曾憲遠(yuǎn)等

摘要：建立了采用高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀同時(shí)測(cè)定麻辣豆制品中非法添加的4種工業(yè)染料包括堿性橙2、堿性橙21、堿性橙22、堿性嫩黃O的檢測(cè)分析方法。樣品經(jīng)乙腈提取，中性氧化鋁固相萃取柱凈化，以乙腈和1%甲酸水為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，電噴霧負(fù)離子（ESI+）模式電離，超高效液相色譜-質(zhì)譜法（UPLC-MS/MS）測(cè)定。結(jié)果表明：4種工業(yè)染料的線性范圍在5～100μg/L，相關(guān)系數(shù)r2均優(yōu)于0.999。在此范圍內(nèi)加標(biāo)回收率為84.5%～105.6%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為1.4%～6.8%，堿性橙2、堿性橙21、堿性橙22、堿性嫩黃O的檢出限分別為1.5μg/kg、0.5μg/kg、0.5μg/kg、0.5μg/kg。該方法前處理簡單易操作，分析時(shí)間短，并且線性范圍寬，靈敏度高，檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確，可用于麻辣豆制品中上述4 種工業(yè)染料的同時(shí)測(cè)定及確證。

關(guān)鍵詞：超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜 麻辣豆制品 工業(yè)染料

中圖分類號(hào)：TS201.6 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1672-5336（2014）06-0039-02

隨著國內(nèi)人們生活水平的提高，人們的飲食越來越趨近于多樣化。麻辣豆制品，也在市場(chǎng)中占據(jù)了一席之地。某些不法商家為追求利潤，在麻辣豆制品中加入堿性橙、堿性嫩黃O等工業(yè)染料，從而使其色澤更加鮮亮，但這些工業(yè)染料對(duì)人體有一定的毒副作用。人們長期食用添加過工業(yè)染料的豆制品，會(huì)對(duì)身體健康帶來很大的安全隱患。國家、企業(yè)等相關(guān)單位對(duì)堿性橙2等工業(yè)染料檢測(cè)有相關(guān)的報(bào)道及方法標(biāo)準(zhǔn)[1-3]，但能同時(shí)對(duì)3種堿性橙和堿性嫩黃O進(jìn)行提取以及使用液相色譜質(zhì)譜定量檢測(cè)的方法還未見報(bào)道。

本研究建立了采用高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀同時(shí)測(cè)定麻辣豆制品中非法添加的4種工業(yè)染料包括堿性橙2、堿性橙21、堿性橙22、堿性嫩黃O的檢測(cè)分析方法，優(yōu)化了提取及凈化條件，可為市場(chǎng)上麻辣豆制品的檢測(cè)提供方法參考。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

標(biāo)準(zhǔn)品購置：堿性橙2（99.9%）；堿性橙21（99.9%）；堿性橙22（99.9%）；堿性嫩黃O（99.8%）；甲醇，乙腈均為色譜純；甲酸，分析純；C18柱；中性氧化鋁固相萃取柱及0.22μm有機(jī)濾膜均購于美瑞泰克科技（天津）有限公司。

液相色譜儀：島津LC-30系列，日本島津公司；質(zhì)譜儀：API 4000配有電噴霧離子源（ESI）及數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)，美國應(yīng)用生物系統(tǒng)公司；超純水機(jī)：美國Millipore公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

儲(chǔ)備液：準(zhǔn)確稱取堿性橙2、堿性橙21、堿性橙22、堿性嫩黃O標(biāo)準(zhǔn)品各0.1g（精確至 0.001g），用甲醇配制成濃度為1.0mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液，4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

工作液：儲(chǔ)備液用甲醇逐級(jí)稀釋，配制成系列工作液。

1.2.2 樣品制備

提取；稱取均質(zhì)好的豆制品5g置于100mL燒杯中，加人乙腈10mL，超聲提取10min，將提取液用濾紙過濾到圓底燒瓶中，再加人乙腈10mL，重復(fù)上述操作3次，合并提取液，轉(zhuǎn)移提取液過中性氧化鋁固相萃取柱，用少量乙腈沖洗殘?jiān)⑦^柱，定容至50mL，經(jīng)0.22μm 微孔濾膜過濾后用于UPLC-MS/MS測(cè)定。

1.2.3 色譜、質(zhì)譜條件

（1）液相色譜條件；色譜柱：Agilent ZORBAX SB-C18柱（4.6×150 mm×3.5μm）；柱溫為36℃；進(jìn)樣量為3μL；流動(dòng)相：1%甲酸水（A）-乙腈（B），梯度洗脫程序：0～1 min，90%A；1～5.0min，90%～10%A；5.0～8min，90%A；流速為0.5mL/min。

