史可云，謝婧，蔣建中，丁偉良，朱文嬌，馬鐵梁*

（江蘇大學(xué)附屬宜興醫(yī)院1．老年醫(yī)學(xué)科，2．中心實(shí)驗(yàn)室，江蘇宜興214200）

持續(xù)氣道正壓通氣對(duì)阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征合并高血壓患者外周血淋巴細(xì)胞DNA的影響

史可云1，謝婧1，蔣建中1，丁偉良2，朱文嬌2，馬鐵梁2*

（江蘇大學(xué)附屬宜興醫(yī)院1．老年醫(yī)學(xué)科，2．中心實(shí)驗(yàn)室，江蘇宜興214200）

目的：探討持續(xù)氣道正壓通氣（continuous positive airway pressure，CPAP）治療前后阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征（obstructive sleep apnea hypopnea syndrome，OSAHS）合并高血壓患者外周血淋巴細(xì)胞DNA損傷的變化和意義。方法：采用多導(dǎo)睡眠儀對(duì)確診的53例OSAHS患者（OSAHS組，包括單純OSAHS 27例，合并高血壓26例），以及體檢健康志愿者33例（對(duì)照組）進(jìn)行睡眠監(jiān)測(cè)。使用Epworth嗜睡量表（Epworth sleepiness scale，ESS）評(píng)估患者白天嗜睡狀況和睡眠呼吸暫停的嚴(yán)重程度，用胞質(zhì)阻滯法（cytokinesis blocked micronucleus，CBMN）檢測(cè)外周血淋巴細(xì)胞DNA損傷情況。結(jié)果：與對(duì)照組比較，OSAHS組呼吸暫停低通氣指數(shù)（apnea-hypopnea index，AHI）、外周血淋巴細(xì)胞微核率、染色體橋率和核芽率均明顯升高，而夜間最低血氧飽和度（LSpO2）、夜間平均血氧飽和度（MSpO2）明顯降低（P＜0．05或P＜0．01）。治療前，與單純OSAHS患者比較，合并高血壓患者AHI明顯升高（P＜0．01），而MSpO2及LSpO2明顯降低（P＜0．05）；而治療后，OSAHS組患者AHI、ESS、血壓、微核率、染色體橋率、核芽率均明顯降低，而LS-pO2、MSpO2明顯升高（P＜0．05或P＜0．01）。合并高血壓組治療后的MSpO2明顯低于單純OSAHS組（P＜0．01）。結(jié)論：CPAP可減輕OSAHS患者外周血淋巴細(xì)胞的DNA損傷，緩解高血壓癥狀，其機(jī)制可能與CPAP對(duì)患者心血管功能的改善有關(guān)。

高血壓；阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征；DNA損傷；持續(xù)氣道正壓通氣；淋巴細(xì)胞

阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征（obstructive sleep apnea hypopnea syndrome，OSAHS）以患者睡眠過(guò)程中的短暫呼吸停滯、夜間間歇缺氧以及反復(fù)上呼吸道阻塞為特點(diǎn)，往往會(huì)導(dǎo)致血氧飽和度降低并且患者反復(fù)覺(jué)醒。該病使正常睡眠中斷，從而影響患者白天精神狀態(tài)，進(jìn)而導(dǎo)致生活質(zhì)量降低。在一般人群中，有3%～7%的人會(huì)受到OSAHS的影響［1－2］，而有研究顯示，OSAHS和高血壓、心血管疾病有關(guān)，OSAHS患者常常伴有高血壓［3－4］。對(duì)于OSAHS的治療，最有效的手段是持續(xù)氣道正壓通氣（continuous positive airway pressure，CPAP），但是具體機(jī)制不明。因此，本研究使用胞質(zhì)阻滯法檢測(cè)OSAHS合并高血壓患者外周血淋巴細(xì)胞微核的發(fā)生率［5］，期望從遺傳學(xué)角度獲得治療OSAHS的線索，以提高患者的生活質(zhì)量。

