王 昭

(武漢市中醫(yī)醫(yī)院，湖北 武漢 430040)

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芍藥苷微囊的測(cè)定及制備研究

王 昭

(武漢市中醫(yī)醫(yī)院，湖北 武漢 430040)

目的：研究芍藥苷微囊的測(cè)定及制備工藝。方法：通過采用HPLC 色譜峰面積歸一化法進(jìn)行計(jì)算而得的自制芍藥苷，并進(jìn)行微囊制備。結(jié)果：在24.5～490.0μg/mL范圍內(nèi)芍藥苷溶液具有較好的線性關(guān)系；45～55℃的成囊溫度、3%～5%的膠液濃度所具有的影響不明顯； pH對(duì)成囊的影響不大，過高和過低的影響都不明顯，其值在3.5～4.5時(shí)最優(yōu)。結(jié)論：微囊對(duì)于藥效的吸收和釋放有著重要作用，在pH為 6.8的溶液中，微囊釋藥的速度比較緩慢，在人體環(huán)境下微囊的藥效是緩釋的。

芍藥苷微囊；測(cè)定；藥物制備

芍藥苷是中藥芍藥中一種非常普通的藥效成分，是一種典型的單萜類糖苷化合物。有關(guān)芍藥苷的藥理作用，國(guó)內(nèi)外的醫(yī)學(xué)者對(duì)其進(jìn)行了大量的研究。在自由基損傷抵抗、細(xì)胞鈣超載抑制等方面，芍藥苷的作用非常顯著。體內(nèi)試驗(yàn)結(jié)果顯示，芍藥苷還可以有效改善血液循環(huán)、降低血液黏度等，其具有非常小的毒副作用。在近幾年的醫(yī)學(xué)發(fā)展中，微囊化是一種新型制劑，能夠大大提高難溶藥物的利用度，通過微囊化后，藥物能夠進(jìn)行高度分散，增大表面積，提高藥物的吸收效率，從而提高生物利用度。

1 儀器與材料

BP2110電子天平：德國(guó)賽多利斯公司；S-3000N 掃描電子顯微鏡：日本日立公司；SPD-20A 液相色譜儀：日本島津；DF-101S 恒溫加熱磁力攪拌器：鞏義市英嶼予華儀器廠；D-800LS 藥物智能溶出儀：天津大學(xué)無線電廠。

主要材料：通過采用HPLC 色譜峰面積歸一化法進(jìn)行計(jì)算而得的自制芍藥苷；中國(guó)食品藥品檢定研究院所生產(chǎn)的芍藥苷對(duì)照品，明膠、阿拉伯膠、乙腈、戊二醛、重蒸水和其他分析類純劑。

2 方法與結(jié)果

2.1 HPLC 法測(cè)定芍藥苷

2.1.1 色譜條件 Agilent C18色譜柱(250mm×4.6 mm，5μm)；流動(dòng)相：乙腈-水(16∶84)；體積容量：1.0 mL/min；柱溫：30℃。按照芍藥苷峰計(jì)算理論塔板數(shù)，其值為大于2 000。

2.1.2 對(duì)照品溶液配制 精密稱取芍藥苷對(duì)照品9.8mg，置于10mL量杯中，加入甲醇溶液進(jìn)行稀釋，搖勻，即得。

2.1.3 供試品溶液配制 將一定量的芍藥苷微囊進(jìn)行研磨，然后在其中加入25mL甲醇，超聲20min后，將其放置冷卻，再次進(jìn)行質(zhì)量稱取。通過甲醇補(bǔ)齊缺失的質(zhì)量。對(duì)液體進(jìn)行過濾，棄初濾液，將續(xù)濾液再次用0.45μm 微孔濾膜進(jìn)行過濾，由此得空白溶液。

2.1.4 專屬性考察 對(duì)于空白溶液、供試品溶液和對(duì)照品溶液進(jìn)行色譜條件的實(shí)驗(yàn)，研究結(jié)果顯示所得出的方法較好，并且每個(gè)溶液和成分之間不存在干擾。具體見圖1。

圖1 空白樣品(A)、芍藥苷對(duì)照品(B)和樣品溶液(C)的HPLC色譜

2.1.5 線性關(guān)系考察 精密量取對(duì)照品，將其配置成24.5、49.0、147.0、245.0、343.0、490.0μg/mL的溶液，按照色譜條件對(duì)峰面積進(jìn)行測(cè)定。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，芍藥苷溶液在24.5～490.0μg/mL范圍內(nèi)具有較好的線性關(guān)系。

2.2 載藥量和包封率測(cè)定

精密稱取經(jīng)過真空干燥過的芍藥苷，按“2.1.3”方法配置溶液，測(cè)定峰面積，測(cè)算出具體的質(zhì)量和濃度，然后根據(jù)相關(guān)公式對(duì)微囊所含的芍藥苷進(jìn)行測(cè)量，計(jì)算出具體的載藥量和包封率。相關(guān)計(jì)算公式如下：

