李 婷 胡 陽陳向明 張海清 俞愛華 王國江

5種食物對小鼠接觸性炎癥反應(yīng)及血清IL－4和IL－17的影響

李 婷 胡 陽?陳向明 張海清 俞愛華 王國江

目的: 明確香菇、辣椒、帶魚、羊肉和海蝦5種食物對慢性變應(yīng)性接觸性皮炎(CACD)小鼠模型炎癥反應(yīng)及血清IL－4和IL－17表達(dá)的影響。方法: 36只小鼠用2，4－二硝基氟苯誘導(dǎo)建立CACD模型，5種食物煎煮后灌胃，對照組予純水灌胃。測量每組耳厚度和耳重量并用ELISA檢測血清IL－4和IL－17水平。結(jié)果: 與對照組相比，辣椒和羊肉明顯增加耳厚度、耳重量和血清IL－17水平(P＜0.05)；帶魚和海蝦對小鼠耳厚度和耳重量無明顯影響(P＞0.05)，但顯著下調(diào)血清IL－4水平(P＜0.05)；香菇對各項指標(biāo)均無影響(P＞0.05)。結(jié)論: 辣椒和羊肉可能通過上調(diào)血清IL－17水平加重CACD小鼠模型炎癥反應(yīng)。

慢性變應(yīng)性接觸性皮炎； 耳厚度； 耳重量； 細(xì)胞因子

中醫(yī)將容易激發(fā)宿疾復(fù)發(fā)或加重現(xiàn)有疾病的食物稱為“發(fā)物”，且十分重視對“發(fā)物”的忌口，但“發(fā)物”忌口常受西醫(yī)質(zhì)疑。香菇、辣椒、帶魚、羊肉和海蝦是常用食物，同時也是中醫(yī)傳統(tǒng)認(rèn)為的“發(fā)物”。1本實(shí)驗(yàn)觀察其對慢性ACD小鼠模型的影響，為臨床過敏性患者忌口提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)?，F(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料 實(shí)驗(yàn)動物為6～8周齡清潔級，體重18～22 g的雌性BALB/C小鼠，由上海斯萊克動物中心提供，實(shí)驗(yàn)動物合格證號:scxk(滬)2008－0016。在一定的溫度和濕度環(huán)境中，光照12 h，黑暗12 h，標(biāo)準(zhǔn)飼料喂養(yǎng)1周后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。2，4二硝基氟苯購自上?；瘜W(xué)試劑公司，丙酮購自上海試劑廠。小鼠IL－4和IL－17 ELISA試劑盒購自美國R＆D公司(批號20121102)。電子分析天平(FA1004)購自上海精密科學(xué)儀器有限公司，直徑8 mm的圓形皮膚打孔器購于上海市醫(yī)療器械公司，數(shù)顯游標(biāo)卡尺購自上海量具刃具廠，酶標(biāo)儀(型號ELX－800)購自BIO－TEK公司。香菇、辣椒、帶魚、羊肉和海蝦各500克，分別加純水煎煮并濃縮至2 g/mL，置4℃保存，5天內(nèi)用完，灌胃前加熱至25℃。

1.2 方法

1.2.1 建立CACD小鼠模型 參照文獻(xiàn)，2第1次涂藥前24 h(第0天)，小鼠腹部剃毛，面積約3 cm2，實(shí)驗(yàn)第1天在去毛部位涂0.5%DNFB(溶劑為丙酮∶橄欖油＝4∶1的混合液)20μL致敏，實(shí)驗(yàn)第6天、第13天、第20天和第27天在小鼠右耳內(nèi)外側(cè)涂0.2%DNFB 10μL各1次，共4次激發(fā)。

1.2.2 實(shí)驗(yàn)分組及喂食發(fā)物 36只小鼠致敏后隨機(jī)分成6組，分別為香菇組、辣椒組、帶魚組、羊肉組、海蝦組及對照組，每組6只，從第26天開始，分別對發(fā)物各組灌胃對應(yīng)食物煎煮液；對照組予純水灌胃，每日2次，每次量以0.2 m L/10 g計算。另有6只健康小鼠不做任何處理，作為空白組。第29天處死各組小鼠取材備用。

