任冰如， 陳智坤， 陳 劍， 梁呈元， 呂 寒， 李維林

〔江蘇省·中國(guó)科學(xué)院植物研究所(南京中山植物園) 江蘇省藥用植物研究開(kāi)發(fā)中心江蘇省抗糖尿病藥物篩選技術(shù)服務(wù)中心， 江蘇 南京 210014〕

枇杷葉為枇杷〔Eriobotryajaponica(Thunb.) Lindl.〕的干燥葉片，為常用中藥材之一[1]。目前已從枇杷葉中分離得到三萜酸類(lèi)、黃酮類(lèi)及多酚類(lèi)等多種有效成分[2-3]，其中，三萜酸類(lèi)是枇杷葉的主要藥效物質(zhì)，具有抗炎、降血糖和抗病毒等活性，主要包括齊墩果酸、熊果酸、薔薇酸和科羅索酸等成分[4]，目前已將齊墩果酸和熊果酸作為枇杷葉質(zhì)量檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)[1]。大量的分析結(jié)果[5-8]表明：不同產(chǎn)地、不同季節(jié)、落葉與生長(zhǎng)葉和不同品種枇杷葉間的三萜酸類(lèi)成分存在差異。

江蘇蘇州西山島是全國(guó)五大著名枇杷產(chǎn)區(qū)之一，枇杷栽種歷史悠久，所產(chǎn)枇杷果實(shí)品質(zhì)優(yōu)良，目前尚未見(jiàn)有關(guān)西山島產(chǎn)枇杷葉藥材品質(zhì)研究的相關(guān)報(bào)道。為此，作者對(duì)蘇州西山島產(chǎn)枇杷葉的水分、總灰分、浸出物、齊墩果酸和熊果酸的含量進(jìn)行了分析，旨在為枇杷葉資源的利用提供參考依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 材料

供試的2批枇杷葉樣品分別于2006年5月和2009年11月采自江蘇省蘇州市吳中區(qū)金庭鎮(zhèn)(西山島)林屋村，均為枇杷樹(shù)的自然落葉，由本所郭榮麟研究員鑒定，經(jīng)日光曬干后備用；枇杷葉對(duì)照品完整葉片由中國(guó)食品藥品檢定研究院提供；供試樣品葉片和對(duì)照葉片分別粉碎，用于薄層層析分析以及水分、總灰分和浸出物含量測(cè)定的樣品過(guò)24目篩，用于齊墩果酸和熊果酸含量測(cè)定的樣品過(guò)50目篩。齊墩果酸對(duì)照品購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所(批號(hào)0709-9803)，熊果酸對(duì)照品購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院(批號(hào)110742-200518)。

1.2 方法

1.2.1 薄層層析分析 參照文獻(xiàn)[1]制備2009年的樣品及對(duì)照品的甲醇提取物，以熊果酸對(duì)照品的甲醇溶液為對(duì)照進(jìn)行硅膠G薄層分析。點(diǎn)樣量各1 μL，展開(kāi)劑為V(甲苯)∶V(丙酮)=5∶1，顯色劑為體積分?jǐn)?shù)10%硫酸-乙醇溶液。

1.2.2 成分分析 稱(chēng)取樣品粉末3 g(精度0.001 g)，采用烘干法[1]測(cè)定水分含量，每批樣品2份，每份重復(fù)3次。稱(chēng)取樣品粉末2.5 g(精度0.001 g)，采用灼燒法[1]測(cè)定總灰分含量，每批樣品重復(fù)2次。稱(chēng)取樣品粉末4 g(精度0.000 1 g)，采用熱浸法[1]測(cè)定浸出物含量，每批樣品重復(fù)2次。

1.2.3 齊墩果酸和熊果酸含量測(cè)定 采用HPLC法[1]測(cè)定齊墩果酸和熊果酸含量。

1.2.3.2 樣品溶液制備及HPLC分析 參照文獻(xiàn)[1]的方法用體積分?jǐn)?shù)95%乙醇制備樣品溶液，按照上述色譜條件進(jìn)行HPLC分析；每批樣品測(cè)定1份，每份樣品重復(fù)3次。采用外標(biāo)法計(jì)算樣品溶液中齊墩果酸和熊果酸濃度，并根據(jù)公式“C=〔(c×50)/(m×10)〕×100%”計(jì)算樣品中齊墩果酸及熊果酸含量。式中：C為樣品中齊墩果酸或熊果酸含量；c為樣品溶液中齊墩果酸或熊果酸濃度；m為樣品質(zhì)量。

