孔令提，宋春麗

(蚌埠醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院 藥劑科，安徽 蚌埠 233000)

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HPLC法測定冠脈康濃縮丸中芍藥苷含量

孔令提，宋春麗

(蚌埠醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院 藥劑科，安徽 蚌埠 233000)

目的：采用HPLC法測定冠脈康濃縮丸中的芍藥苷含量。方法：采用高效液相色譜法，色譜柱為島津C18柱(4.6mm×150 mm,5μm)，流動相為乙腈-0.1%磷酸溶液(15∶85)，流速為1.0mL/min，柱溫為40℃，檢測波長為230nm。結(jié)果：芍藥苷在0.005 5～0.044 0mg·mL-1濃度范圍內(nèi)與其峰面積積分呈良好的線性關(guān)系，r=0.999 2，平均加樣回收率為99.65%，RSD=1.06%。結(jié)論：該方法簡便可行、重復(fù)性好，可用于冠脈康濃縮丸中芍藥苷的含量測定，可有效控制該制劑質(zhì)量。

冠脈康濃縮丸；芍藥苷；高效液相色譜法；含量

冠脈康濃縮丸是由三七、赤芍、佛手、澤瀉和甘草五味中藥加工制成的復(fù)方濃縮丸劑，具有活血化瘀、理氣止痛等功效，臨床上用于冠心病、胸悶和心絞痛的治療，對高膽固醇血癥和高甘油三酯血癥亦有一定療效[1]。赤芍為方中要藥，其主要活性成分為以芍藥苷為代表的苷類物質(zhì)，因此測定制劑中芍藥苷的含量可作為評價成品質(zhì)量的客觀指標(biāo)之一[2-3]。為有效控制本品質(zhì)量，保證臨床療效，本試驗選擇芍藥苷作為指標(biāo)成分進(jìn)行含量測定研究。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

島津LC-2010A型高效液相色譜儀，島津ODS-C18柱(4.6mm×150mm,5μm)，KQ-250E型醫(yī)用超聲波清洗器(昆山超聲儀器有限公司)，AB135-S型十萬分之一天平(瑞士梅特勒-托利多儀器有限公司)。

1.2 試藥

乙腈、磷酸均為色譜純；水為超純水；其余試劑均為分析純；冠脈康濃縮丸及陰性樣品(自制)；芍藥苷對照品(批號：120736-200609，中國食品藥品檢定研究院)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：島津ODS-C18柱(4.6mm×150mm,5μm)；流動相：乙腈-0.1%磷酸溶液(15∶85)；流速：1.0mL/min；柱溫：40℃；檢測波長：230nm。理論塔板數(shù)按芍藥苷峰計算應(yīng)不低于3 000。

2.2 對照品溶液制備

取芍藥苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1mL含芍藥苷0.55mg的溶液，作為儲備液。取芍藥苷對照品溶液，分別精密量取0.1mL、0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL，置于10mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，制成系列濃度分別為0.005 5、0.011 0、0.022 0、0.033 0、0.044 0mg·mL-1的對照品溶液，即得。

2.3 供試品溶液制備

取本品適量，研細(xì)，精密稱定0.5g，置于具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50mL，稱定重量，超聲處理30min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，以0.45μm微孔濾膜濾過，即得。

2.4 陰性樣品溶液制備

按處方比例，稱取除赤芍藥材之外的群藥，按制備工藝制成陰性制劑，再按“2.3”項下方法制成陰性樣品溶液。

2.5 線性關(guān)系考察

取“2.2”項下系列濃度芍藥苷對照品溶液，分別精密吸取20μL注入液相色譜儀測定，以芍藥苷濃度(X)為橫坐標(biāo)，以相應(yīng)的峰面積積分值(Y)為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸處理，得回歸方程Y =1.006 0×108X + 1.892 8×104，r=0.999 2。結(jié)果表明，芍藥苷在0.005 5～0.044 0mg·mL-1濃度范圍內(nèi)與其峰面積積分呈良好的線性關(guān)系。

