2結(jié)果與分析

2.1七葉蓮揮發(fā)油化學成分分析對七葉蓮揮發(fā)油氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)分析，得出七葉蓮揮發(fā)油成分GCMS總離子圖（）。從可以看出，各化合物分離效果較好，基線穩(wěn)定，雜峰小和無拖尾峰，共分離出61種化合物。各色譜峰相應的質(zhì)譜圖經(jīng)人工解析及計算機檢索，確定其化學結(jié)構(gòu)，共鑒定出53 種化合物，并用面積歸一化法測定出相對含量（）。由可見，從七葉蓮揮發(fā)油中共分離出61種化合物，53種化合物已經(jīng)鑒別出，其中4-萜品醇含量最高，占20.40%；其次是（-）-斯巴醇，占16.01%；氧化石竹烯占8.90%；里那醇占5.23%；其他化合物均低于5%。

2.2七葉蓮揮發(fā)油的抗炎鎮(zhèn)痛作用

2.2.1醋酸扭體法鎮(zhèn)痛試驗。按“1.2.5”試驗方法操作，結(jié)果表明（），與陰性對照比較，揮發(fā)油16 mg/kg 組可明顯減少小鼠的扭體次數(shù)（P<0.01），說明七葉蓮揮發(fā)油具有一定的抗炎鎮(zhèn)痛作用。

2.2.2對二甲苯誘發(fā)小鼠耳腫脹的影響。按“1.2.6”試驗方法操作，結(jié)果發(fā)現(xiàn)（），與陰性對照比較，揮發(fā)油16、8和4 mg/kg 組對二甲苯所致的急性炎癥均有明顯的抑制作用（P<0.01），且優(yōu)于陽性對照組。說明七葉蓮揮發(fā)油具有一定的抗炎鎮(zhèn)痛作用。安徽農(nóng)業(yè)科學2014年

七葉蓮葉揮發(fā)油對醋酸所致小鼠扭體反應的影響組別劑量∥mg/kg扭體次數(shù)∥次抑制率∥%陰性對照-55.6 ± 2.20陽性對照0.428.3 ± 4.8*49.1揮發(fā)油1627.0 ± 4.2*51.4揮發(fā)油840.1 ± 3.527.9揮發(fā)油442.8 ± 3.723.0注：*表示與陰性對照比較差異顯著（P<0.01）。

七

3結(jié)論與討論

采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)對七葉蓮揮發(fā)油的化學成分進行了分析，結(jié)合計算機檢索技術(shù)對分離的化合物進行鑒定，應用面積歸一法計算各成分的相對含量，采用醋酸扭體法、小鼠耳二甲苯致炎腫脹法評價七葉蓮揮發(fā)油的抗炎鎮(zhèn)痛效果。結(jié)果表明，從七葉蓮揮發(fā)油中共分離出61種成分，并鑒定確認了其中53種主要成分，其中主要化合物和含量分別為4-萜品醇20.40%、（-）-斯巴醇16.01%、氧化石竹烯8.90%等；七葉蓮揮發(fā)油可明顯減少小鼠醋酸所致的扭體次數(shù)，可明顯緩解小鼠二甲苯所致的耳廓腫脹。可見，福建七葉蓮揮發(fā)油中主要含萜品烯、醇類化合物，且其揮發(fā)油具有明顯抗炎鎮(zhèn)痛作用。

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（上接第7717頁）

有定向創(chuàng)造遺傳變異、優(yōu)良基因高效重組和聚合等優(yōu)點。通過轉(zhuǎn)基因、點突變等手段創(chuàng)造轉(zhuǎn)錄因子的超表達轉(zhuǎn)基因株系或突變體，可進一步解析其對抗逆相關(guān)基因的調(diào)控機理，為提高作物的抗逆性、培育新的抗逆品種奠定基礎。

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