1.3 數(shù)據(jù)處理和分析

采用EXCEL 2003軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)和分析。

2 結(jié)果和分析

2.1 薄層層析分析結(jié)果

硅膠G薄層層析結(jié)果表明：2009年采集的枇杷葉樣品與枇杷葉對(duì)照品斑點(diǎn)一致，均具有與熊果酸對(duì)照品一致的斑點(diǎn)，說(shuō)明西山島產(chǎn)枇杷葉中含有熊果酸，符合藥材標(biāo)準(zhǔn)[1]。

2.2 成分含量分析結(jié)果

不同年份蘇州西山島枇杷葉中各成分含量的測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1。2006年和2009年采集的枇杷葉樣品中的水分含量分別為13.99%和12.75%，略高于或略低于“不得超過(guò)13.0%[1]”的標(biāo)準(zhǔn)。據(jù)此建議枇杷葉采收后應(yīng)充分干燥并妥善貯存。

2006年和2009年采集的枇杷葉樣品中的總灰分含量分別為11.66%和13.35%，均高于“不超過(guò)9.0%[1]”的標(biāo)準(zhǔn)，可能由于供試枇杷葉樣品多為自然落葉并攤曬于地面，易沾染泥沙，其葉片絨毛也易附著塵土；另外，生長(zhǎng)環(huán)境、土質(zhì)和肥水條件等的差異也可能會(huì)導(dǎo)致植物生理性灰分的變化。

2006年和2009年采集的枇杷葉樣品中的浸出物含量分別為12.76%和12.60%，均低于2010年版“藥典”的標(biāo)準(zhǔn)(不得少于18.0%)[1]，卻高于2005年版“藥典”的標(biāo)準(zhǔn)(不得少于10.0%)[9]。除與 “藥典”不同版本灰分測(cè)試方法的差異有關(guān)外，也可能與西山島枇杷葉本身的品質(zhì)有關(guān)。

2006年采集的枇杷葉樣品中的齊墩果酸和熊果酸含量分別為0.247%和1.270%，二者總含量為1.517%；2009年采集的枇杷葉樣品中的齊墩果酸和熊果酸含量分別為0.183%和0.973%，二者總含量為1.157%。這2批枇杷葉樣品中齊墩果酸和熊果酸的總含量均明顯高于相關(guān)藥材的測(cè)試標(biāo)準(zhǔn)(不得少于0.70%[1])，其中2006年采集的樣品中齊墩果酸和熊果酸的總含量是相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)的2倍以上?？梢?jiàn)，西山島產(chǎn)枇杷葉的有效成分含量較高，藥用品質(zhì)較好。

表1 蘇州西山島產(chǎn)枇杷葉中成分含量的比較

參考文獻(xiàn):

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì). 中華人民共和國(guó)藥典: 2010年版(一部) [M]. 北京: 中國(guó)醫(yī)藥科技出版社, 2010: 190-191.

[2] 陳 劍， 李維林， 吳菊蘭， 等. 枇杷葉的化學(xué)成分[J]. 植物資源與環(huán)境學(xué)報(bào), 2006, 15(4): 67-68.

[3] 陳 劍， 李維林， 吳菊蘭， 等. 枇杷葉的化學(xué)成分研究(Ⅰ)[J]. 中草藥, 2006, 37(11): 1632-1634.

[4] 沙 娜, 梁敬鈺. 枇杷葉研究進(jìn)展[J]. 海峽藥學(xué), 2006, 18(1): 6-10.

[5] 呂 寒, 習(xí)超鵬, 陳 劍, 等. 不同產(chǎn)地枇杷葉中三萜酸類(lèi)成分的含量比較[J]. 時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥, 2010, 21(12): 3170-3171.

[6] 呂 寒, 習(xí)超鵬, 陳 劍, 等. 不同生長(zhǎng)季節(jié)枇杷葉中三萜酸成分的含量變化[J]. 中國(guó)中藥雜志, 2009, 34(18): 2353-2355.

[7] 戚雁飛, 李 鯤. 不同采收期枇杷葉的質(zhì)量評(píng)價(jià)及其藥材穩(wěn)定性研究[J]. 中草藥, 2011, 42(6): 1217-1220.

[8] 呂 寒, 習(xí)超鵬, 陳 劍, 等. 不同枇杷葉藥材中三萜和黃酮類(lèi)成分含量的比較[J]. 中成藥, 2009, 31(1): 89-92.

[9] 國(guó)家藥典委員會(huì). 中華人民共和國(guó)藥典: 2005年版(一部) [M]. 北京: 化學(xué)工業(yè)出版社, 2005: 142.