2.6 精密度試驗

精密吸取濃度為0.022 0mg·mL-1的芍藥苷對照溶液20μL，連續(xù)進(jìn)樣5次，測得峰面積RSD為0.86%，表明儀器精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗

取本品適量，按“2.3”項下方法制備供試品溶液，分別于0、4、8、16、24h精密吸取樣品液20μL，連續(xù)進(jìn)樣5次，測得峰面積RSD為1.64%，表明供試樣品在24h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 重復(fù)性試驗

取本品適量，按“2.3”項下方法制備供試品溶液5份，進(jìn)行含量測定，測得芍藥苷含量平均值為3.547mg·g-1，RSD為0.52%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.9 空白試驗

取“2.4”項下陰性樣品溶液進(jìn)樣測定，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，其在芍藥苷保留時間處無吸收，說明陰性樣品無干擾，見圖1。

圖1 芍藥苷HPLC

2.10 加樣回收試驗

取樣品適量(含量3.547mg·g-1)，研碎，取5份，每份0.25g，精密稱定，分別精密加入濃度為0.55mg·mL-1的芍藥苷對照品儲備液1.5mL，按照“2.3”項下制備供試品溶液，精密吸取樣品液20μL，注入液相色譜儀測定，計算回收率，結(jié)果見表1，平均回收率為99.65%，RSD為1.06%，表明該方法合理可行。

表1 加樣回收率結(jié)果

2.11 含量測定

按上述含量測定方法，對3批樣品中的芍藥苷含量進(jìn)行測定，結(jié)果見表2。

表2 含量測定結(jié)果 (n=3)

3 討論

本文先后對提取方式、超聲時間、提取溶劑種類及用量等進(jìn)行了考察，最終確定了文中“2.2”項下供試品溶液制備方法。流動相最初采用乙腈-0.1%磷酸溶液(20∶80)，峰未完全分離；又采用乙腈-0.1%磷酸溶液(15∶85)，分離度良好，芍藥苷峰形較好，因此最終選定該系統(tǒng)。通過方法學(xué)考察及對3批制劑進(jìn)行含量測定，結(jié)果表明該方法簡便可行、重復(fù)性好，可用于冠脈康濃縮丸中芍藥苷的含量測定，有效控制該制劑質(zhì)量。

[1] 中華人民共和國衛(wèi)生部.衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·中藥成方制劑[S].第十三冊.WS3-B-2535-97,1997:157.

[2] 段文娟,姜艷,靳鑫,等.赤芍的化學(xué)成分研究[J].中國藥物化學(xué)雜志,2009,19(1):55-58.

[3] 楊媛媛,周剛,馬曉康,等.赤芍的研究進(jìn)展[J].醫(yī)藥導(dǎo)報,2008,27(1):67-69.

(責(zé)任編輯：尹晨茹)

Determination of Peoniflorin in Concentrated Pill of Guanmaikang by HPLC

Kong Lingti, Song Chunli

(Department of Pharmacy, The First Affiliated Hospital of Bengbu Medical College, Bengbu 233000,China)

Objective:To establish a HPLC method to determine peoniflorin in concentrated pill of Guangmaikang.Methods:The chromatographic separation was performed on a C18column maintained at 40℃. The mobile phase consisted of acetonitrile (A) and 0.1% phosphoric acid (B) at a flow rate of 1.0 mL/min, the mobile phase ratio (A∶B) was 15∶:85, and the detector wavelength was 230nm.Results:Peoniflorin showed a good linear relationship at a range of 0.005 5～0.044 0mg·mL-1, r=0.999 2. The average recovery was 99.65% and RSD was 1.06%.Conclusion:The methods are available with a good reproducibility and can control the quality of this preparation effectively.

The Concentrated Pill of Guanmaikang; Peoniflorin; HPLC

2014-04-06

孔令提(1983-)，男，博士，蚌埠醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院藥師，研究方向為新藥開發(fā)及臨床藥學(xué)。

R284.1

A

1673-2197(2014)16-0021-02