孫 麗，譚艷紅（.伊春市紅星中學(xué)，黑龍江伊春53035；2.北京大學(xué)化學(xué)與分子工程學(xué)院，北京0087）

保健食品非法添加物檢測技術(shù)研究進(jìn)展

孫 麗1，譚艷紅2，*
（1.伊春市紅星中學(xué)，黑龍江伊春153035；2.北京大學(xué)化學(xué)與分子工程學(xué)院，北京100871）

保健食品是適用于特定人群食用，具有調(diào)節(jié)作用，不以治療疾病為目的的食品。本文對近年來我國保健食品中非法添加物現(xiàn)狀、安全性和具體的檢測技術(shù)加以系統(tǒng)整理、分析和總結(jié)，為規(guī)范保健食品技術(shù)評審和探索快速、有效的檢測方法提供參考。

保健食品，安全性，非法添加物，檢測技術(shù)

隨著社會經(jīng)濟(jì)的發(fā)展與人們生活水平的提高，人們對健康和長壽的追求促使能讓人延年益壽、健康成長的特殊食品成為當(dāng)今和未來食品研究所追求的目標(biāo)。GB16740-97《保健（功能）食品通用標(biāo)準(zhǔn)》第3.1條將保健食品定義為：適用于特定人群食用，具有調(diào)節(jié)作用，不以治療疾病為目的的食品[1，14]。從目前己審批的保健食品來看，進(jìn)口保健食品的功效成分主要為魚油、磷脂類和各種膳食補(bǔ)充劑，如維生素、多不飽和脂肪酸、類胡蘿卜素等；國產(chǎn)保健食品主要是含多糖類、皂貳類、黃酮類成分和以草本植物為原料的保健食品[2]。

按照《保健食品管理辦法》的要求，企業(yè)在申報保健食品時應(yīng)提供產(chǎn)品的功效成分和功效成分的定性、定量測定方法[3]。但在保健食品的實(shí)際檢測中，大多存在成分較為復(fù)雜，功效成分具有多種結(jié)構(gòu)、生理活性不一、缺乏統(tǒng)一的對照標(biāo)準(zhǔn)和對照標(biāo)準(zhǔn)品、基質(zhì)干擾嚴(yán)重、難以進(jìn)行有效質(zhì)量控制等問題。為了保證保健食品的安全性、有效性和可靠性，保健食品檢測、鑒定技術(shù)方面的研究也得到了迅速的發(fā)展；但不同的方法在樣本的選擇，檢測結(jié)果的重復(fù)性，靈敏性，以及定量性都存在一定的不足。本文綜述了保健食品非法添加物檢測技術(shù)，分析了目前使用較多的保健食品方法、特點(diǎn)和不足，并對保健食品快速，有效檢測技術(shù)的發(fā)展進(jìn)行了展望。

1 保健食品的現(xiàn)狀及安全性問題

近幾年來，盡管國家衛(wèi)生監(jiān)督機(jī)構(gòu)加大力度對保健食品審核批準(zhǔn)、抽樣檢測和調(diào)查取證，但違禁添加藥物的現(xiàn)象仍然屢禁不止，如降糖類保健品中添加格列齊特；抗疲勞保健食品中添加西地那非、他達(dá)那非；改善睡眠類保健品中添加安定類藥物；減肥類保健食品中添加西布曲明等[4-5]。其添加的形式和手段也由過去單一的較大量添加某一類或某幾種治療用化學(xué)藥物轉(zhuǎn)變?yōu)樘砑右环N或多種非治療藥物或己被淘汰藥物或其治療藥物結(jié)構(gòu)改造物；添加尚未獲得批準(zhǔn)的新型藥物或先導(dǎo)化合物[6]，甚至很多在學(xué)術(shù)期刊上發(fā)表的前期研究結(jié)果；或添加天然植物化學(xué)品；或有意識的降低單一某種藥物含量，混合添加多種治療藥物；或者采取“證后”添加：即在取得保健食品批文后再在上市產(chǎn)品中違法加入[7]；或者利用劑型的特點(diǎn)，將違禁藥物添加到膠囊殼中以逃避檢測[8]。因此，建立更全面快速，并準(zhǔn)確可靠的違禁藥物篩選方法，來應(yīng)對不法分子的投機(jī)行為，在各個環(huán)節(jié)起到切實(shí)把關(guān)的作用，可預(yù)防和監(jiān)督保健食品進(jìn)入市場后導(dǎo)致的不良事件發(fā)生，確保保健食品的安全性。

