倪昕曄，李愛軍，鐘 萍，林 濤，熊信柏，顧衛(wèi)東

（1上海大學(xué) 材料科學(xué)與工程學(xué)院，上海200444；2南京醫(yī)科大學(xué) 附屬常州第二人民醫(yī)院，江蘇 常州213003；3南京航空航天大學(xué) 材料科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，南京210016；4深圳大學(xué) 材料學(xué)院，廣東 深圳518060）

碳是組成有機(jī)物質(zhì)的主要元素之一，更是構(gòu)成人體的重要元素［1］，碳材料已在心臟瓣膜、骨骼、齒根、血管、肌腱等諸多人工材料方面獲得應(yīng)用和發(fā)展。C／C復(fù)合材料克服了單一碳材料的脆性，具有高強(qiáng)度、高韌性、耐腐蝕、耐高溫等優(yōu)點(diǎn)［2，3］，C／C復(fù)合材料是以炭纖維增強(qiáng)炭基體的新型復(fù)合材料，是一種極有潛力的新型生物醫(yī)用材料。C／C復(fù)合材料彈性模量與人骨相當(dāng)，是具有良好應(yīng)用前景的人工關(guān)節(jié)、骨假體材料［4］，過去常關(guān)注的是C／C復(fù)合材料表面炭顆粒的脫落和表面改性［5－8］，但國內(nèi)外對(duì)于醫(yī)用C／C復(fù)合材料制備的報(bào)道較少，從采購原材料到生產(chǎn)C／C復(fù)合材料整個(gè)過程未能嚴(yán)格按照醫(yī)用標(biāo)準(zhǔn)，目前C／C復(fù)合材料大多來源于航空航天領(lǐng)域［9］，含有各種雜質(zhì)甚至有毒元素，如何在制備過程中消除或減少有毒元素從而使C／C復(fù)合材料生物相容性較好，是生物材料領(lǐng)域遇到的難題之一。過去對(duì)C／C復(fù)合材料的毒性進(jìn)行了研究，一般認(rèn)為毒性較小或無毒［10］，這可能與實(shí)驗(yàn)材料的選取、實(shí)驗(yàn)方法有關(guān)，過去評(píng)價(jià)生物相容性常用的方法是細(xì)胞在植入物浸提液環(huán)境中培養(yǎng)，而不是直接在植入物表面培養(yǎng)［11］。本研究通過不同工藝化學(xué)氣相浸滲法（Chemical Vapor Infiltration，CVI）制備含有不同成分的C／C復(fù)合材料，來分析在其表面人顱骨成骨細(xì)胞的生長情況。這種利用C／C復(fù)合材料耐高溫特點(diǎn)來延長高溫處理時(shí)間，以減少或去除C／C復(fù)合材料的有毒物質(zhì)未見相關(guān)報(bào)道。

1 實(shí)驗(yàn)

1.1 C／C復(fù)合材料制備及成分檢測(cè)

通過CVI方法制備2.5維PAN基的C／C復(fù)合材料，預(yù)制體原始基體密度為0.5g／cm3，把碳?xì)浠衔餁怏w通入CVI爐中，制得1.3g／cm3的C／C復(fù)合材料，經(jīng)2800～3200℃石墨化處理4h。在此基礎(chǔ)上繼續(xù)熱解炭沉積，制得密度為1.5g／cm3的C／C復(fù)合材料，再石墨化處理4h。進(jìn)一步熱解炭沉積，得到1.7g／cm3的C／C復(fù)合材料，再石墨化處理4h或8h。

