梁 敏 周新科* 劉季芳 石波云

（廣州醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院，廣東 廣州 510095）

PIK3CA蛋白異常表達(dá)與胃癌臨床病理特征的關(guān)系

梁 敏 周新科* 劉季芳 石波云

（廣州醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院，廣東 廣州 510095）

目的探討PIK3CA蛋白異常表達(dá)與胃癌臨床病理特征的關(guān)系。方法選取人胃癌切片114例，記錄TNM分期；慢性淺表性胃炎患者胃黏膜15例作為對(duì)照。應(yīng)用免疫組化法檢測(cè)兩組中PIK3CA蛋白的表達(dá)。結(jié)果胃癌組織PIK3CA蛋白表達(dá)水平顯著高于對(duì)照組（P＜0.01）；PIK3CA蛋白表達(dá)水平在N1-N2較N0有明顯上升（P＜0.01）；在M1表達(dá)較M0有明顯上升（P＜0.01）。結(jié)論P(yáng)IK3CA蛋白表達(dá)異?？赡芘c胃癌淋巴轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移相關(guān)，PIK3CA蛋白有望成為評(píng)價(jià)胃癌預(yù)后的指標(biāo)。

PIK3CA；胃癌；免疫組化；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移

胃癌是我國(guó)最常見的消化系統(tǒng)惡性腫瘤之一，每年新發(fā)病例約40多萬，我國(guó)胃癌年發(fā)生率超過世界發(fā)病率的40%[1]。PIK3CA是一種原癌基因，編碼磷脂酰肌醇-3激酶（PI3K）的催化亞基p110α。在正常情況下，PIK3CA具有調(diào)控體細(xì)胞增殖、分化、存活等功能；但其突變后導(dǎo)致P13K-Akt途徑過度激活, 增加細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移能力。目前已發(fā)現(xiàn)PIK3CA在結(jié)直腸癌、乳腺癌、肺癌等多種腫瘤中高度突變，與腫瘤的生長(zhǎng)、浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[2]。相關(guān)研究顯示PIK3CA mRNA和蛋白在多種胃癌細(xì)胞系中高度表達(dá)，并與腫瘤侵襲能力有關(guān)[3]。目前關(guān)于PIK3CA蛋白表達(dá)和人體胃癌標(biāo)本病理特征之間的關(guān)系研究較少，故本研究觀察二者之間的關(guān)系，為胃癌的治療效果和預(yù)后的判斷提供新的指標(biāo)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2011年6月至2013年5月在我院普外科手術(shù)切除的原發(fā)性胃癌標(biāo)本114例。所有患者術(shù)前均未接受放化療。其中男68例，女46例，年齡42～78歲，平均年齡58.6歲。收集在我院內(nèi)鏡中心經(jīng)內(nèi)鏡確診的慢性淺表性胃炎患者胃黏膜組織標(biāo)本15例作為對(duì)照組，男6例，女9例，年齡38～72歲，平均年齡49.3歲。

1.2 方法

1.2.1 試劑

PIK3CA兔抗人特異性抗體購于上海研生實(shí)業(yè)有限公司，工作液濃度為1∶75。用已知PIK3CA陽性的胃癌切片作為陽性對(duì)照，用磷酸鹽緩沖液（PBS）代替一抗作為陰性對(duì)照。免疫組化試劑盒購于上海國(guó)源生物技術(shù)有限公司。

1.2.2 胃癌組織中PIK3CA蛋白表達(dá)的檢測(cè)

采用免疫組化鏈霉素抗生物素蛋白-過氧化物酶連接法（SP法）。標(biāo)本切片置于涂有黏合劑的玻片上，65 ℃烘烤40 min，常規(guī)脫蠟、脫水；將標(biāo)本浸泡于3%過氧化氫溶液中10 min。水洗后，加入依地酸鹽緩沖液，98 ℃微波修復(fù)5 min后用PBS沖洗。置于10%的正常血清中10 min，加入4 ℃一抗12 h，加入生物素標(biāo)記的SP復(fù)合物和二抗各30 min，PBS沖洗。用過氧化氫一二氨基聯(lián)苯胺顯色5 min，水洗，蘇木素復(fù)染，乙醇脫水，二甲苯透明，封片觀察。

1.2.3 PIK3CA蛋白表達(dá)結(jié)果判定

以細(xì)胞質(zhì)中出現(xiàn)棕黃色顆粒為PIK3CA蛋白表達(dá)陽性。將上述切片置于Olympus顯微鏡下，對(duì)所測(cè)視野進(jìn)行準(zhǔn)確定位后，由攝像系統(tǒng)進(jìn)行圖象分析。每例隨機(jī)選取6個(gè)完整而不重疊的視野進(jìn)行分析，測(cè)定PIK3CA蛋白表達(dá)陽性顆粒的光密度，選取每張切片的均值作為代表胃癌組織PIK3CA蛋白的表達(dá)水平。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料采用F檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用多個(gè)率的χ2檢驗(yàn)和確切概率法。

2 結(jié) 果

2.1 胃癌和正常組織中PIK3CA蛋白的表達(dá)

PIK3CA陽性表達(dá)產(chǎn)物定位于胃癌病變組織上皮細(xì)胞的胞質(zhì)中，呈棕黃色或棕褐色顆粒。在胃癌組織中PIK3CA陽性表達(dá)顯著高于對(duì)照組（P＜0.01）。見表1。

表1 胃癌標(biāo)本和淺表性胃炎標(biāo)本中PIK3CA蛋白表達(dá)水平

2.2 胃癌組中PIK3CA蛋白的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系PIK3CA陽性表達(dá)產(chǎn)物在T1-T2期胃癌組織與T3-T4期相比無明顯變化（P＞0.05）；PIK3CA陽性產(chǎn)物在N1-N2表達(dá)較N0有明顯上升（P＜0.01）；PIK3CA陽性產(chǎn)物在M1表達(dá)較M0有明顯上升（P＜0.01）。見表2。

Abnormal Expression of PIK3CA in Relation to the Clinicopathological Features of Gastric Cancer

LIANG Min, ZHOU Xin-ke*, LIU Ji-fang, SHI Bo-yun
(The Affiliated Cancer Hospital, Guangzhou Medical University, Guangzhou 510095, China)

ObjectiveTo investigate the abnormal relationship between the expression of PIK3CA and the clinicopathological features of gastric cancer.Methods114 cases of human gastric cancer were selected and recorded TNM staging; 15 cases of chronic superficial gastritis were picked as control group. PIK3CA expression was detected by immunohistochemistry.ResultsPIK3CA protein expression in gastric cancer was significantly higher than control group(P＜0.01). PIK3CA protein expression in N1-N2has significantly increased compared with N0(P＜0.01). PIK3CA expressed in M1 has increased significantly compared with M0(P＜0.01).ConclusionsThe abnormalities of PIK3CA may be associated with gastric cancer lymph node and distant metastasis. PIK3CA protein is expected to be evaluated gastric cancer prognosis holpfully.

PIK3CA; Gastric cancer; Immunohistochemistry; Lymph node metastasis

R735.2

B

1671-8194（2014）16-0007-02

廣州醫(yī)科大學(xué)博士啟動(dòng)基金項(xiàng)目（編號(hào)：2012C68）；廣東省教育廳科研基金項(xiàng)目（編號(hào)：2013KJCX0153）

*通訊作者