2 保健食品中非法添加物檢測技術(shù)

2.1 酶聯(lián)免疫吸附（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）

ELISA是抗原抗體的免疫反應(yīng)為基礎(chǔ)，利用酶作用于底物后的顯色反應(yīng)，借助于比色或熒光反應(yīng)進(jìn)行鑒定。通過檢測轉(zhuǎn)基因作物表達(dá)的外源蛋白的抗體與被檢測樣品中的外源蛋白結(jié)合，再結(jié)合酶標(biāo)抗體或酶標(biāo)抗抗體，加入底物后通過酶促反應(yīng)形成有色物質(zhì)，根據(jù)顏色的深淺或酶聯(lián)儀檢測的結(jié)果判斷是否為陽性。

眾所周知，在我國黃原膠被允許作為食品添加劑而限量添加，在歐盟被允許作為食品的穩(wěn)定劑和乳化劑而限量添加[9]。又由于黃原膠能夠增加食品的粘稠度，形成膠體，所以不少不法食品生產(chǎn)企業(yè)以牟取暴利為目的，向保健食品中違規(guī)過量添加黃原膠等水溶膠。秦紅梅等[10]用酶聯(lián)免疫吸附法對保健食品中的黃原膠等水溶膠進(jìn)行了檢測，該方法簡易、節(jié)約（已被用于區(qū)分一些不同的膠體[11]），亦可降低食品中復(fù)雜的基質(zhì)對分析方法的干擾。

2.2 紅外及近紅外光譜法（IR/NIR）

紅外光譜法又稱“紅外分光光度分析法”，是分子吸收光譜的一種，傳統(tǒng)的中紅外光譜技術(shù)主要用于定性分析，采集了成千上萬種已知化合物的紅外光譜存入計算機(jī)中，編成紅外光譜標(biāo)準(zhǔn)譜圖庫。只需把測得未知物的紅外光譜與標(biāo)準(zhǔn)庫中的光譜進(jìn)行比對，即可鑒定化合物中各種原子團(tuán)，迅速判定未知化合物的成分，判定是否存在非法添加物。

化學(xué)方法和核磁共振方法是定性定量測定保健品中特殊成分的兩種經(jīng)典方法，但這些方法需要大量高純度的樣品，而且結(jié)果分析困難。應(yīng)用紅外光譜技術(shù)，在糖序列型分析和結(jié)構(gòu)鑒定研究中起著十分重要的作用[12]。羅建波等[13]利用紅外光譜外標(biāo)定量法作為甲殼素類保健食品功能成分檢測的手段之一。

近紅外光譜技術(shù)由于具有操作簡便、分析速度快、不損傷樣品等特點(diǎn)，已經(jīng)逐漸成為分析領(lǐng)域的熱點(diǎn)技術(shù)，近年來在藥物分析領(lǐng)域被廣泛應(yīng)用[14-15]。該方法是一種快速篩查保健食品中非法添加物的方法，但一般只用于定性，若用于定量則誤差較大。

2.3 核磁共振（NMR）

由于核磁共振技術(shù)在有機(jī)化合物分子結(jié)構(gòu)解析方面的優(yōu)勢，因此其在藥物質(zhì)量控制領(lǐng)域中也得到了極大的應(yīng)用。核磁共振技術(shù)的測定過程簡單、分析快速，可以進(jìn)行定性和定量分析，在藥物的質(zhì)量控制如組分鑒定、雜質(zhì)鑒定、藥物含量分析等項(xiàng)目中應(yīng)用日趨廣泛[16-17]。該技術(shù)以其重現(xiàn)性好，特征性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)已成為藥物研究的重要手段。Wawer等[28]通過采集1H，13C，15N核磁共振圖數(shù)據(jù)，從而對偉哥中非法添加物西地那非進(jìn)行鑒定以及結(jié)構(gòu)表征，結(jié)果顯示固相13C NMR方法能夠準(zhǔn)確快速對含有西地那非的保健食品進(jìn)行定性定量檢測。

2.4 高效液相色譜和高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（high performance liquid chromatography，HPLC and high performance liquid chromatography-mass spectrometry，HPLC-MS/MS）