制備得到密度分別為1.3，1.5，1.7g／cm3的 C／C復(fù)合材料，其中1.7g／cm3的C／C復(fù)合材料分為兩種不同熱處理時(shí)間得到的材料。材料高溫石墨化累計(jì)時(shí)間分 別 為 4（1.3g／cm3），8（1.5g／cm3），12（1.7g／cm3），16（1.7g／cm3）h。將4種 C／C復(fù)合材料切割成10mm×10mm×2mm的植入樣品各24個(gè)，表面用360＃，600＃，1200＃砂紙依次進(jìn)行打磨，以消除材料密度差異引起的表面粗糙度對(duì)成骨細(xì)胞生長的影響［4］，依次用無水乙醇、雙蒸餾水進(jìn)行超聲清洗3次，再進(jìn)行高溫消毒。

用Vista－AX型等離子體發(fā)射光譜儀對(duì)這4種C／C復(fù)合材料進(jìn)行成分檢測(cè)。

1.2 成骨細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)

把C／C復(fù)合材料放入24孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，每孔加入含有2×104個(gè)／m L的人顱骨成骨細(xì)胞的培養(yǎng)基1m L，培養(yǎng)基為RPMI1640和DMEM混合液，讓細(xì)胞自然沉落在C／C復(fù)合材料表面，5h后吸取培養(yǎng)基，將PBS加入每孔中，并清洗C／C復(fù)合材料樣品表面，再把表面黏附有成骨細(xì)胞的C／C復(fù)合材料移到新的24孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，加培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，分4個(gè)時(shí)間段進(jìn)行觀察，依次為2，4，6，8天進(jìn)行比較。每個(gè)試驗(yàn)材料每個(gè)時(shí)間段有6塊C／C復(fù)合材料，其中5塊進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，用胰酶把細(xì)胞從材料表面沖洗下來，并在PBS中重懸，采用九宮格細(xì)胞計(jì)數(shù)，測(cè)量每小格中的細(xì)胞數(shù)，再換算成每塊材料表面總的細(xì)胞數(shù)，取平均值，用SPSS 11.0軟件多組均數(shù)比較的方差分析各組細(xì)胞數(shù)之間的差異。另一塊進(jìn)行熒光顯微鏡觀察，首先使用PBS清洗材料表面，體積分?jǐn)?shù)10%甲醛室溫進(jìn)行固定15min，再用5μg／m L的碘化丙啶（PI，SIGMA 公司）進(jìn)行熒光染色15min，最后用抗熒光淬滅液封片，采用OLYMLUSIX71型倒置熒光顯微鏡進(jìn)行觀察并拍攝照片。

2 結(jié)果與討論

2.1 成分測(cè)量結(jié)果

用等離子體發(fā)射光譜儀對(duì)C／C復(fù)合材料檢測(cè)，共檢測(cè)了17種金屬元素，分別是 Na，Mg，K，Ca，Mn，F(xiàn)e，Cu，Zn，Ni，Pd，Ti，Al，Cr，Cd，Hg，Pb，As等，由于在4種材料中都沒有發(fā)現(xiàn)Pd和Cu，故未在表1中標(biāo)出。為了便于比較，將密度為1.3，1.5，1.7（12h），1.7g／cm3（16h）的C／C復(fù)合材料分別稱為 A，B，C，D型C／C復(fù)合材料。通過比較 Na，Mg，Al，K，Ca，Ti，Cr，Mn，F(xiàn)e，Ni，Cd，Hg等的含量大小依次為 A＞B＞C＞D，C，B，D材料不含有Zn，As，Pb；A，B材料 Hg的含量分別是C的12，15倍，是D材料的44，52倍；A，B材料Al的含量分別是C的5，20倍，是D材料的15，68倍；A，B材料Cd的含量分別是C和D的2，3倍。

表1 C／C復(fù)合材料雜質(zhì)含量（mg·kg－1）Table 1 Impurities content of carbon／carbon composites（mg·kg－1）

2.2 成骨細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)結(jié)果

圖1 C／C復(fù)合材料表面細(xì)胞增殖數(shù)Fig.1 Cell proliferation number on the surface of carbon／carbon composites