1 對(duì)象與方法

1．1 對(duì)象

53例OSAHS患者均為2011年10月至2013年 12月在江蘇大學(xué)附屬宜興醫(yī)院呼吸內(nèi)科初診的住院病例，均有睡眠時(shí)打鼾、呼吸暫停、白天嗜睡癥狀，經(jīng)多導(dǎo)睡眠儀（polysomnography，PSG）進(jìn)行睡眠監(jiān)測(cè)獲得確診，包括單純OSAHS 27例，合并高血壓26例，年齡38～67（51．5±9．6）歲，體質(zhì)量指數(shù)（body mass index，BMI）平均為（27．6±4．2）kg／m2。OSAHS的診斷依據(jù)中華醫(yī)學(xué)會(huì)呼吸病學(xué)分會(huì)睡眠呼吸疾病學(xué)組診斷標(biāo)準(zhǔn)［6］，高血壓診斷依據(jù)《中國(guó)高血壓防治指南2010》診斷標(biāo)準(zhǔn)［7］，并在確診后排除腎源性等繼發(fā)性高血壓。另選取同期在我院體檢的健康志愿者33例，年齡35～67（50．7±9．5）歲，BMI（25．5±2．0）kg／m2；經(jīng)詢問(wèn)病史、進(jìn)行相關(guān)檢查及整夜PSG監(jiān)測(cè)，排除OSAHS［睡眠呼吸暫停低通氣指數(shù)（apnea hypopnea index，AHI）＜5次／h］。所有研究對(duì)象均排除其他慢性呼吸系統(tǒng)疾病、代謝系統(tǒng)疾病、腎臟疾病、感染性疾病和其他系統(tǒng)慢性疾病，未使用過(guò)抗炎、抗凝等藥物，從未服用過(guò)對(duì)血壓、睡眠有影響的藥物。全部研究對(duì)象均知情同意。

1．2 方法

1．2．1 多導(dǎo)睡眠呼吸監(jiān)測(cè) 采用美國(guó)偉康公司生產(chǎn)的Alice24 PSG記錄儀進(jìn)行夜間PSG監(jiān)測(cè)≥7 h。檢查前24 h內(nèi)禁服安眠藥、酒、茶和咖啡等，且1周內(nèi)無(wú)上呼吸道感染等疾病感染史。采用AHI、夜間平均血氧飽和度（mean pulse oxygen saturation，MS-pO2）、夜間最低血氧飽和度（lowest pulse oxygen saturation，LSpO2）、收縮壓和舒張壓反映患者疾病的客觀嚴(yán)重程度。使用Epworth嗜睡量表（Epworth sleepiness scale，ESS）［8］評(píng)估患者白天嗜睡狀況和睡眠呼吸暫停的嚴(yán)重程度。

1．2．2 治療 經(jīng)鼻持續(xù)氣道正壓通氣（nasal continuous positive airway pressure，nCPAP）治療持續(xù)2周，每日治療時(shí)間控制在8 h左右。

1．2．3 胞質(zhì)阻滯法（cytokinesis blocked micronucleus assay，CBMN）檢測(cè)外周血淋巴細(xì)胞DNA損傷狀態(tài) 用抗凝管采集靜脈血1．0 mL，在采血后使用1640混合培養(yǎng)基在細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)（Hyclone公司）44 h，加細(xì)胞松弛素B（美國(guó)Sigma公司），終質(zhì)量濃度6μg／mL，繼續(xù)培養(yǎng)72 h。1 000 r／min離心5 min，吸去上清液，留下約0．5 mL，加入7 mL已4℃預(yù)冷的0．075 mol／L KCl溶液，充分混勻。加入新配制的固定液（甲醇∶冰醋酸為3∶1）5 mL固定，立即1 000 r／min離心8 min，去上清液。同法固定2次，吸盡上清液，加入固定液0．2～0．5 mL，混勻后滴片，Giemsa染色8 min后，取出用水沖洗，自然干燥，盡量使用同一批次的試劑。鏡檢：計(jì)數(shù)1 000個(gè)雙核細(xì)胞，計(jì)算微核率（‰）、染色體橋率（‰）、核芽率（‰）［7］，采用雙盲法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。

1．3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

應(yīng)用SPSS 12．0統(tǒng)計(jì)軟件分析數(shù)據(jù)，計(jì)量數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差±s）表示，兩組間的比較使用t′檢驗(yàn)，CPAP治療前后的比較使用配對(duì)t檢驗(yàn)，P＜0．05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2．1 一般情況

OSAHS組患者年齡、BMI和性別與對(duì)照組間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＞0．05），而AHI、ESS總分均比對(duì)照組明顯升高，LSpO2、MSpO2則明顯降低（P均＜0．01）。見(jiàn)表1。

表1 兩組患者一般資料 ±s

組別 性別（男／女） （次／h） ESS總分 LSpO2（%）AHI MSpO2（%）收縮壓（mmHg）舒張壓（mmHg ）對(duì)照組 33（17／16） 3．4±0．7 6．8±1．6 91．9±1．3 95．2±2．7 120．7±8．5＜0．01 ＜0．01 ＜0．01 ＜0．01 ＜0．01 ＜0．01 74．1±7．5 OSAHS組 53（30／23） 41．6±26．3 12．5±4．4 69．6±11．7 87．5±6．3 135．4±16．1 86．9±13．8 t′ 10．582 8．640 －13．746 －9．624 6．778 5．549 P