載藥量=微囊中芍藥苷的質(zhì)量 / 微囊的質(zhì)量

包封率=微囊中芍藥苷的質(zhì)量 / 投入芍藥苷的總量

2.3 設(shè)計(jì)微囊制備工藝

2.3.1 制備微囊 稱取2g明膠和阿拉伯膠，加入50mL水進(jìn)行相溶，配置成濃度為4%的溶液。精密稱取芍藥苷0.4g，稱取的藥粉是經(jīng)過100目篩的，然后在其中加入阿拉伯膠進(jìn)行研磨，制成混懸液。在其中加入相同量的阿拉伯膠和明膠，將其制成50mL，混勻，50℃的水溫中攪拌，轉(zhuǎn)速為300r/min。在溶液中加入5%醋酸溶液，將pH值調(diào)節(jié)至4左右，再次攪拌約15min。加入 2倍量蒸餾水(50℃溫水)，待體系自然冷卻至30℃以下后，冰浴迅速冷卻至10℃以下，用 4%戊二醛溶液約25mL固化15min，靜置使其充分沉降，傾去上清液，微囊濾過，然后用水進(jìn)行清洗，直到無甲醛味為止，進(jìn)行真空干燥，隨即得到芍藥苷微囊。在進(jìn)行試驗(yàn)的整個(gè)過程中，避光操作。

2.3.2 預(yù)試驗(yàn)及其結(jié)果 對(duì)于芍藥苷微囊制備工藝的相關(guān)優(yōu)化，在參考相關(guān)文獻(xiàn)的基礎(chǔ)之上，本文對(duì)其進(jìn)行了因素分析。共選取5個(gè)因素，分別是囊材和囊心的比例、pH 值、膠液濃度、成囊溫度、攪拌速率，通過對(duì)這些因素進(jìn)行考察，結(jié)果顯示，成囊溫度為45～55℃、膠液濃度為3%～5%所具有的影響是不明顯的，因此將膠液的濃度設(shè)定為4%，成囊溫度設(shè)定為50℃。當(dāng)囊材和囊心的比例小于1時(shí)，芍藥苷無法實(shí)現(xiàn)全部包裹，包封率在20%以下；當(dāng)囊材和囊心的比例大于5時(shí)，芍藥苷能夠?qū)崿F(xiàn)較好的高峰，但是承載藥量卻在10%以下，因此確定囊材和囊心的比例為1～5之間，這樣所得的載藥量和包封率都相對(duì)較好。攪拌速率太高，囊泡容易破，包封率明顯不高；攪拌速率太低則囊泡容易出現(xiàn)粘連，出現(xiàn)較為嚴(yán)重的結(jié)塊現(xiàn)象，因此確定攪拌速率為100～400 r/min。pH 值對(duì)成囊的影響不大，過高和過低的影響都不明顯，其值在3.5～4.5之間最優(yōu)。

2.4 實(shí)驗(yàn)檢驗(yàn)

通過對(duì)5個(gè)影響因素進(jìn)行相應(yīng)的調(diào)節(jié)，得出囊材和囊心的比例為4.3，pH 值為 4.0，攪拌速率為305 r/min。遵循優(yōu)化后的工藝條件對(duì)芍藥苷微囊進(jìn)行測(cè)定，所得到的結(jié)果如表1所示，此時(shí)載藥量和包封率都較高，質(zhì)量也較穩(wěn)定。

表1 最佳工藝驗(yàn)證

3 討論

中藥芍藥的主要成分為芍藥苷，芍藥所具有的生物化學(xué)反應(yīng)已經(jīng)過多項(xiàng)研究得到證實(shí)。然而對(duì)于發(fā)生的生物學(xué)效應(yīng)，具體是芍藥苷還是其產(chǎn)生的代謝物在發(fā)生作用，還不太明確。通過對(duì)芍藥苷的代謝進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)口服芍藥苷不能很好地被利用，即使是靜脈注射液其利用率也不高，代謝很快。

在神經(jīng)保護(hù)方面，芍藥苷已經(jīng)廣泛應(yīng)用于細(xì)胞方面，能夠抑制細(xì)胞凋亡，阻斷鈉通道，從而實(shí)現(xiàn)減輕鈣損傷，抑制鈉內(nèi)流，保護(hù)細(xì)胞的作用。在進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，由于所采取的手段具有一定的局限性，因此在神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)方面的具體作用還不是很明確。在今后的研究中，應(yīng)注重對(duì)芍藥苷和其代謝物藥理作用的研究，明確藥物的具體藥理作用，從而有效指導(dǎo)藥物的配藥規(guī)律。

對(duì)于微囊的制備，主要選取具有相反電荷的兩種材料進(jìn)行交聯(lián)、凝聚，因此對(duì)于微囊的性質(zhì)，溫度、pH值所具有的影響是不可忽視的。在本實(shí)驗(yàn)中，明膠和阿拉伯膠作為囊材凝聚成囊，兩者的質(zhì)量分?jǐn)?shù)宜在3%～5%，且比例為 1∶1，研究中首先考察了囊材的質(zhì)量濃度，質(zhì)量濃度過高，微囊不規(guī)則、易粘連；質(zhì)量濃度過低則包封率低，影響產(chǎn)能。在對(duì)微囊進(jìn)行制備時(shí)，經(jīng)過攪拌之后，用2倍的水對(duì)溶液進(jìn)行稀釋和攪拌，可以有效防止粘連。研究結(jié)果顯示，在pH為 6.8的溶液中，微囊釋藥的速度比較緩慢，由此可以得出在人體環(huán)境下微囊的藥效是緩釋的。

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(責(zé)任編輯：魏 曉)

2014-05-13

王昭(1987-)，湖北省武漢市中醫(yī)醫(yī)院中藥師，研究方向?yàn)橹兴帉W(xué)。

R283.6

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1673-2197(2014)17-0041-02