白亞玲，徐金升，張文博，張勝雷，張俊霞，崔立文

（河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院，石家莊 050011）

據(jù)統(tǒng)計(jì)，目前我國慢性腎臟?。–KD）患病率已達(dá)10.8%［1］。隨著年齡的增長，CKD 的發(fā)病率、終末期腎衰竭發(fā)生率及患者病死率均增加，發(fā)病年齡是影響 CKD 預(yù)后的重要因素［2～4］。研究發(fā)現(xiàn)，UMOD基因啟動(dòng)子區(qū)單核苷酸多態(tài)性與CKD的發(fā)病相關(guān)［5，6］;但 UMOD 基因啟動(dòng)子區(qū)的多態(tài)性與CKD患者發(fā)病年齡是否存在相關(guān)性尚不清楚。我們對(duì)2002～2008年確診的89例CKD患者靜脈血UMOD基因啟動(dòng)子區(qū)的多態(tài)性進(jìn)行了檢測，現(xiàn)分析結(jié)果，探討其與CKD發(fā)病年齡的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2002年8月～2008年8月我院收治的CKD患者89例作為病例組，男46例、女43例，年齡（47.9±15.5）歲。均符合 2002年 KDOQI指南CKD診斷標(biāo)準(zhǔn):腎臟損傷指標(biāo)（如蛋白尿、血尿或解剖學(xué)異常）或腎小球?yàn)V過率（GFR）＜60 mL/（min·1.73m2），任一指標(biāo)異常 ＞3個(gè)月。病因包括腎小球腎炎35例、糖尿病腎病18例、高血壓腎損害5例、梗阻性腎病14例、其他17例。以患者首次診斷為CKD時(shí)的年齡為發(fā)病年齡。選擇與病例組年齡、性別相匹配的體檢健康者104例作為對(duì)照組，其中男62例、女42例，年齡（49.8±13.6）歲。兩組年齡、性別比例差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。所有受試者經(jīng)河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)并簽訂知情同意書。

1.2 UMOD基因啟動(dòng)子區(qū)多態(tài)性檢測 采用PCR法。病例組于首次住院清晨、對(duì)照組于體檢時(shí)空腹采血，取靜脈血2 mL，應(yīng)用全血DNA萃取試劑盒迅速提取DNA，于-80℃冰箱保存?zhèn)溆?。根?jù)Ensembl網(wǎng)站提供的 UMOD基因序列（Gene ID:ENSG00000169344）用在線Primer 3軟件設(shè)計(jì)引物，上游引物:5＇-TTTCTCCATCCTGTCCCACT-3＇，下游引物:5＇-ATTCCAACCCAAACTCCC-3＇。用 PCR 儀 擴(kuò)增長481 bp的UMOD基因組DNA片段。PCR反應(yīng)體系為25 μL，包含DNA 125 ng，上下游引物各10 pmol，Master Mix 12.5 μL，DEPC 水7.5 μL。反應(yīng)程序:95℃預(yù)變性2 min，95℃變性30 s，58℃退火30 s，72℃延伸1 min，38個(gè)循環(huán);最后72℃延伸5 min。將PCR反應(yīng)產(chǎn)物送至上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司，采用ABI PRISM 3100 DNA序列分析儀對(duì)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行測序，采用DNAman軟件分析兩組UMOD基因序列，與UMOD標(biāo)準(zhǔn)序列進(jìn)行對(duì)比。比較兩組UMOD基因多態(tài)位點(diǎn)的差異，尋找出與CKD發(fā)病相關(guān)的多態(tài)位點(diǎn)。

1.3 CKD患者UMOD基因啟動(dòng)子區(qū)多態(tài)性及臨床特征與發(fā)病年齡的關(guān)系 根據(jù)基因多態(tài)性測序結(jié)果，將病例組分為攜帶及不攜帶所測多態(tài)位點(diǎn)者，分析所測多態(tài)位點(diǎn)與CKD患者發(fā)病年齡的關(guān)系;收集患者就診時(shí)的性別、吸煙史、體重指數(shù)（BMI）、平均動(dòng)脈壓等臨床資料，分析性別、吸煙史、BMI、平均動(dòng)脈壓與發(fā)病年齡的關(guān)系。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。UMOD基因單核苷酸多態(tài)位點(diǎn)與發(fā)病年齡關(guān)系的分析采用Kaplan-Meier方法，組間比較采用Log-rank檢驗(yàn)，采用COX比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型進(jìn)行多因素分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 UMOD啟動(dòng)子區(qū)基因多態(tài)性 病例組和對(duì)照組共發(fā)現(xiàn)突變位點(diǎn)23個(gè)，其中3個(gè)位點(diǎn)出現(xiàn)頻率大于5%，分別為-1945、-1660、-1617（rs13333226）。病例組、對(duì)照組-1 617（rs13333226）G等位基因的頻率分別為15.7%和6.7%，病例組高于對(duì)照組（P＜0.05）;兩組其余位點(diǎn)的基因多態(tài)性差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.2 CKD患者UMOD基因多態(tài)性及臨床特征與發(fā)病年齡的關(guān)系 病例組攜帶rs13333226A及攜帶rs13333228G者發(fā)病年齡分別為（45.92±15.14）、（58.85±13.78）歲，前者發(fā)病年齡小于后者（P＜0.01）。單因素分析結(jié)果顯示，病例組BMI≥22者發(fā)病年齡＜45歲者的比例高于BMI＜22者，吸煙者發(fā)病年齡＜45歲者的比例高于非吸煙者（P均＜0.05），患者性別及平均動(dòng)脈壓與發(fā)病年齡無相關(guān)性。將單因素分析有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的因素納入多因素COX比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型，結(jié)果顯示 UMOD基因rs13333226的多態(tài)性是CKD患者發(fā)病年齡的獨(dú)立影響因素;OR=0.494，95%CI為 0.268 ～0.913，P＜0.05。