高效液相色譜和高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)在保健食品中非法添加物的檢測方面應(yīng)用比較廣泛[19]。肖晶等用Hypersil0DS色譜柱（4.6mm×250mm，5μm），以乙腈—0.05mol/L磷酸二氫鉀（15∶85，pH3.5）為流動相，在200nm波長下，對保健食品中生物素含量進(jìn)行了檢測[18]。之后，劉加慶等用高效液相色譜儀，以乙腈—0.05mol/L磷酸二氫鉀為流動相，在215nm條件下對糖蜜中的生物素進(jìn)行檢測，確定其生物素含量為37.865mg/kg[20]。高效液相色譜法是目前檢測保健品中西地那非及其類似物的常用方法[21-23]。

HPLC-MS是將色譜的分離能力與高分辨質(zhì)譜的表征能力相結(jié)合，非常適合復(fù)雜活性成分、痕量物質(zhì)的分析[24]。楊路平等[25]使用Agilent 1100液相色譜和離子阱質(zhì)譜聯(lián)用，ESI源，C18柱梯度洗脫方法快速鑒定減肥類保健食品中咖啡因、鹽酸麻黃堿、鹽酸芬氟拉明和鹽酸西布曲明等12種市售減肥保健食品中的4種違禁添加藥物。該方法簡便快速，專屬性好。

2.5 毛細(xì)管電泳法（capillary electrophoresis，CE）

毛細(xì)管電泳具有多種分析模式和檢測方法，可以滿足食品復(fù)雜成分的分析要求，目前該法在食品著色劑、防腐劑、藥物殘留、抗生素等的檢測中均有應(yīng)用。楊桂君等[26]建立了CE法同時測定亮藍(lán)、香蘭素、山梨酸、苯甲酸、日落黃、新紅、覓菜紅、檸檬黃8種食品添加劑的分析方法，并對飲料、果凍、蜜餞等樣品進(jìn)行檢測，一次進(jìn)樣分析在8min內(nèi)完成，檢測限為0.25～10μg/mL。CE法具有速度快、效率高、試劑和樣品用量少、對環(huán)境污染小等優(yōu)點(diǎn)，是目前發(fā)展最為迅速的分離分析技術(shù)之一。衛(wèi)生部公告中的食品非法添加物如玫瑰紅B，堿性嫩黃、堿性黃等目前沒有國家標(biāo)準(zhǔn)方法，可以研究開發(fā)以CE方法為基礎(chǔ)的檢測方法。例如：枸櫞酸西地那非（Sildenafil citrate）[27]，簡稱西地那非是萬艾可（又稱偉哥）的主要活性藥物成分。目前該藥是屬于國家二類精神藥管理范圍，已知其主要副作用有面部潮紅、鼻塞、頭痛及視覺異常[28]，嚴(yán)重會導(dǎo)致死亡。Qin等[29]通過固相萃取和毛細(xì)管電泳-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)，檢測人血清中的西地那非及其代謝物UK-103，320（UK）。

2.6 直接進(jìn)樣分析技術(shù)（AxION Direct Sample Analysis，DSA）

謝永明博士發(fā)明的直接進(jìn)樣分析技術(shù)在質(zhì)譜樣品引入方式上突破性地提供了可代替前端氣相或者液相分離系統(tǒng)的選擇，可直接快速分析固、液、氣態(tài)樣品，而無需色譜分離，無需復(fù)雜的樣品前處理，極大提高分析工作效率。DSA的快速簡單的操作與高分辨飛行時間質(zhì)譜技術(shù)結(jié)合，幾秒即可獲得高分辨率、高準(zhǔn)確度的高質(zhì)量數(shù)據(jù)和結(jié)果。通過配套的定制軟件和相應(yīng)的工作流程，既可以通過譜庫檢索進(jìn)行未知樣品的快速篩選及鑒定，又可以對樣品中目標(biāo)化合物進(jìn)行定量篩查和分析。該技術(shù)在保健食品安全工作中有著獨(dú)特的優(yōu)勢和應(yīng)用。

2.7 快速指紋篩查與同位素檢測技術(shù)

傳統(tǒng)的食品檢測技術(shù)檢測速度緩慢，準(zhǔn)確性和便捷性也不如人意。上海糖酒集團(tuán)、上海海洋大學(xué)、上?；W(xué)院“產(chǎn)、學(xué)、研”戰(zhàn)略合作而推廣應(yīng)用“食品非法添加物快速指紋篩查與同位素檢測技術(shù)”后，可對28個大類、5000多種非法添加物進(jìn)行即時檢測，既顯著擴(kuò)大了受檢品種，也大大提高了檢測效率。

