高婧宇梁克偉李鵬飛王天華賈士友鄒廣發(fā)

（1 大慶市公安局刑事技術(shù)支隊(duì) 黑龍江 大慶 163000；2 中國(guó)刑警學(xué)院 遼寧 沈陽(yáng) 110035；3 蘇州市公安局刑警支隊(duì) 江蘇 蘇州 210000）

“502”膠顯現(xiàn)指紋后對(duì)脫落細(xì)胞DNA提取的影響研究

高婧宇1梁克偉2李鵬飛3王天華1賈士友1鄒廣發(fā)1

（1 大慶市公安局刑事技術(shù)支隊(duì) 黑龍江 大慶 163000；2 中國(guó)刑警學(xué)院 遼寧 沈陽(yáng) 110035；3 蘇州市公安局刑警支隊(duì) 江蘇 蘇州 210000）

探討“502”膠對(duì)指紋脫落細(xì)胞DNA檢驗(yàn)的影響。對(duì)60份不同材質(zhì)上指紋捺印樣本進(jìn)行DNA檢驗(yàn)并比較數(shù)據(jù)結(jié)果。不同材質(zhì)上指紋捺印樣本經(jīng)過(guò)“502”熏顯后采用M48磁珠提取法仍可獲得STR分型?！?02”膠未對(duì)檢材的DNA含量及檢出有顯著影響。

“502”膠 指紋 M48磁珠法 DNA提取

人類(lèi)的指紋終生不變，沒(méi)有兩個(gè)完全相同的指紋，是世界上公認(rèn)的也是最重要的個(gè)體特征之一，被廣泛應(yīng)用于刑事偵查和保密工作之中。非滲透性客體上很容易獲得指紋，但是完整的指紋因?yàn)楸４鏃l件不同有時(shí)停留時(shí)間很短，往往得到的是不完整的指紋，給技術(shù)工作帶來(lái)困難。

人類(lèi)的DNA分析是將分子生物學(xué)方法應(yīng)用于法醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，對(duì)案件所涉及的生物檢材的DNA進(jìn)行分型，達(dá)到個(gè)人識(shí)別或親子鑒定的目的?，F(xiàn)代研究顯示：由于摩擦、接觸，指紋中也存在脫落細(xì)胞，也可以獲得指紋的DNA分型結(jié)果。指紋的承受客體一般分為滲透性、非滲透性、半滲透性客體。非滲透性客體表面的汗液手印的顯現(xiàn)常應(yīng)用“502”膠顯現(xiàn)技術(shù)?！?02”膠是一種瞬間黏合劑，主要成分是α-氰基丙烯酸乙酯?！?02”膠在常溫下易揮發(fā)，遇到汗液手印時(shí)，在水、氨基酸及弱堿的引發(fā)下，可以進(jìn)行單體聚合，在手印紋線上形成白色固體狀聚合物，從而將手印顯現(xiàn)出來(lái)。該熏顯方法對(duì)某些半滲透性客體上的手印顯現(xiàn)也適用。常用顯現(xiàn)方法有冷熏法、加熱熏顯法、真空熏顯法。

在實(shí)踐工作中公安技術(shù)人員常常陷入兩難的境界，顯示指紋又怕提不了DNA，先提DNA又破壞了指紋。本實(shí)驗(yàn)采用Chelex-100法及M48磁珠法分別進(jìn)行前期提取，研究非滲透性客體表面的指紋經(jīng)“502”膠顯現(xiàn)后是否對(duì)DNA的檢出造成影響。

1 材料與方法

1.1 樣本

非滲透性客體——塑料薄膜上指紋捺印樣本30份，半滲透性客體——紙張上指紋捺印樣本30份，各取15份經(jīng)公安部物證二所的AFC-1L型502自動(dòng)熏顯柜加溫加濕熏顯后備檢，其余各15份不做熏顯原物備檢。

1.2 主要試劑與儀器設(shè)備

5%Chelex-100溶液；2mg/ml蛋白酶K溶液；M48磁珠 DNA提取試劑盒 （德國(guó) QIAGEN）；Identifiler?Plus Kit試劑盒（美國(guó)ABI公司）；9700型擴(kuò)增儀（美國(guó)ABI公司）；3130XL型基因分析儀（美國(guó)ABI公司）。

1.3 方法

每份檢材取相同兩份，分別放入0.5ml和1.5ml的離心管中，分別用Chelex-100法和M48磁珠法提取模板DNA。

1.3.1 Chelex-100法

每個(gè)樣本離心管加入5%Chelex-100溶液30μL和2mg/ml的蛋白酶K溶液10μL，56℃孵育2小時(shí)（期間震蕩多次）；漩渦震蕩10s；13000r/min離心3min；4℃保存待擴(kuò)增用。