3 討論

CKD起病隱襲，較難早期發(fā)現(xiàn)，呈持續(xù)性進(jìn)展，最終多導(dǎo)致終末期腎衰竭。研究發(fā)現(xiàn)，隨年齡的增長，CKD的發(fā)病率增加，20～39歲CKD的發(fā)病率為4%，≥70歲人群中CKD的發(fā)病率高達(dá)47%［7］;隨年齡的增長，CKD的全因死亡率及心血管死亡風(fēng)險(xiǎn)增加［5，6］。因此CKD發(fā)病年齡是判斷CKD預(yù)后的重要因素;研究CKD發(fā)病年齡的影響因素有助于對(duì)患者發(fā)病時(shí)間的判斷以及病程、發(fā)展和預(yù)后的評(píng)估。

UMOD基因位于人體16號(hào)染色體20 344 374～20 367 623 bp之間，其編碼的蛋白為尿調(diào)節(jié)蛋白。尿調(diào)節(jié)蛋白特異性表達(dá)于腎臟，是生理狀況下人體尿中最多的一種蛋白，正常成人分泌量為20～200 mg/24 h。近年研究發(fā)現(xiàn)，UMOD基因啟動(dòng)子區(qū)的變異與 GFR、血壓、血清中尿酸水平有密切關(guān)系［4～6，8］。歐洲全基因組（GWAS）相關(guān)研究表明，UMOD基因啟動(dòng)子區(qū)的多態(tài)性與CKD發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)及GFR有關(guān)［5，6］。 本研究發(fā)現(xiàn)，病例組-1617（rs13333226）G等位基因的頻率高于對(duì)照組，提示CKD患者rs13333226 G等位基因的頻率增高，rs13333226多態(tài)性在CKD發(fā)病過程中可能發(fā)揮一定作用。

近年研究發(fā)現(xiàn)，隨年齡的增長，CKD發(fā)病率增加［7］。CKD發(fā)病年齡的影響因素除高血壓、糖尿病、吸煙等外，遺傳因素也發(fā)揮重要作用。本研究發(fā)現(xiàn)，攜帶rs13333226G的CKD患者發(fā)病年齡大于攜帶rs13333226A者，BMI≥22的CKD患者發(fā)病年齡＜45歲的比例高于BMI＜22者，吸煙患者發(fā)病年齡＜45歲的比例高于非吸煙者，多因素COX比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型分析顯示，rs13333226的多態(tài)性是CKD患者發(fā)病年齡的獨(dú)立影響因素，攜帶rs13333226GCKD多發(fā)生較晚。Daniel等［9］也發(fā)現(xiàn)UMOD啟動(dòng)子區(qū)多態(tài)性對(duì)高齡患者血肌酐的影響更明顯。尿調(diào)節(jié)蛋白是腎臟特異性蛋白，在腎臟組織中可激活中性粒細(xì)胞、單核巨噬細(xì)胞和成纖維細(xì)胞引起炎癥反應(yīng)，促進(jìn)CKD的發(fā)生及進(jìn)展［10］。近來研究發(fā)現(xiàn)攜帶rs13333226G等位基因者尿中尿調(diào)節(jié)蛋白的含量降低［6］，考慮 UMOD基因啟動(dòng)子區(qū)rs13333226多態(tài)性影響CKD發(fā)病年齡的機(jī)制可能是調(diào)節(jié)尿調(diào)節(jié)蛋白的合成。

綜上所述，UMOD基因啟動(dòng)子區(qū)rs13333226的多態(tài)性與CKD發(fā)病年齡相關(guān)，攜帶rs13333226A的CKD患者發(fā)病年齡小于攜帶 rs13333226G者。UMOD基因啟動(dòng)子區(qū)的多態(tài)性可作為CKD發(fā)病年齡的預(yù)測指標(biāo)。但本研究受樣本例數(shù)及受檢者種族、地區(qū)的限制，UMOD基因啟動(dòng)子區(qū)的多態(tài)性能否作為CKD患者發(fā)病年齡的獨(dú)立預(yù)測因子，還有待大樣本的研究進(jìn)一步驗(yàn)證。

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