2．2 微核率、染色體橋率、核芽率的比較

OSAHS組治療前的微核率、染色體橋率和核芽率均明顯高于對(duì)照組（P＜0．05），且OSAHS合并高血壓患者又明顯高于單純OSAHS組。經(jīng)CPAP治療后，所有OSAHS患者的微核率、染色體橋率和核芽率均明顯下降（P＜0．05）。見(jiàn)表2。

表2 OSAHS患者治療前后外周血淋巴細(xì)胞DNA損傷指標(biāo) ±s，‰

a：P＜0．05，b：P＜0．01，與對(duì)照組比較；c：P＜0．01，與治療前比較；d：P＜0．05，與單純OSAHS組比較

微核率 染色體橋率 核芽率治療前 治療后 治療前 治療后 治療前 治療后對(duì)照組 33 12．6±5．4 — 4．0±2．1 — 3．6±2．9組別n—OSAHS組 53 38．8±10．0b 18．1±4．1c 7．4±6．0b 3．6±3．0c 7．6±4．1a 4．7±2．7c單純OSAHS組 27 36．7±9．4 17．7±3．9c 5．8±4．8 3．0±2．6c 6．9±3．8 3．8±2．1c合并高血壓組 26 41．0±10．2d 18．5±4．3c 9．0±6．7d 4．3±3．3c 8．5±4．3d 5．7±2．9c

2．3 各組臨床療效比較

與治療前比較，單純OSAHS和合并高血壓患者治療后AHI、ESS和血壓明顯降低，而LSpO2、MSpO2明顯升高（P＜0．05或P＜0．01）。治療前，與單純OSAHS患者比較，合并高血壓患者AHI明顯升高（P＜0．01），而MSpO2及LSpO2顯著降低（P＜0．05）；而治療后，與單純OSAHS患者組比較，合并高血壓患者組僅有MSpO2較低（P＜0．01），其他指標(biāo)則無(wú)明顯差異（P＞0．05）。見(jiàn)表3。

表3 各組OSAHS患者療效比較 ±s

a：P＜0．05，b：P＜0．01，與單純OSAHS組治療前比較

組別 n治療 AHI（次／h） （kg／m2） ESS LSpO2（%）BMI MSpO2（%）收縮壓（mmHg）舒張壓（mmHg ）6．3 135．4±16．1 86．9±13．8后 28．9±16．7 27．7±4．1 8．9±2．8 80．8±6．1 91．4±2．6 127．6±12．4 81．9±10．4 t 6．834 －1．292 8．275 －8．964 －5．053 4．970 5．148 P ＜0．01 0．202 ＜0．01 ＜0．01 ＜0．01 ＜0．01 ＜0．01單純OSAHS組27前 24．6±15．1 27．6±3．5 11．5±4．3 76．1±9．3 89．6±3．9 122．7±11．1 76．0±9．8后 21．3±13．3 27．6±3．5 8．4±2．4 83．5±3．4 92．1±1．7 120．9±9．4a 74．5±8．3 t 2．877 1．442 4．907 －4．461 －3．132 2．178 2．126 P ＜0．01 0．161 ＜0．01 ＜0．01 ＜0．01 ＜0．05 ＜0．05合并高血壓組26 前 59．3±23．8b 27．7±4．7 13．7±4．4 62．7±10．0a 85．3±7．5b 145．6±8．6b 98．3±5．6b后 36．9±16．4 27．7±4．7 9．5±3．1 77．9±6．9 90．7±3．1b 134．6±11．2 89．6±5．5 t 9．333 －1．335 6．957 －9．734 －4．141 5．405 5．554 P OSAHS組 53前 41．6±26．3 27．6±4．2 12．5±4．4 69．6±11．7 87．5±＜0．01 0．194 ＜0．01 ＜0．01 ＜0．01 ＜0．01 ＜0．01