成骨細(xì)胞在C，D復(fù)合材料表面生長良好，細(xì)胞數(shù)隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長而增加，符合細(xì)胞的生長規(guī)律；而成骨細(xì)胞在A，B復(fù)合材料表面生長狀況差，如圖1所示，在C，D材料表面，成骨細(xì)胞數(shù)量隨著時(shí)間的延長而快速增長，到8天時(shí)細(xì)胞數(shù)量達(dá)到19500個(gè)左右。在A，B材料表面，成骨細(xì)胞數(shù)量在2，4天時(shí)增殖緩慢，在6天時(shí)A，B材料表面細(xì)胞數(shù)量只有150個(gè)左右，到8天時(shí)A，B材料表面細(xì)胞數(shù)量略有增加。

C，D與A，B的實(shí)驗(yàn)結(jié)果經(jīng)SPSS11.0軟件多組均數(shù)比較的方差分析，P＜0.05，有顯著性差異，C與D結(jié)果之間，P＞0.05，無顯著性差異。從熒光顯微鏡觀察結(jié)果分析，第2天（見圖2），C，D復(fù)合材料表面成骨細(xì)胞數(shù)量多，呈梭形形狀，甚至能看到偽足的伸出，核染色明亮；B復(fù)合材料表面成骨細(xì)胞數(shù)量少，呈圓形，部分呈梭形，核染色不明亮；A復(fù)合材料表面成骨細(xì)胞數(shù)量少，形態(tài)呈圓形。第8天（見圖3），C，D復(fù)合材料表面成骨細(xì)胞多，由于連成一片，因此不能清晰識(shí)別細(xì)胞的形狀；B復(fù)合材料表面成骨細(xì)胞數(shù)量少，細(xì)胞體積大，大部分細(xì)胞形態(tài)呈圓形 ，一小部分細(xì)胞呈梭形；A復(fù)合材料表面成骨細(xì)胞細(xì)胞數(shù)量少，細(xì)胞體積大，形態(tài)呈圓形。

圖2 C／C復(fù)合材料表面成骨細(xì)胞第2天熒光顯微圖（a）1.3g／cm3；（b）1.5g／cm3；（c）1.7g／cm3，12h；（d）1.7g／cm3，16hFig.2 Fluorescence microscopy map of osteoblasts on the surface of carbon／carbon composites in the second day（a）1.3g／cm3；（b）1.5g／cm3；（c）1.7g／cm3，12h；（d）1.7g／cm3，16h

2.3 討論

成骨細(xì)胞在C復(fù)合材料生長良好，細(xì)胞數(shù)隨著時(shí)間的延長而增加，符合細(xì)胞的生長規(guī)律，C與D表面的細(xì)胞增殖數(shù)量沒有差異，而成骨細(xì)胞在A，B復(fù)合材料生長狀況差。

由于在細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)前對(duì)4種植入物表面進(jìn)行了表面打磨處理，消除了粗糙度的影響因素，因此影響細(xì)胞增殖的只有C／C復(fù)合材料本身因素即微量元素含量。

圖3 C／C復(fù)合材料表面成骨細(xì)胞第8天熒光顯微圖（a）1.3g／cm3；（b）1.5g／cm3；（c）1.7g／cm3，12h；（d）1.7g／cm3，16hFig.3 Fluorescence microscopy map of osteoblasts on the surface of carbon／carbon composites in the eighth day（a）1.3g／cm3；（b）1.5g／cm3；（c）1.7g／cm3，12h；（d）1.7g／cm3，16h

