史永儉 劉園園 劉 瑛 張春敏

NB－UVB照射對白癜風(fēng)皮損區(qū)IL－6、IL－18、TNF－α以及slCAM－1水平的影響

史永儉 劉園園 劉 瑛 張春敏

目的: 確定NB－UVB照射對白癜風(fēng)局部皮損組織液細(xì)胞因子IL－6、IL－18、TNF－α以及sl-CAM－1水平的影響。方法: NB－UVB照射白癜風(fēng)皮損區(qū)30次,采用ELISA法檢測白癜風(fēng)患者NBUVB照射前后局部皮損組織液中IL－6、IL－18、TNF－α以及slCAM－1水平。結(jié)果: 皮損區(qū)組織液中IL－6為0.316±0.237 ng/mL,低于健康人群,IL－18為0.925±0.419 ng/mL、TNF－α為1.012±0.473 ng/ mL、slCAM－1為1.162±0.386 ng/mL,均高于健康人群。經(jīng)NB－UVB照射后,復(fù)色區(qū)各細(xì)胞因子水平基本恢復(fù)正常。結(jié)論: NB－UVB可能通過對細(xì)胞因子的調(diào)節(jié)起到治療白癜風(fēng)的作用。

白癜風(fēng)； 細(xì)胞因子； 窄譜中波紫外線

越來越多的研究表明白癜風(fēng)患者皮損處存在局部免疫狀態(tài)的改變,病灶局部微環(huán)境中細(xì)胞免疫狀態(tài)與其發(fā)生發(fā)展密切相關(guān),1皮損部位活化的各種T細(xì)胞浸潤、抗MC抗體以及CD8＋的CTL介導(dǎo)的細(xì)胞免疫反應(yīng)等均能影響白癜風(fēng)的發(fā)生。2,3另外機(jī)體的免疫效應(yīng)大部分通過細(xì)胞因子介導(dǎo),是近年來研究的熱點(diǎn)之一。B－淋巴細(xì)胞激活因子4、IL－175、IFN－γ6、TNF－α6、slCAM－17等多個(gè)細(xì)胞因子可能參與了白癜風(fēng)的發(fā)病。目前,國內(nèi)外對白癜風(fēng)患者血清相關(guān)細(xì)胞因子水平變化的研究較多,發(fā)現(xiàn)多種細(xì)胞因子參與了白癜風(fēng)的發(fā)生過程,但對局部皮損處的研究較少。我們試圖通過研究皮損處幾種相關(guān)細(xì)胞因子水平的變化從一個(gè)側(cè)面證實(shí)白癜風(fēng)患者存在局部免疫狀態(tài)異常,希望對揭示白癜風(fēng)的發(fā)病機(jī)制有所幫助。國內(nèi)研究8發(fā)現(xiàn)窄譜中波紫外線照射能降低白癜風(fēng)患者局部皮損處IL－4、IFN－γ的水平,但其研究的細(xì)胞因子較少,照射時(shí)間較短,不能全面反映窄譜中波紫外線對局部皮損處細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)的影響。我們的研究期望能進(jìn)一步了解窄譜中波紫外線照射能否通過調(diào)節(jié)多種細(xì)胞因子水平,恢復(fù)白癜風(fēng)患者局部免疫狀態(tài)平衡,從而進(jìn)一步為窄譜中波紫外線治療白癜風(fēng)提供免疫學(xué)依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 所有患者均為2011年9月至2013年6月在我科就診的進(jìn)展期白癜風(fēng)患者。其中男15例,女9例；年齡19～45歲,平均26.50±9.36歲；病程2個(gè)月～5年,平均2.25±1.68年。其中尋常型18例,局限型11例,泛發(fā)型7例,節(jié)段型6例。所有患者未進(jìn)行紫外線治療,皮損處1個(gè)月內(nèi)未使用外用藥物,3個(gè)月內(nèi)未應(yīng)用系統(tǒng)藥物治療。皮膚無炎癥,無系統(tǒng)疾病及光敏性皮膚病。另選15名正常人為健康對照組,男9名,女6名,年齡20～42歲,平均28.42±8.78歲。所有患者均知情同意,治療方案經(jīng)本院倫理委員會(huì)討論通過。

1.2 主要儀器與試劑 UV100L系統(tǒng)光療儀(德國Waldmann公司),SUV－1000日光紫外線模擬器(上海Sigma公司),BY－II型白癜風(fēng)表皮分離儀(山東神思醫(yī)療設(shè)備有限公司),酶標(biāo)儀(奧地利產(chǎn)anthos 2010型),高速離心機(jī)(美國索福公司),IL－6、IL－18、TNF－α、slCAM－1試劑盒(美國派普泰克公司)。

