安 靜，陸惠紅，沈 艷，盧 勇，許 霞

（1.安徽中醫(yī)藥大學研究生部，合肥 230038;2.鹽城市中醫(yī)院腦病科，江蘇 鹽城 224001;3.鹽城市大豐第三人民醫(yī)院，江蘇大豐 224100;4.安徽中醫(yī)藥大學中醫(yī)臨床學院方劑教研室，合肥 230038）

方劑的實驗研究

安 靜1，2，陸惠紅3，沈 艷2，盧 勇3，許 霞4*

（1.安徽中醫(yī)藥大學研究生部，合肥 230038;2.鹽城市中醫(yī)院腦病科，江蘇 鹽城 224001;3.鹽城市大豐第三人民醫(yī)院，江蘇大豐 224100;4.安徽中醫(yī)藥大學中醫(yī)臨床學院方劑教研室，合肥 230038）

方劑的實驗研究目前研究方法較多，范圍較廣，主要集中在方劑提取方法研究、方劑藥理研究、方劑毒理研究以及方劑的化學成分研究等方面。方劑的提取方法研究觀察了影響方劑效果的外在因素、方劑發(fā)揮最佳作用的提取方法;方劑藥理研究從現(xiàn)代醫(yī)學角度明確方劑的作用機制;方劑毒理研究拓展了對方劑的認識;方劑的化學成分研究對方劑發(fā)揮作用物質基礎進行了深入的探討。方劑的實驗研究結合了現(xiàn)代研究的手段與方法，對方劑的作用機制進一步探索，拓展了對方劑的認識，推動了方劑學的發(fā)展，同時也促進了中西醫(yī)結合的發(fā)展。

方劑;實驗研究;方劑藥理學;方劑毒理學;方劑化學

方劑實驗研究是改革開放以來逐漸發(fā)展起來的 新興學科，將我國傳承了幾千年的瑰寶與現(xiàn)代醫(yī)學逐漸相連，同時也是對我國傳統(tǒng)醫(yī)學深入研究，闡明其機制的重要方法。方劑的實驗研究包含了很多內容，縱觀近年的研究方向，大體包括了方劑提取方法研究、方劑藥理研究、方劑毒理研究以及方劑的化學成分研究等，現(xiàn)就方劑實驗研究的四大方向作一綜述。

1 方劑的提取方法研究

方劑傳統(tǒng)的提取方法就是水提取法，但是近年對水提取法的研究顯示，煎煮時間、溫度對方劑的療效都有一定的影響。彭靜等［1］在對參黃益心顆粒的提取工藝的研究中根據(jù)方中各藥的有效成分及其溶解性能，設計采用水煎煮工藝提取，同時采用正交試驗法優(yōu)化了參黃益心顆粒的水提工藝。分析出影響提取效果的因素順序為:提取次數(shù)＞料液比＞提取時間，由方差分析可知，提取次數(shù)（B）對結果影響顯著，而料液比（A）和提取時間（C）對結果影響不顯著，綜合分析最終優(yōu)選的提取工藝為:加水量為8倍，提取3次，每次0.5 h。索建政等［2］研究了祛風通絡止痛貼提取工藝，采用正交試驗的方法，根據(jù)阿魏酸的提取量和葛根素的提取轉移率，結合浸膏的提取量綜合考慮篩選出醇提的最佳條件，結果顯示醇提的最佳條件為:70%乙醇，6倍量，提取3次，每次2 h。認為醇提取工藝可使阿魏酸、葛根素的提取轉移率達到70%以上，提取浸膏的量適宜。王穎莉等［3］研究四君子湯總多糖的微波提取適宜條件，利用微波法對工藝條件進行改進，并通過正交試驗設計實驗對總多糖提取參數(shù)進行了優(yōu)選，同時對提取的總多糖采用紅外吸收光譜和紫外吸收光譜進行了分析表征，認為適宜的提取工藝條件是在390 W的功率下，以1∶2的液固比提取6 min提取2次，此條件下多糖含量為14.82%，比實驗條件下的傳統(tǒng)法提高了10.26%，紅外光譜分析顯示微波法提取的多糖的結構與傳統(tǒng)法基本一致，顯示微波法是一種優(yōu)于傳統(tǒng)水煎煮法、提取效率高、用時少的新的提取法。方劑提取研究過程中融入了不少先進的檢測手段，蒸發(fā)光散射檢測器（ELSD）是一種通用檢測器，因為能檢測不含發(fā)色團的化合物，因而擴寬了HPLC在復方制劑檢測中的應用。付克等［4］采用 Diamonsil C18柱（4.6 mm ×200 mm，5 μm），以乙腈-水為流動相進行梯度洗脫，利用ELSD進行檢測。結果顯示柴胡皂苷α進樣量在1.7～8.5 μg與峰面積對數(shù)線性關系良好，認為該方法專屬性強、準確、快速，適用于柴芩清肝方提取物中柴胡皂苷α的含量測定。