由表1可見，4種材料中Cu，Pd都沒有檢出，故不考慮其影響。在人體中元素的含量占體重質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.01%以上的稱為常量元素，Na，Mg，K，Ca等是常量元素，故不考慮其毒性。在人體中元素的含量占體重質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.01%以下的稱為微量元素，F(xiàn)e，Mn，Zn，Ni，Cr等是人體必需微量元素，F(xiàn)e，Mn，Zn，Ni在4種材料中的數(shù)量級(jí)較小，因此不考慮其對(duì)成骨細(xì)胞的毒性，Cr含量過高，會(huì)對(duì)機(jī)體和細(xì)胞產(chǎn)生毒性，Cr在水中通常以Cr6＋和Cr3＋兩種形式存在，Cr3＋參與糖的代謝和防止人患冠狀動(dòng)脈粥樣硬化癥可能性，Cr6＋和Cr3＋過量攝入對(duì)人體都有害，過高的Cr3＋會(huì)明顯抑制成骨細(xì)胞生長［12］，通常認(rèn)為 Cr6＋危害更大，Cr6＋會(huì)穿過細(xì)胞膜還原成穩(wěn)定的Cr3＋，同時(shí)產(chǎn)生四價(jià)、五價(jià)鉻及產(chǎn)生強(qiáng)氧化作用，這些都會(huì)造成對(duì)細(xì)胞脫氧核糖核酸（DNA）的損傷［13］，影響細(xì)胞的增殖。Ti元素化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，已證明其有優(yōu)異的生物相容性。4種材料中Al，Cd，Hg，Pb，As等這些元素為人類非必須微量元素，有可能對(duì)成骨細(xì)胞造成毒性傷害。

Cd有致畸、致突變、致癌作用，Koizumi等認(rèn)為Cd能使DNA損傷，引起DNA的單鏈斷裂［14］。復(fù)旦大學(xué)錢海雷研究認(rèn)為Cd直接作用于成骨細(xì)胞，使骨特異性堿性磷酸酶（b－ALP）顯著下降，而這種磷酸酶對(duì)骨的礦化有重要的作用；同時(shí)研究還認(rèn)為鎘會(huì)影響膠原的代謝［15］。Hg可與細(xì)胞膜上的巰基結(jié)合，使細(xì)胞膜通透改變，引起細(xì)胞膜功能的障礙，從而影響生化反應(yīng)和細(xì)胞功能；Hg還可作用于線粒體，使其釋放細(xì)胞色素C等蛋白，與細(xì)胞質(zhì)中的凋亡蛋白酶激活因子，從而誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。Pb進(jìn)入人體后數(shù)周，主要沉積于骨骼和頭發(fā)［16］，影響成骨細(xì)胞的鈣磷代謝，Pb甚至可代替鈣來激活鈣通道，激活蛋白激酶，產(chǎn)生異常的鈣信號(hào)，干擾細(xì)胞的功能；Pb可抑制堿性磷酸酶（ALP）的活性，影響成骨細(xì)胞的增殖［17］。As是一種細(xì)胞原漿毒，與含巰基的酶結(jié)合，使酶失去活性，影響細(xì)胞的生物氧化過程，從而干擾細(xì)胞能量代謝等。Al攝入過多，會(huì)沉積在骨中，通過鈣化組織中的磷、鈣以及與維生素D相互作用，干擾骨磷酸酶產(chǎn)生，從而抑制成骨細(xì)胞生長；Al還有很強(qiáng)的神經(jīng)毒性、生殖毒性等［18］。胡曉磐等將 Hg，Cd，Pb聯(lián)合染毒與單獨(dú)染毒對(duì)比發(fā)現(xiàn)，對(duì)小鼠淋巴細(xì)胞的DNA損傷更強(qiáng)，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但有意思的是Hg與Pb，Hg與Cd聯(lián)合染毒與單獨(dú)染毒對(duì)DNA損傷沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異［19］。