食品非法添加物快速指紋篩查與同位素檢測技術(shù)以往僅用于機(jī)場等安檢領(lǐng)域，三方根據(jù)食品檢測的特殊要求進(jìn)行技術(shù)創(chuàng)新，按照國家公布的食品中違法添加物名單及可能有害物質(zhì)而建立非法添加物譜圖庫，品種超過5000種，并研發(fā)快速篩查、識別軟件系統(tǒng)，在實(shí)際進(jìn)行食品檢測過程中，可以直接關(guān)聯(lián)、調(diào)用上述譜圖庫，應(yīng)用于28個大類的食品檢測。這是該項(xiàng)技術(shù)首次直接用于食品安全檢測領(lǐng)域。

3 展望

隨著生產(chǎn)和生活水平的迅速提高，人們更注重對疾病的預(yù)防和亞健康狀態(tài)的調(diào)整，保健食品將有更大的發(fā)展和市場前景，有大量的品種可以研究和開發(fā)。保健食品的安全性，建立保健食品安全性的監(jiān)測體系顯得尤為重要。上述方法雖然有快速，簡便，靈敏度高等特點(diǎn)，但只適用于實(shí)驗(yàn)室檢測，一般消費(fèi)者做不到，因此不具大眾普遍性。筆者認(rèn)為，不但要在已有的檢測基礎(chǔ)上，加強(qiáng)國際合作和交流，引入國際上相關(guān)的檢測技術(shù)，不斷完善對我國保健食品的質(zhì)量控制和功能測試方法，使其更好的為我國保健品檢測服務(wù)。更要求科研工作者發(fā)明更簡便易行的檢測方法或檢測儀器讓消費(fèi)者在家里便可對所買產(chǎn)品進(jìn)行檢測，這樣才能真正做到吃的放心，減少在不知情的情況下誤服有非法添加劑的保健品的危害。

[1]Kharaeva Z，Gostova E，De Luca C，et al.Clinical and biochemical effects of coenzyme Q（10），vitamin E，and selenium supplementation to psoriasis patients[J].Nutrition，2009，25（3）：295-302

[2]周素娟.我國保健食品原料數(shù)據(jù)庫的建立及中藥在保健食品中的應(yīng)用研究[D].北京：中國中醫(yī)科學(xué)院，2007：1-103.

[3]國家食品藥品監(jiān)督管理局.保健食品管理辦法（試行）[Z]. 2005-04-30.

[4]孫鑫貴，趙榕，張正，等.減肥、緩解體力疲勞和輔助降血糖類保健食品違法添加藥物狀況調(diào)查[J].中國食品衛(wèi)生雜志，2010，22（5）：450-452.

[5]Y L Lu，N L Zhou，S Y Liao，et al.Detection of adulteration of anti-hypertension dietary supplements and traditional Chinese medicines with synthetic drugs using LC/MS[J].Food Additives &Contaminants：Part A，2010，20（7）：893-902.

[6]J C Reepmeyer，J T Woodruf.Use of liquid chromatographymass spectrometry and a hydrolytic technique for the detection and structure elucidation of a novel synthetic vardenafil designer drug added illegally to a“natural”herbal dietary supplementy [J].Chromatogr A，2006，1125：67-75.

[7]馬微，馬麗卿，付麗，等.減肥類保健食品中添加違禁藥物的研究現(xiàn)狀[J].中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2009，19（12）：3023-3026.

[8]W S Pang，H W Yang，Z S Wu，et al.LC-MS-MS in MRM mode for detection and structural identification of synthetic hypoglycemic drug added illegally to‘natural’anti-diabetic herbal products[J].Chromatographia，2009，70：1353-1359.

[9]UK FSA.Current EU approved additives and their E Numbers [EB/OL].[2007-07-27]http：//www.food.gov.uk/safereating/chemsafe/ additivesbranch/enumberlist.

[10]秦紅梅，黃飚，鄭劍玲，等.間接競爭酶聯(lián)免疫吸附法測定黃原膠[J].中國食品衛(wèi)生雜質(zhì)，2008，20（3）：241-243.

[11]PICKLES N A，IRELAND H E，SL-ASSAF S，et al.Applications of immunoassay in hydrocolloid research[C].// Gums and stabilizers for the food industry：Designing struchure into Foods.Royal Society of Chemistry，United Kingdom，2004.