1.3 方法

1.3.1 對白癜風(fēng)患者白斑區(qū)與健康人正常皮膚用BY－II型白癜風(fēng)治療儀進(jìn)行負(fù)壓吸皰,負(fù)壓45 kPa,溫度43℃。抽取皰液1～2 mL(含血性皰液及纖維組織棄去不用),離心20 min左右(2000～3000 r/min),收集上清。應(yīng)用ELISA法檢測IL－6、IL－18、TNF－α以及slCAM－1水平。

1.3.2 對白癜風(fēng)患者進(jìn)行NB－UVB照射前測定最小紅斑量(MED),初始劑量為最小紅斑量的50%,即0.3～0.5 J/cm2,每周照射3次。如照射皮膚無紅斑反應(yīng),以后每次增加劑量0.1～0.2 J/cm2,共照射30次。若出現(xiàn)疼痛性紅斑則暫停照射,在紅斑消退后恢復(fù)照射,劑量減少50%。照射中遮蓋保護(hù)患者的眼部及外生殖器部位,除部分患者因不良反應(yīng)外用潤膚乳膏外,未使用其他藥物。

1.3.3 治療3個(gè)月后進(jìn)行療效評(píng)價(jià) 皮損區(qū)完全復(fù)色或單皮片復(fù)色面積大于80%為成功區(qū)；皮損區(qū)面積無變化,進(jìn)一步擴(kuò)大或單皮片復(fù)色面積小于20%視為失敗區(qū)。在治療組16例配合檢測的患者成功與失敗的區(qū)域分別再次進(jìn)行1～2個(gè)單位的負(fù)壓吸皰,抽取皰液,檢測前述細(xì)胞因子水平。

1.3.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 13.0軟件系統(tǒng)分析白癜風(fēng)患者白斑區(qū)IL－6、IL－18、TNF－α以及slCAM－1水平；光療前后成功與失敗區(qū)IL－6、IL－18、TNF－α、slCAM－1水平差異。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用ˉx±s表示,兩組間比較用t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 白癜風(fēng)患者局部白斑區(qū)IL－6水平與健康人比較明顯降低(P＜0.05),TNF－α水平偏高(P＜0.05),IL－18、slCAM－1水平則明顯升高(P＜0.01)。見表1。2.2 經(jīng)NB－UVB照射后,復(fù)色部位IL－6水平升高, IL－18、TNF－α以及slCAM－1水平降低,與健康人比較無顯著性差異(P＞0.05)。復(fù)色失敗區(qū)治療后各細(xì)胞因子水平與對照組比較有顯著差異。見表2。