目前對(duì)骨科植入物有毒或有可能致毒金屬元素的含量沒有一個(gè)明確的規(guī)定，更多參考的是藥物或食品安全標(biāo)準(zhǔn)對(duì)金屬的要求［20，21］。中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理化委員會(huì)制定的外科植入物用不銹鋼（GB 4234—2003）標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定：Cu的質(zhì)量分?jǐn)?shù)應(yīng)≤0.5%、Mn的質(zhì)量分?jǐn)?shù)應(yīng)≤2%，而對(duì)Cr的質(zhì)量分?jǐn)?shù)定在17%～19%，這些規(guī)定更多的是考慮提高冶煉工藝［22］。中華人民共和國藥典2010年版一部規(guī)定：Pb，Cd，As，Hg，Cu的含量分別不超過5，0.3，2，0.2，20mg／kg［23］。同時(shí)中華人民共和國藥典2010年版二部也規(guī)定Cr的含量不得超過2mg／kg。因此在Cr的含量規(guī)定來看，中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理化委員會(huì)制定的外科植入物用不銹鋼（GB 4234—2003）標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定和中華人民共和國藥典2010年版相差較遠(yuǎn)，有可能前一個(gè)是考慮的植入物，后一個(gè)考慮的是口服藥。參照中華人民共和國藥典2010年版一部規(guī)定，A，B，C，D復(fù)合材料Cr的含量都是超標(biāo)的，分別超標(biāo)101，46，18，6倍，但按照中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理化委員會(huì)制定的外科植入物用不銹鋼（GB 4234—2003）又是符合要求的，因此在Cr的含量規(guī)定方面今后是需要更多研究的。世界衛(wèi)生組織和聯(lián)合國糧農(nóng)組織（WHO／FAO）將Al作為食品污染物加以控制，規(guī)定Al攝入量為每千克每周7mg／kg的標(biāo)準(zhǔn)。也有規(guī)定70kg體重的人每天 Al，Cu，Cr，Pb，Cd的攝入量不超過5，2.5，0.2，0.415，0.057mg［20］。參照中華人民共和國藥典2010年版規(guī)定，除Cr外，C，D復(fù)合材料是符合規(guī)定的，B復(fù)合材料Hg含量超標(biāo)，超過標(biāo)準(zhǔn)11倍，A復(fù)合材料Hg含量超標(biāo)，超過標(biāo)準(zhǔn)13倍。但是植入物與藥物、食物含有的金屬相比較，還要考慮金屬物質(zhì)從C／C復(fù)合材料溶出率的因素，即某種金屬物質(zhì)在一定時(shí)間段從C／C復(fù)合材料溶出的數(shù)量［24］。

從以上分析看，A，B C／C復(fù)合材料表面成骨細(xì)胞生長差的原因與其含有的有毒金屬物質(zhì)超標(biāo)是有關(guān)的，特別是Hg含量，但是也要考慮每一種物質(zhì)雖然沒有超標(biāo)、但是幾種物質(zhì)聯(lián)合的協(xié)同毒性作用［19］。A，B C／C復(fù)合材料有毒金屬物質(zhì)含量高與其制造工藝有關(guān)，因?yàn)樵谠蓟w密度為0.5g／cm3到1.3g／cm3的C／C復(fù)合材料（A）制作中，密度增加了0.8g／cm3，但是2800～3200℃進(jìn)行石墨化處理4h不能把有毒金屬物質(zhì)全部氣化；1.3g／cm3C／C復(fù)合材料（A）到1.5g／cm3C／C復(fù) 合 材 料 （B），密 度 只 增 加 了 0.2g／cm3，2800～3200℃石墨化再處理4h累計(jì)高溫處理8h（即原始1.3g／cm3C／C復(fù)合材料部分高溫處理累計(jì)8h，新增的0.2g／cm3C／C復(fù)合材料高溫處理處理4h）；1.7g／cm3（C）同樣道理，高溫累積處理12h（即原始1.3g／cm3C／C復(fù)合材料部分高溫處理累計(jì)12h，第一次新增的0.2g／cm3C／C復(fù)合材料高溫處理累計(jì)8h，第二次新增的0.2g／cm3C／C 復(fù)合材料處理 4h）；1.7g／cm3（D）高溫處理累計(jì)16h。由于在C／C復(fù)合材料基體制造過程中、碳?xì)錃怏w的純度等原因造成C／C復(fù)合材料含有各種雜質(zhì)。Al的熔點(diǎn)為660℃、沸點(diǎn)2467℃，Cr的熔點(diǎn)為1857℃、沸點(diǎn)2672℃，Cd的熔點(diǎn)為320℃、沸點(diǎn)765℃，Pb的熔點(diǎn)為327℃、沸點(diǎn)1740℃，Hg的沸點(diǎn)356℃，都低于 C／C復(fù)合材料4100℃的熔點(diǎn)，因此利用C／C復(fù)合材料耐高溫的特點(diǎn)可以把其含有的金屬物質(zhì)溶解、甚至氣化，達(dá)到祛除有毒金屬元素物質(zhì)的目的。隨著高溫?zé)崽幚頃r(shí)間的延長（從12～16h），C／C復(fù)合材料上的雜質(zhì)含量繼續(xù)減少，但不能提高成骨細(xì)胞的生長數(shù)量，兩者C／C復(fù)合材料表面成骨細(xì)胞形貌相似，由于高溫?zé)崽幚淼某杀据^高，因此認(rèn)為12h為最佳的高溫?zé)崽幚頃r(shí)間。