[12]劉嘉俊.紅外及近紅外光譜技術(shù)在食品分析檢測中的應(yīng)用進(jìn)展[J].食品工程，2009（2）：57-59.

[13]羅建波.紅外光譜法測定保健食品中殼聚糖含量[J].華南預(yù)防醫(yī)學(xué)，2002，28（5）：48.

[14]Chu Xiao-Li，Yu-Peng，Lu Wan-Zhen.Research and application progress of chemometrics methods in near infrared spectroscopic analysis[J].Chinese J Anal Chem，2008，36（5）：702-709.

[15]Luypaert J，Massart DL，Vander-Heyden Y.Near-infrared spectroscopy applications in pharmaceutical analysis[J].Talanta，2007，72（3）：865-883.

[16]Yi-Zeng Lianga，Peishan Xieb，Kelvin Chanc.Quality control of herbal medicines[J].J Chromatogr B，2004，812：53-70.

[17]陳合兵.核磁共振技術(shù)在藥物定量分析和結(jié)構(gòu)鑒定中的應(yīng)用[D].北京：中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院，2011.

[18]Wawer I，Pisklak M.1H，13C，15N NMR analysis of sildenafil base and citrate（Viagra）in solution，solid state and pharmaceutical dosage forms[J].J Pharm Biomed Anal，2005，38：865-870.

[19]何琳，王凌.色譜技術(shù)在檢測中成藥和保健食品中非法添加化學(xué)物質(zhì)的應(yīng)用研究進(jìn)展[J].安徽醫(yī)藥，2011，15（10）：1306-1309. [20]肖晶，楊大進(jìn)，張馨之.高效液相色譜法測定保健食品中的生物素[J].中國食品衛(wèi)生雜質(zhì)，2006，18（3）：234-236.

[21]劉加慶，周麗，田勇.HPLC檢測生物素的方法研究[J].發(fā)酵科技通訊，2008，37（2）：17-21.

[22]Zou P，Oh SSY，Hou P，et al.Simultaneous determination of synthetic phosphor-diesterase-5 inhibitors found in a dietary supplement and pre-mixed bulk powders for dietary supplements using high-performance liquid chromatography with diode array detection and liquid chromatography[J].J Chromatogr A，2006，1104（1-2）：113.

[23]Guermouche MH，Bensalah K.Solid phase extraction and liquid chromatographic determination of sildenafil and N-demethyl sidenafil in rat serum with basic mobile phase[J].J Pharm Biomed Anal，2006，40（4）：952.

[24]Kim J，Ji HY，Kim SJ，et al.Simultaneous determination of sildenafil and its active metabolite Uk-103，320 in human plasma using liquid chromatography/tandem mass spectrometry [J].J Pharm Biomed Anal，2003，32（2）：317.

[25]楊路平，王國玲，焦燕妮.液質(zhì)聯(lián)用快速鑒定減肥類保健食品中4種違禁添加藥物[J].中國食品衛(wèi)生雜志，2011，23（4）：320-321.

[26]楊桂君.高文惠毛細(xì)管電泳法測定食品中8種添加劑[J].食品科學(xué)，2010，31（8）：377-380.

[27]國家藥典會編.《國家藥品標(biāo)準(zhǔn)》（第一冊）[S].2002：9.

[28]McCulley TJ，Luu JK，Marmor MF，et al.Effects of sildenafil citrate（Viagra）on choroidal congestion[J].Ophthalmologica，2002，216（6）：455-458.

[29]Qin WD，Li SFY.An ionic liquid coating for determination of sildenafil and UK-103，320 in human serum by capillary zone electrophoresis-ion trap mass spectrometry[J].Electrophoresis，2002，23：4110-4116.

Research progress in the detection technology of health food

SUN Li1，TAN Yan-hong2，*
（1.Yichun Hongxing Middle School，Yichun 153035，China；2.College of Chemistry and Molecular Engineering，Peking University，Beijing 100871，China）

Health food is defined as specific food.It a kind of food used for specific people.It has a regulatory role but not can treat the disease.In this paper，the status of illegal additives，safety and specific detection technology about China’s health food in recent years was analyzed and summarized.In order to provide a reference to technical evaluation standard，explored and detected health food fastly and effectively.

health food；security；illegal additives；detect technology

TS201.1

A

1002-0306（2014）12-0398-04

10.13386/j.issn1002-0306.2014.12.078

2013－02－24 *通訊聯(lián)系人

孫麗（1984-），女，大學(xué)本科，研究方向：化學(xué)教育。