2 方劑的藥理研究

隨著現(xiàn)代醫(yī)學的融入，也給古老的方劑研究打開了新的思路，現(xiàn)代方劑研究從現(xiàn)代醫(yī)學、生物物理、生物化學、分子生物學、免疫學等多學科的角度作為切入點探討方劑的作用機制，提高傳統(tǒng)方劑整體研究水平。李宏等［5］對照比較了芪杞參顆粒對小鼠的細胞免疫和體液免疫功能的影響發(fā)現(xiàn)，芪杞參顆粒顯著增加小鼠腹腔巨噬細胞吞噬功能;能增強小鼠體液免疫功能;可提高小鼠NK細胞活性;對刀豆蛋白（Con）A誘導下的小鼠淋巴細胞轉化有增強作用;充分顯示了芪杞參顆粒的免疫調節(jié)作用。暢瑞苗等［6］建立大鼠心肌缺血再灌注損傷模型，發(fā)現(xiàn)益心腦滴丸能明顯升高心率、左室收縮壓、降低左室舒張末期壓，降低室性心律失常的持續(xù)時間，增高SOD活性，降低MDA含量，明顯減小梗死區(qū)/缺血危險區(qū)，認為益心腦滴丸對缺血再灌注損傷具有保護作用，其機制可能與改善心肌功能和抗氧自由基損傷有關。谷麗艷等［7］對芪參健脾方研究發(fā)現(xiàn)，認為芪參健脾方可通過調節(jié)MMP-1，MMP-2，MMP-9 和 collagenⅠ，collagenⅢ的水平，從而改善SHR大鼠心肌功能，這可能是其抑制SHR大鼠的心肌纖維化的機制之一。李煥丹等［8］觀察藿香正氣水對兔離體腸平滑肌的作用，發(fā)現(xiàn)藿香正氣水中的和厚樸酚、厚樸酚、異甘草素和甘草素這幾種成分對乙酰膽堿和磷酸組胺引起兔離體腸管收縮均有抑制作用，呈一定的量效關系。王檀等［9］研究顯示定喘止哮顆粒對血液中內皮素（ET）的生成和釋放有抑制作用，且劑量越大作用越強，從而達到抑制支氣管哮喘大鼠氣管收縮的作用，使哮喘急性發(fā)作得到迅速緩解。

3 方劑的毒理研究

通常認為傳統(tǒng)醫(yī)學方劑的治療是沒有毒副作用，但是近年來對方劑的毒理研究逐漸增多，很多問題也隨之發(fā)現(xiàn)。劉筱藹等［10］在研究四逆湯煎劑和其緩釋片劑發(fā)現(xiàn)均未能測出其LD50，僅能進行最大耐受（MTD）測定。表明四逆湯煎劑和片劑的毒性均很低。但是組織切片光鏡下檢查發(fā)現(xiàn)，煎劑組1只大鼠心臟有輕度心內膜炎和鍵索變性，2只大鼠肝臟可見彌漫水樣變性，匯管區(qū)炎細胞浸潤，假膽管增生。認為四逆湯煎劑對肝臟的損害是存在的，但是相比之下緩釋片就安全許多。吳懿［11］在小柴胡湯有效成分肝靶活性—毒性機制研究中發(fā)現(xiàn)通過對空白組、聯(lián)合模型組、分步模型組、混合標準品組的小柴胡湯代謝物的AST和LDH的檢測可知:在AST水平，聯(lián)合模型組高于空白對照組，差異具有統(tǒng)計學意義;在LDH水平上，聯(lián)合模型組，混合標準品組均高于空白對照組，分步模型組LDH低于空白對照組，差異均具有統(tǒng)計學意義，認為在該條件下，對聯(lián)合模型組和混合標準品組的肝細胞均有損傷，對分步模型組肝細胞有保護作用。路杰等［12］采用高效液相色譜技術并結合藥理學實驗，研究了附子單煎液與各種共煎液中烏頭堿和次烏頭堿的含量和LD50值的變化規(guī)律，證明了八味地黃方與人參湯共用后確實可以產生毒性，人參湯可以促進八味地黃方來自附子的有毒雙酯型生物堿的溶出，而人參湯中的白術可能是引起2方共用產生毒性的化學成分。柳海艷等［13］在對甘遂半夏湯中甘遂甘草反藥組合加減應用對小鼠急性毒性LD50（半數(shù)致死量）的實驗中發(fā)現(xiàn)通過Bliss法算出的累計半數(shù)死亡的結果顯示:醋甘遂炙甘草反藥組合在復方中應用其LD50有升高的趨勢，說明復方中的其他藥物即半夏、白芍、蜂蜜可能在一定程度上升高甘遂甘草反藥組合的LD50值。