第8天時(shí)，A，B兩者材料表面細(xì)胞數(shù)都較少，A材料表面細(xì)胞數(shù)（700個(gè)左右）大于B材料表面細(xì)胞數(shù)（300個(gè)左右），但B復(fù)合材料中元素含量均低于A，產(chǎn)生這種現(xiàn)象的原因有可能細(xì)胞受到材料毒性一段時(shí)間刺激后，細(xì)胞產(chǎn)生一定的增殖反應(yīng)。但對(duì)于整個(gè)實(shí)驗(yàn)來說（C材料表面19500個(gè)細(xì)胞數(shù)），300與700個(gè)細(xì)胞數(shù)量造成的差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

本研究依據(jù)中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)對(duì)醫(yī)療器械生物學(xué)評(píng)價(jià)的要求，對(duì)C／C復(fù)合材料（1.7g／cm3）進(jìn)行細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)、急性全身毒性實(shí)驗(yàn)、溶血實(shí)驗(yàn)、熱源實(shí)驗(yàn)、肌肉植入實(shí)驗(yàn)等生物學(xué)安全性評(píng)價(jià)研究，認(rèn)為C／C復(fù)合材料的各項(xiàng)生物學(xué)性能指標(biāo)符合國家標(biāo)準(zhǔn)要求，無細(xì)胞毒性和全身毒性、無熱源性，具有良好的生物相容性，該研究成果已發(fā)表［25］。

3 結(jié)論

（1）隨著高溫（2800～3200℃）石墨化處理時(shí)間的延長，C／C復(fù)合材料毒性物質(zhì)的種類或含量會(huì)去除或減少。

（2）成骨細(xì)胞在12，16h高溫處理后的C／C復(fù)合材料表面生長良好，而在4，8h高溫處理后的C／C復(fù)合材料表面生長差。

（3）提高C／C復(fù)合材料生物相容性的最佳石墨化高溫處理時(shí)間為12h。

［1］ GOTT V L，WHIFFEN J D，DUTTON R C.Heparin bonding on colloidal graphite surfaces［J］.Science，1963，142（3597）：1279－1298.

［2］ BRüCKMANN H，HüTTINGER K J.Carbon，apromisingmaterial in endoprosthetics.Part1：the carbon materials and their mechanical properties［J］.Biomaterials，1980，1（2）：67－72.

［3］ 侯向輝，陳強(qiáng)，喻春紅，等.碳／碳復(fù)合材料的生物相容性及生物應(yīng)用［J］.功能材料，2000，31（5）：460－463.

HOU Xiang－h(huán)ui，CHEN Qiang，YU Chun－h(huán)ong，et al.Biocompatibility and medical application of carbon－carbon composites［J］.Journal of Functional Materials，2000，31（5）：460－463.