1.3 觀察指標(biāo)及方法

1.3.1 用電子數(shù)顯卡尺測量小鼠左、右耳中部的厚度，每只耳朵測量3次，取平均值，計算左右耳厚度差。

1.3.2 耳重量 處死小鼠后，用直徑8 mm的打孔器，分別鉆取小鼠左、右耳中部的組織，用電子天平稱重，計算左右耳重量差。

1.3.3 細(xì)胞因子 眼眶采血法取小鼠血液1 mL，凝血后離心分離血清，使用酶免疫法測定血清細(xì)胞因子，檢測步驟按試劑盒說明書進(jìn)行，將反應(yīng)板放入酶標(biāo)儀于450 nm波長處測各孔吸光值，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算各孔IL－4和IL－17的濃度值(單位為pg/mL)。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 16.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行one－way ANOVA分析，所有數(shù)據(jù)采用ˉx±s表示，以P＜0.05表示有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 第4次激發(fā)后48 h，肉眼觀察小鼠右耳皮膚炎癥反應(yīng)明顯，表現(xiàn)為紅腫、糜爛、滲出、結(jié)痂。

2.2 各組小鼠耳厚度及耳重量 辣椒組和羊肉組的耳厚度差和耳重量差明顯高于對照組(P＜0.05)。其余各組與對照組之間無統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)，見表1。

表1 各組耳厚度差和耳重量差的比較

2.2 各組小鼠血清IL－4和IL－17水平 對照組、香菇組、辣椒組、帶魚組、羊肉組、海蝦組和空白組的IL－4的水平分別為171.50±3.30、176.09±5.86、177.23± 4.80、163.50±3.32、166.11±1.98、161.49±4.78和137.74±9.28；IL－17的水平分別為78.11±2.93、80.78 ±4.43、87.59±4.49、76.52±1.99、90.66±0.47、75.70± 4.06和63.00±2.35。與空白組比較，各組的血清IL－4和IL－17水平均顯著升高(P＜0.05)。與對照組比較，辣椒組和羊肉組IL－17水平顯著升高(P＜0.05)，IL－4水平無明顯差異(P＞0.05)；帶魚組和海蝦組IL－4水平明顯下降(P＜0.05)，IL－17水平無明顯差異(P＞0.05)；香菇組的IL－4和IL－17水平均無明顯差異(P＞0.05)。

3 討論

從本研究結(jié)果來看，辣椒、羊肉耳廓炎癥腫脹明顯，其耳厚度差、耳重量差顯著高于對照組。帶魚、海蝦、香菇對小鼠耳廓炎癥反應(yīng)無明顯影響。5種“發(fā)物”各自所含的某些成分可能對慢性皮炎的發(fā)生發(fā)展有一定的影響。國外學(xué)者從食物成分分析認(rèn)為花生四烯酸、前列腺素等變應(yīng)性活性介質(zhì)會加重過敏性疾病，相反n－3不飽和脂肪酸有利于過敏性疾病康復(fù)。3羊肉、帶魚和海蝦均為高脂肪食物，n－3多不飽和脂肪酸含量低而花生四烯酸含量較高，4相反水生生物的帶魚和海蝦含有豐富的n－3多不飽和脂肪酸；3辣椒和香菇為低脂肪食物，但辣椒中辣椒素可導(dǎo)致血管擴(kuò)張等神經(jīng)源性炎癥效應(yīng)，5香菇中的香菇多糖具有免疫調(diào)節(jié)作用。6