4 方劑的化學成分研究

方劑的組成非常復雜，藥味的加減，煎煮時間的變化，都可能使方劑組方后化學成分發(fā)生變化，對方劑的化學成分研究應該說是相當復雜和困難的。尹愛武等［14］運用色譜學方法對血府逐瘀湯進行系統(tǒng)分離，并根據(jù)理化性質及波譜數(shù)據(jù)對分離得到的化合物進行結構鑒定。結果從中分離得到11個化合物，分別鑒定為:軟脂酸、硬脂酸、β-谷甾醇、齊墩果酸、孕烯醇酮、蜜桔素、4-羥基-3-丁基-苯酞、異鼠李素、木栓醇、β-蛻皮甾酮、阿魏酸，以上化合物均為首次從該復方中分離得到。郭戎等［15］實驗采用 UPLC-ESI-QTOF聯(lián)用技術，并結合了高靈敏度和特異性質譜及高分離效率的色譜等優(yōu)點，通過獲得色譜峰準分子離子，對四逆散進行了化學成分分析，鑒定出17種四逆散中可能含有的化學成分。楊杰等［16］采用Acquity UPLCTMBEH C18柱進行色譜分離，以乙腈－0.1%甲酸水溶液為流動相進行梯度洗脫，以電噴霧質譜檢測，掃描范圍為M/Z 150～1 500，在正負離子同時掃描的模式下，通過比對，確定小柴胡湯的化學成分，共檢測到44個化學成分。

5 小結

方劑的實驗研究應該說涉及的方面非常廣泛，由于方劑藥味的加減，藥量的變化以及制法等不同都能使方劑的藥理作用、治療效果大相徑庭，從而使方劑的研究變得復雜化，加之目前方劑實驗研究方法眾多，沒有統(tǒng)一、明確有效的研究標準，使方劑學實驗研究顯得異常的困難，很多領域還需進一步研究、探索。

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［1］彭靜，陳鋼.參黃益心顆粒的提取工藝研究［J］.湖北中醫(yī)雜志，2011，33（1）:70-72.

［2］索建政，郄春鵬，嚴文利，等.祛風通絡止痛貼提取工藝的研究［J］.現(xiàn)代中西醫(yī)結合志，2011，20（13）:1637-1639.

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［6］暢瑞苗，岳媛，薛暉，等.益心腦滴丸對心肌缺血再灌注損傷的保護作用［J］.中國實驗方劑學雜志，2013，19（6）:203.

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Experimental research on traditional medical formula

AN Jing1，3，LU Huihong4，SHEN Yan3，LU Yong4，XU Xia2*
（1.Department of postgraduate，Anhui University of Chinese Medicine，Hefei 230038，China;2.Department of Encephalopathy，Yancheng Hospital of Chinese Medicine，Yancheng 224001，Jiangsu Province，China;3.Dafeng Third People's Hospital of Yancheng，Yancheng 224100，Jiangsu Province，China;4.Research group of traditional medical formula，Department of Traditional Clinical Medicine.Department of Anhui University of Chinese Medicine，Hefei 230038，China）

There is a wide range of methods of experimental study of prescriptions currently，which mainly focus on the extraction method，pharmacological studies，toxicology and chemical constituents of prescriptions.Through the extraction of prescriptions，researchers observe the external factors that influence the prescription to get the most effective way of extraction for prescriptions to take effect.The pharmacological studies of prescription ascertain its mechanism actions from the angle of modern medicine.Toxicology study expands the understanding of prescription.Through the study on chemical constituents of prescriptions，researchers explore in deep the material basis which plays an important role in prescriptions.In the experimental study on prescriptions，modern research means have been utilized to further explore the mechanism of actions of prescriptions，expand the understanding on it，and promote the development of formulas of Chinese medicine as well as the combination of Chinese and western medicine.

traditional medical formula;experimental study;prescription of pharmacology;toxicology prescriptions;chemical prescriptions

R289.9

A

2095－6258（2014）04－0614－03

10.13463/j.cnki.cczyy.2014.04.019

國家自然科學基金青年科學基金項目（81302911）;高校省級優(yōu)秀青年人才基金重點項目（2013SQRL040ZD）;安徽中醫(yī)藥大學自然科學研究基金（2013zr011）。

安 靜（1978－），女，碩士，主治醫(yī)師。研究方向:腦血管病的臨床研究。

許 霞，女，博士，副教授，碩士研究生導師，電子信箱:xxia1982@gmail.com。

2014－04－03）