［4］ 張磊磊，李賀軍，李克智，等.C／C復(fù)合材料表面粗糙度對(duì)成骨細(xì)胞生長行為的影響［J］.無機(jī)材料學(xué)報(bào)，2008，23（2）：341－345.

ZHANG Lei－lei，LI He－jun，LI Ke－zhi，et al.Effect of surface roughness of carbon／carbon composites on osteoblasts growth behaviour［J］.Journal of Inorganic Materials，2008，23（2）：341－345.

［5］ WANG G H，SHU Y，ZHU S H，et al.Biological properties of carbon／carbon implant composites with unique manufacturing processes［J］.Journal of Materials Science：Materials in Medicine，2009，20（12）：2487－92.

［6］ 付濤，憨勇，宋忠孝，等.碳／碳復(fù)合材料表面誘導(dǎo)沉積生理磷灰石層［J］.無機(jī)材料學(xué)報(bào)，2002，17（1）：189－192.

FU Tao，HAN Yong，SONG Zhong－xiao，et al.Induction of biological apatite layer on the surface of carbon／carbon composite［J］.Journal of Inorganic Materials，2002，17（1）：189－192.

［7］ WAN C，LI K Z，ZHAI Y Q，et al.Study of fluorhydroxyapatite coatings on carbon／carbon composites［J］.Surface and Coatings Technology，2009，203（13）：1771－1775.

［8］ 倪昕曄，湯曉斌，林濤，等.醫(yī)用炭／炭復(fù)合材料表面梯度CVD熱解碳涂層的摩擦性能研究［J］.無機(jī)材料學(xué)報(bào)，2012，27（5）：545－549.

NI Xin－ye，TANG Xiao－bin，LIN Tao，et al.Friction of pyrolytic carbon coating prepared by gradient CVD on medical carbon／carbon composites surface［J］.Journal of Inorganic Materials，2012，27（5）：545－549.

［9］ 胡志彪，李賀軍，陳強(qiáng)，等.碳／碳復(fù)合材料摩擦學(xué)性能及摩擦機(jī)制研究進(jìn)展［J］.材料工程，2004，（12）：59－62.

HU Zhi－biao，LI He－jun，CHEN Qiang，et al.Advance in research on tribological behavior and mechanism of carbon／carbon composites［J］.Journal of Materials Engineering，2004，（12）：59－62.

［10］ 曹寧，李木森，馬泉生，等.醫(yī)用C／C復(fù)合材料的制備及骨組織相容性研究［J］.山東大學(xué)學(xué)報(bào)：工學(xué)版，2007，37（1）：1－5.

CAO Ning，LI Mu－sen，MA Quan－sheng，et al.Preparation of biomedical carbon／carbon composites and their bone tissue biocompatibility［J］.Journal of Shandong University：Engineering Science，2007，37（1）：1－5.

［11］ 王國慧，于澍，朱曬紅，等.炭／炭復(fù)合骨植入材料研究［J］.生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)雜志，2010，27（6）：1286－1291.

WANG Guo－h(huán)ui，YU Shu，ZHU Shai－h(huán)ong，et al.Study on implant material of carbon／carbon composites［J］.Journal of Biomedical Engineering，2010，27（6）：1286－1291.

［12］ 戴閩，袁曉軍，程細(xì)高，等.鈷鉻離子對(duì)成骨細(xì)胞細(xì)胞毒性及對(duì)其分泌骨保護(hù)素及其配體的影響［J］.中國矯形外科雜志，2009，17（19）：1489－1491.

DAI Min，YUAN Xiao－jun，CHENG Xi－gao，et al.Effects of cobalt and chromium ions on osteoblasts：cytotoxicity and the releasion of RANKL and OPG［J］.Orthopedic Journal of China，2009，17（19）：1489－1491.