（2）質(zhì)譜條件；電噴霧離子源（ESI+）；離子源溫度（TEM）為500℃；霧化氣（GS1）為60psi；碰撞氣（CAD）為 8psi；氣簾氣（CUR）為24psi；輔助加熱器（GS2）為60psi；噴霧電壓（IS）為5500V。

2 結(jié)果與討論

2.1 提取與凈化條件的優(yōu)化

2.1.1 提取溶劑的選擇

由于4種工業(yè)染料均溶于醇、水等多種溶劑，分別以甲醇、乙腈和水三種試劑進(jìn)行提取。結(jié)果表明，以乙腈作為提取溶劑時(shí)，4種組分的回收率均可達(dá)85%以上，并且雜質(zhì)干擾較少，故最終選定乙腈作為提取試劑。

2.1.2 凈化條件的選擇

為了減少油脂等雜質(zhì)對(duì)目標(biāo)物分離的干擾，對(duì)提取液進(jìn)行了固相萃取柱凈化。比較了C18柱和中性氧化鋁固相萃取柱的凈化效果，結(jié)果表明中性氧化鋁固相萃取柱去除油脂等雜質(zhì)的效果更好，故選定中性氧化鋁固相萃取柱作為凈化柱。

2.2 質(zhì)譜條件的優(yōu)化

本實(shí)驗(yàn)首先采用1μg/mL的混標(biāo)溶液，以蠕動(dòng)泵樣方式在電噴霧正離子模式下進(jìn)行母離子全掃描，找出準(zhǔn)確的分子離子作為母離子，然后以分子離子為母離子對(duì)其子離子進(jìn)行全掃描，最后選取豐度較強(qiáng)的2個(gè)子離子，優(yōu)化其錐孔電壓、碰撞能量等質(zhì)譜參數(shù)，選取豐度較大并且響應(yīng)穩(wěn)定的來做定量離子。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)圖譜

在色譜質(zhì)譜條件下，堿性橙2、堿性橙21、堿性橙22、堿性嫩黃O的保留時(shí)間分別是3.93min、2.47min、3.13min、2.15min，標(biāo)準(zhǔn)樣品圖譜具體見圖1。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線、線性范圍及檢出限

在確定的色譜條件下對(duì)質(zhì)量濃度為0，5，10，20，50，100，200，400μg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)品分別進(jìn)行測(cè)定，以各組分的峰面積（Y）對(duì)其質(zhì)量濃度（X，μg/L）進(jìn)行線性回歸。4種標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)在5～100μg/L范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)均可達(dá)到0.999以上。以信噪比S/N=5計(jì)算4種標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的檢測(cè)限，具體數(shù)據(jù)見表1。

2.5 回收率及精密度分析

在市場(chǎng)上購買的13種品牌麻辣豆制品樣品中添加20、50、100μg/L的混合標(biāo)物，經(jīng)上述方法提取、凈化處理后進(jìn)行UPLC-MS/MS測(cè)定。結(jié)果表明：在此色譜條件下能很好的將4種目標(biāo)物質(zhì)分離。本研究按測(cè)量值和真實(shí)值計(jì)算回收率，5次重復(fù)計(jì)算變異系數(shù)，檢測(cè)結(jié)果表明：13種樣品中堿性橙2、堿性橙21、堿性橙22、堿性嫩黃O的本底值均為0mg/kg，4種標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的平均回收率在84.5%～105.6%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為1.4%～6.8%，滿足回收率與精密度的要求。

3 結(jié)語

通過提取樣品，固相萃取柱凈化、超高效液相色譜分離和串聯(lián)四極桿質(zhì)譜檢測(cè)，建立了麻辣豆制品中4種工業(yè)染料包括對(duì)堿性橙2、堿性橙21、堿性橙22、堿性嫩黃O檢測(cè)的UPLC-MS/MS方法。該方法前處理簡單易操作，分析時(shí)間短，并且線性范圍寬，靈敏度高，檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確，可用于麻辣豆制品中上述4種非法添加工業(yè)染料的同時(shí)測(cè)定及確證。

參考文獻(xiàn)

[1]GB/T 23496-2009食品中禁用物質(zhì)的檢測(cè)，堿性橙染料 高效液相色譜法.中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn).

[2]楊琳，陳青俊等.高效液相色譜法測(cè)定食品中3種堿性橙含量[M].理化檢驗(yàn)-化學(xué)分冊(cè)，2011，47（5）：768-770.

[3]DB35T 897-2009食品中堿性橙、堿性嫩黃O和堿性桃紅T含量的測(cè)定.福建省地方標(biāo)準(zhǔn).