3 討論

OSAHS患者在睡眠過(guò)程中上氣道坍塌阻塞，使得呼吸反復(fù)暫停，并有血氧飽和度下降等病理生理改變。間歇性低氧導(dǎo)致機(jī)體產(chǎn)生較多的氧自由基而打破原有的氧平衡，進(jìn)而引起氧化應(yīng)激［9］，進(jìn)一步導(dǎo)致心血管疾病的發(fā)生［10］。氧化應(yīng)激會(huì)導(dǎo)致DNA鏈斷裂損傷，并且修復(fù)能力下降，最后影響染色體的穩(wěn)定性［11］。Konstantina等［12］研究發(fā)現(xiàn)，OSAHS患者的外周血淋巴細(xì)胞的DNA受損，而我們前期的研究結(jié)果顯示OSAHS患者外周血淋巴細(xì)胞具有較高的微核發(fā)生率，而且微核率隨OSAHS的嚴(yán)重程度而升高［13］。本研究結(jié)果亦發(fā)現(xiàn)，與單純OSAHS組比較，OSAHS合并高血壓患者的微核率、染色體橋率及核芽率3個(gè)指標(biāo)明顯升高，說(shuō)明OSAHS患者機(jī)體中由于間斷缺氧引起了較為嚴(yán)重的DNA氧化損傷，且這種損傷由于高血壓的發(fā)生而更加嚴(yán)重。

CPAP為目前治療OSAHS的常規(guī)方法，通過(guò)增加咽腔內(nèi)的正壓來(lái)對(duì)抗吸氣負(fù)壓，從而阻止氣道塌陷［14］。研究發(fā)現(xiàn)，CPAP治療后OSAHS患者許多氧化應(yīng)激指標(biāo)趨于正常，如硝基酪氨酸、COX2［15］、蛋白質(zhì)硝基［16］、羰基［17］及丙二醛［18］等。本研究結(jié)果顯示，OSAHS患者使用CPAP治療后的微核率、染色體橋率及核芽率明顯下降，說(shuō)明治療使得機(jī)體的氧化應(yīng)激水平有一定的下降，DNA損傷程度減輕，這可能與CPAP改善了患者夜間間斷缺氧狀態(tài)有關(guān)。

研究顯示，CPAP能降低OSAHS合并高血壓患者的高血壓程度［19］，且具有潛在的預(yù)防OSAHS合并高血壓患者心血管并發(fā)癥的效果［20］。有研究發(fā)現(xiàn)，CPAP不但可明顯改善患者白天嗜睡癥狀，而且可能會(huì)降低高血壓或心血管事件的發(fā)生率［21－22］。OSAHS患者高血壓的發(fā)生機(jī)制還不明確，有研究認(rèn)為高血壓是化學(xué)感受器受刺激從而增加交感神經(jīng)張力而導(dǎo)致［23－24］。CPAP可以降低交感神經(jīng)張力，改善低氧血癥，防止胸腔壓力波動(dòng)［25－26］，進(jìn)而降低OSAHS患者的血壓。我們的研究結(jié)果也顯示，對(duì)于合并高血壓的OSAHS患者，CPAP對(duì)高血壓有一定的治療作用，從而使治療后的血壓與單純OSAHS組患者差異減小。CPAP對(duì)高血壓癥狀的緩解，也體現(xiàn)在兩組間治療后微核率、染色體橋率的差值較治療前變小。由于微核實(shí)驗(yàn)中的核芽率并非染色體損傷的指標(biāo)，因此我們的結(jié)果中兩組核芽率間差異并不明顯［13］。

此外，有研究發(fā)現(xiàn)，CPAP治療至少需要超過(guò)4 h／夜，且應(yīng)長(zhǎng)期堅(jiān)持［27］。我們的結(jié)果也提示，經(jīng)過(guò)2周的CPAP治療，OSAHS合并高血壓患者的血壓、微核率、染色體橋率等指標(biāo)較治療前明顯下降，但與對(duì)照組比較，仍然較高。因此，對(duì)于OSAHS患者，CPAP是一個(gè)需要長(zhǎng)期堅(jiān)持的措施。

綜上所述，間斷缺氧導(dǎo)致OSAHS患者外周血淋巴細(xì)胞DNA損傷，這種損傷由于高血壓的發(fā)生而更加嚴(yán)重。作為治療OSAHS的常規(guī)手段，CPAP在治療OSAHS的同時(shí)，使機(jī)體DNA損傷降低，同時(shí)緩解高血壓癥狀，這可能與氧化應(yīng)激導(dǎo)致的心腦血管等靶器官損害的發(fā)病機(jī)制相關(guān)。

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R562

A

1671－7783（2014）05－0441－04

10．13312／j．issn．1671-7783．y140167

宜興市科技基金資助項(xiàng)目（宜科字［2013］59號(hào)）

*：通訊作者，助理研究員，E-mail：matieliang＠foxmail．com

2014－06－11 ［編輯］ 陳海林