［13］ HSIEH Y C，YU H P，SUZUKI T，et al.Upregulation of mitochondrial respiratory complex IV by estrogen receptor－beta is critical for inhibiting mitochondrial apoptotic signaling and restoring cardiac functions following trauma－h(huán)emorrhage［J］.Journal of Molecular and Cellular Cardiology，2006，41（3）：511－521.［14］ KOIZUMI T，LI Z G，TATSUMOTO H.DNA damaging activity of cadmium in Leydig cells，a target cell population for cadmium carcinogenesis in the rat testis［J］.Toxicol Lett，1992，63（2）：211－220.

［15］ 錢海雷.氟、鎘對(duì)骨的效應(yīng)［D］.上海：復(fù)旦大學(xué)博士學(xué)位論文，2006.79－80.

［16］ ANNABI B A，NEHDI A，HAJJAJI N，et a1.Antioxidant enzymes activities and bilirubin level in adult rat treated with lead［J］.Comptes Rendus Biologies，2007，330（8）：581－588.

［17］ 劉國軍，閻春生，姚海艷，等.鋅對(duì)鉛染毒新生大鼠成骨細(xì)胞增殖分化的影響［J］.現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2012，12（4）：612－615.

LIU Guo－jun，YAN Chun－sheng，YAO Hai－yan，et al.Combined effects of lead and zinc on proliferation and differentiation of osteoblasts in newborn rats［J］.Progress in Modern Biomedicine，2012，12（4）：612－615.

［18］ 胡瓊，王取南，李嘉嘉，等.鋁對(duì)大鼠神經(jīng)干細(xì)胞向神經(jīng)元細(xì)胞分化的影響［J］.安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2005，40（3）：210－213.

HU Qiong，WANG Qu－nan，LI Jia－jia，et al.Effects of aluminum on differentiation of rat neural stem cell into neuron－like cells［J］.Acta Universitis Medicinalis Anhui，2005，40（3）：210－213.

［19］ 胡曉磐，周建華，時(shí)夕金，等.汞、鎘、鉛聯(lián)合染毒對(duì)小鼠DNA損傷的研究［J］.蘇州大學(xué)學(xué)報(bào)：醫(yī)學(xué)版，2004，24（5）：595－597.

HU Xiao－pan，ZHOU Jian－h(huán)ua，SHI Xi－jin，et al.Study on damage of DNA in mice induced by mercury cadmium and／or lead［J］.Acta Academiae Medicinae Suzhou，2004，24（5）：595－597.

［20］ BA?GEL S，ERDEMOGLU S B.Determination of mineral and trace elements in some medicinal herbs and their infusions consumed in Turkey［J］.Sci Total Environ，2006，359（1－3）：82－89.

［21］ POWELL JJ，BURDEN TJ，THOMPSON RP.In vitro mineral availability from digested tea：a rich dietary source of managanese［J］.Analyst，1998，123（8）：1721－1724.

［22］ GB 4234－2003，外科植入物用不銹鋼［S］.

［23］ 國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典2010年版一部［M］.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010.

［24］ 譚志強(qiáng)，吳鵬，徐開來，等.ICP－OES和ICP－MS法研究中草藥中元素的溶出特性［J］.化學(xué)研究與應(yīng)用，2008，22（2）：193－197.

TAN Zhi－qiang，WU Peng，XU Kai－lai，et al.Studies on multielement extraction characteristics of common Chinese medicinal herbs during their preparation by ICP－OES and ICP－MS［J］.Chemical Research and Application，2008，22（2）：193－197.

［25］ 倪昕曄，林濤，湯曉斌，等.C／C復(fù)合材料的生物學(xué)安全性評(píng)價(jià)研究［J］.國際生物醫(yī)學(xué)工程雜志，2011，34（6）：340－343.

NI Xin－ye，LIN Tao，TANG Xiao－bin，et al.Biological safety e－valuation of carbon－carbon composites［J］.International Journal of Biomedical Engineering，2011，34（6）：340－343.