1.3.2 M48磁珠法

每個(gè)樣本離心管加入190μL 190裂解液G2和10μL蛋白酶 K溶液 （10mg/ml），漩渦震蕩10s，56℃孵育2小時(shí)（期間震蕩多次）；13000r/min離心5min；轉(zhuǎn)移200μL上清到1.5ml樣品管中；加入1mlMTL和30μL磁珠，混勻，置于搖勻架上搖勻吸附 15min；磁力架吸附磁珠，棄上清；加入500μLMW1溶液搖勻，磁力架吸附磁珠去上清；加入500μL80%的乙醇溶液搖勻，磁力架吸附磁珠去上清；重復(fù)80%乙醇洗滌3次，磁力架吸附磁珠棄上清；將離心管開(kāi)蓋置于65℃加熱塊上烘干；加入20μL超純水混勻磁珠，65℃加熱10min，期間震蕩2～3次；將離心管置于磁力架上吸附磁珠，取上清液置于新管中4℃保存待擴(kuò)增用。

圖1 “502”熏顯后的檢材樣本DNA分型

圖2 未熏顯的檢材樣本DNA分型

1.3.3 STR擴(kuò)增及產(chǎn)物檢測(cè)

將上述兩種方法提取的模板DNA分別取適量DNA，用Identifiler?Plus Kit試劑，10μL PCR反應(yīng)體系進(jìn)行擴(kuò)增，用3130XL型基因分析儀進(jìn)行STR分型。

2 結(jié)果與討論

2.1 結(jié)果

未經(jīng)“502”熏顯的塑料薄膜及紙張上的指紋檢材Chelex-100法均未獲得STR分型，M48磁珠法均可獲得STR分型；經(jīng)過(guò)“502”熏顯的塑料薄膜及紙張上的指紋檢材Chelex-100法均未獲得STR分型，M48磁珠法均可獲得STR分型。

2.2 討論

通過(guò)實(shí)驗(yàn)可見(jiàn)，對(duì)于本次實(shí)驗(yàn)所選的非滲透客體和半滲透性客體上的指紋捺印樣本，無(wú)論是否經(jīng)過(guò)熏顯，Chelex-100法均無(wú)法獲得STR分型，而M48磁珠法均能夠獲得STR分型。由此可見(jiàn)，Chelex-100法不適用于提取量小體微的指紋檢材，該類(lèi)檢材可考慮使用M48磁珠法提取，并在復(fù)合擴(kuò)增時(shí)適當(dāng)調(diào)整模板DNA的用量及體系以獲得較好的分型數(shù)據(jù)。從圖譜的峰值結(jié)果來(lái)看，經(jīng)“502”熏顯后的檢材樣本DNA的含量較未經(jīng)熏顯的沒(méi)有顯著差異，均能獲得理想的STR分型，“502”膠未對(duì)檢材的DNA含量及檢出造成影響。

在實(shí)際辦案的現(xiàn)場(chǎng)勘查及物證檢驗(yàn)過(guò)程中，“502”膠顯現(xiàn)技術(shù)是運(yùn)用的十分廣泛的一種熏顯技術(shù)，尤其對(duì)于非滲透性客體及半滲透性客體，但如果得到的指紋是凌亂、重疊的，便無(wú)法利用痕跡檢驗(yàn)技術(shù)比對(duì)嫌疑人，通過(guò)本實(shí)驗(yàn)對(duì)經(jīng)“502”膠顯現(xiàn)后指紋樣本檢驗(yàn)的驗(yàn)證，經(jīng)過(guò)“502”熏顯的指紋樣本仍可以考慮通過(guò)DNA檢驗(yàn)獲得STR分型，利用DNA數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)嫌疑人或認(rèn)定嫌疑人，固定證據(jù)鏈，充分利用DNA靶向性作用，最大限度利用物證，發(fā)揮破案作用。

[1]鄭秀芬.法醫(yī)DNA分析[M].北京：中國(guó)人民公安大學(xué)出版社，2002.

[2]張書(shū)杰.痕跡檢驗(yàn)學(xué)[M].北京：中國(guó)人民公安大學(xué)出版社，2007.

（責(zé)任編輯：于 萍）

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A

2013-12-19

公安部應(yīng)用創(chuàng)新計(jì)劃項(xiàng)目（編號(hào)：2011YYCXXJXY122）。

高靖宇（1985-），女，黑龍江大慶人，大慶市公安局刑事技術(shù)支隊(duì)法醫(yī)師，本科，主要從事法醫(yī)物證檢驗(yàn)的研究。