表1 白癜風(fēng)患者局部白斑區(qū)與健康對照組相關(guān)細(xì)胞因子水平比較

表2 NB－UVB照射后,復(fù)色與未復(fù)色皮損各細(xì)胞因子水平變化

3 討論

白癜風(fēng)是一種由于黑素細(xì)胞受損致色素脫失的獲得性皮膚病,其病因及發(fā)病機(jī)制迄今尚未完全闡明。角質(zhì)形成細(xì)胞對黑素細(xì)胞的各種功能有重要的調(diào)控作用,其主要通過分泌各種細(xì)胞因子來維持黑素細(xì)胞的功能。IL－6是皮膚角質(zhì)形成細(xì)胞分泌的重要細(xì)胞因子,角質(zhì)形成細(xì)胞的損傷及功能減弱可引發(fā)白癜風(fēng)。我們研究發(fā)現(xiàn)白癜風(fēng)皮損區(qū)組織液中IL－6明顯降低,提示其可能有角質(zhì)形成細(xì)胞功能受損,與Moretti等9研究結(jié)果不符。Moretti等研究了15例處于活動(dòng)期的白種人,穿孔活檢取皮損和病灶周圍的皮膚,采用免疫組化的方法研究發(fā)現(xiàn)IL－6在白癜風(fēng)皮損區(qū)高表達(dá)。我們的研究與國內(nèi)學(xué)者10研究結(jié)果吻合,均采用了ELISA法檢測局部皰液中的細(xì)胞因子。兩者結(jié)果不同是否與取材深度、檢測方法及人種差異有關(guān)需進(jìn)一步證實(shí)。TNF－α主要由活化的單核－巨噬細(xì)胞產(chǎn)生,具有多種生物效應(yīng),可激活誘導(dǎo)型一氧化氮合酶,產(chǎn)生大量一氧化氮對黑素細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞毒性作用,從而抑制黑素細(xì)胞增殖和色素生成。slCAM－1是中性粒細(xì)胞與黑素細(xì)胞黏附的必需因子,其可促進(jìn)淋巴細(xì)胞與黑素細(xì)胞黏附,在淋巴細(xì)胞攻擊破壞黑素細(xì)胞中發(fā)揮重要的連接作用,進(jìn)而導(dǎo)致黑素細(xì)胞破壞。IL－18主要由單核巨噬細(xì)胞產(chǎn)生,同時(shí)也可由表皮角質(zhì)形成細(xì)胞合成表達(dá)。已有大量資料證明IL－18能誘導(dǎo)Th1細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞分泌IFN－γ、粒－巨嗜細(xì)胞集落刺激因子,IL－2等多種細(xì)胞因子。11,12誘導(dǎo)IFN－γ是IL－18的主要功能之一,IFN－γ可加強(qiáng)slCAM－1的表達(dá)促進(jìn)白細(xì)胞與黑素細(xì)胞的黏附,引起黑素細(xì)胞的破壞。同時(shí)IFN－γ還是誘導(dǎo)型一氧化氮合酶的誘導(dǎo)因子,可以產(chǎn)生大量一氧化氮引起黑素細(xì)胞自身破壞。因此IL－18可能通過刺激Th1細(xì)胞和NK細(xì)胞產(chǎn)生相關(guān)細(xì)胞因子而參與了白癜風(fēng)的發(fā)病過程。我們研究發(fā)現(xiàn)以上三種細(xì)胞因子在白癜風(fēng)局部皮損中均顯著升高,其中TNF－α、slCAM－1檢測結(jié)果與Grimes等6、宋秀祖等7的研究結(jié)果相符合,提示白癜風(fēng)局部皮損處存在明顯免疫異常,表皮微環(huán)境細(xì)胞因子的變化、局部細(xì)胞因子表達(dá)不平衡可能與白癜風(fēng)的發(fā)病有關(guān)。

NB－UVB照射能促進(jìn)角質(zhì)形成細(xì)胞分泌相關(guān)細(xì)胞因子,同時(shí)誘導(dǎo)T細(xì)胞凋亡13及抑制前炎癥因子的釋放,影響細(xì)胞因子調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò),進(jìn)而通過細(xì)胞因子相互作用維持或增加表皮黑素細(xì)胞的數(shù)量功能,促進(jìn)黑素生成。本研究表明,經(jīng)NB－UVB照射后白癜風(fēng)皮損復(fù)色區(qū)組織液中IL－6含量增高,IL－18、TNF－α、sl-CAM－1均降低,而復(fù)色失敗區(qū)各細(xì)胞因子變化不顯著。可部分解釋NB－UVB治療白癜風(fēng)的作用機(jī)制。但NB－UVB治療白癜風(fēng)的作用機(jī)制較為復(fù)雜,我們的研究還不能全面反映NB－UVB照射對白癜風(fēng)局部免疫狀態(tài)的影響。

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(收稿:2014－04－28 修回:2014－08－04)

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Effects of NB－UVB on the levels of IL－6、IL－18、TNF－α and slCAM－1 in the lesions of vitiligo

SHI Yong-jian,LIU Yuan-yuan,LIU Ying,et al.The Second Hospital of Shandong University,Jinan,250033

Objective:To determine the effects of NB－UVB on the levels of IL－6,IL－18,TNF－α and sl-CAM－1 in the lesions of vitiligo.Methods:The lesional levels of IL－6,IL－18,TNF－α and slCAM－1 were detected by ELISA before and after irradiation by NB－UVB for 30 times.Results:Before the irradiation of NB－UVB,the level of IL－6 was 0.316±0.237 ng/mL,which was lower than that in healthy people；the levels of IL－18,TNF－α,slCAM－1 were 0.925±0.419 ng/mL,1.012±0.473 ng/mL and 1.162±0.386 ng/mL,which were higher than those of the healthy people.After the irradiation of NB－UVB,all the cytokine levels in the improved lesions were basically restored to normal.Conclusion:The efficacy of NB－UVB on vitiligo may be through regulating the levels of cytokines.

vitiligo；cytokine；NB－UVB

山東大學(xué)第二醫(yī)院皮膚科,濟(jì)南,250033