多次外用半抗原刺激小鼠皮膚或耳組織，皮膚炎癥反應(yīng)從以Th1占優(yōu)勢的免疫反應(yīng)轉(zhuǎn)為以Th2為主的慢性炎癥反應(yīng)，類似人類AD。2，7外周血和皮損中Th2細(xì)胞亞群占優(yōu)勢是慢性皮炎發(fā)病重要機(jī)制之一，新近發(fā)現(xiàn)的Th17細(xì)胞在慢性皮炎的發(fā)生發(fā)展中也同樣發(fā)揮著重要作用。8IL－4為Th2型細(xì)胞因子，持續(xù)高表達(dá)會加重慢性皮炎皮損炎癥反應(yīng)，8IL－17是Th17細(xì)胞產(chǎn)生的主要細(xì)胞因子，能誘導(dǎo)角質(zhì)形成細(xì)胞產(chǎn)生多種炎性因子，調(diào)節(jié)趨化因子及黏附分子表達(dá)，促進(jìn)中性粒細(xì)胞活化和向炎癥部位募集，加重局部炎癥反應(yīng)。8本實(shí)驗(yàn)參照文獻(xiàn)制作了小鼠CACD模型，我們發(fā)現(xiàn)該模型血清IL－4和IL－17水平較造模前明顯升高，說明造模成功。本研究還顯示辣椒組和羊肉組小鼠血清IL－17水平較對照組明顯升高，IL－4水平與對照組之間差異不明顯，推測辣椒、羊肉可能通過上調(diào)IL－17表達(dá)來加重小鼠慢性炎癥反應(yīng)。

1何以蓓，湯軍.中醫(yī)“發(fā)物”的概念、分類及其臨床意義.浙江中西醫(yī)結(jié)合雜志，2009，19(11):674－676.

2Morioka Y，Yamasaki K，Leung D，etal.Cathelicidin antimicrobial peptides inhibit hyaluronan－induced cytokine release and modulate chronic allergic dermatitis.J Immunol，2008，181(6): 3915－3922.

3 Devereux G，Seaton A.Diet as a risk factor for atopy and asthma.Allergy Clin Immunol，2005，115(6):1109－1117.

4羅建學(xué).羊肉脂肪酸的研究概況.肉類研究，2010，(1):12－15.

5梁晨，韓盛璽.辣椒素臨床應(yīng)用的研究進(jìn)展.華西藥學(xué)雜志，2008，23(2):185－187.

6張海嵐，周建平，邊洪榮.香菇有效成分研究綜述.華北煤炭醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2004，6(1):35－36.

7 Jin H，He R，OyoshiM，etal.Animalmodelsof atopic dermatitis.J Invest Dermatol，2009，129(1):31－40.

8 Yamanaka K，Mizutani H.The role of cytokines/chemokines in the pathogenesisof atopic dermatitis.Curr Probl Dermatol，2011，41:80－92.

(收稿:2014－03－31)

Effects of five foods on the inflammatory reaction and IL－4，IL－17 in m icemodel of CACD

LITing，HU Yang，CHEN Xiang-ming，et al.Department of Dermatology，Nanxiang Hospital of Jiading，Shanghai，201802

Objective:To determine the effects ofmushroom，chillies，ribbonfish，mutton and sea shrimp on contact dermatitis inmicemodel.Methods:The contact dermatitismodel was constructed by DNFB.The mice were divided into 5 groups and fed with the soup of5 foods by gavage and themice in control group were fed with water.Ear thickness and weightweremeasured.The levels of IL－4 and IL－17 in serum were detected by ELISA.Results:Compared with control group，the ear thickness and weight，and the levels of IL－17 were increased in the chillies group andmutton group(P＜0.05).Therewas no changes in ear thickness and weight in ribbonfish and sea shrimp group，but the level of IL－4 decreased(P＜0.05).There were no significant differences in the ear thickness and ear weight changes，and the serum levels of IL－4 and IL－17 between mushroom group and control group(P＞0.05).Conclusion:Chillies andmuttonmay aggravate the inflammatory reaction in contact dermatitis by upregulating IL－17 expression.

chronic allergic contact dermatitis；ear thickness；ear weight；cytokine

上海市嘉定區(qū)科委課題(編號:2010019)

上海市醫(yī)學(xué)重點(diǎn)?？艬類建設(shè)項目(編號:ZK2012B18)

上海市嘉定區(qū)南翔醫(yī)院，201802

?通信作者