郭鵬威 楊發(fā)奮 王潔 林栩 黃鵬 湯春榮
右江民族醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院腎內(nèi)科,廣西百色 53300
IgA腎病病理與臨床指標(biāo)及轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1和Smad7蛋白的相關(guān)因素分析
郭鵬威 楊發(fā)奮 王潔 林栩 黃鵬 湯春榮
右江民族醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院腎內(nèi)科,廣西百色 53300
目的對(duì)IgA腎病進(jìn)行病理學(xué)分型及其臨床指標(biāo)之間的關(guān)系進(jìn)行探討和分析,并觀察轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1和Smad7蛋白的不同表達(dá),旨在對(duì)發(fā)病機(jī)制等因素進(jìn)行探討。方法 選取該院收治的100例原發(fā)性IgA腎病患者,收集并研究患者臨床資料,參照IgA腎病分型對(duì)所有患者的腎活檢標(biāo)本進(jìn)行評(píng)分并比較各病理及分型見(jiàn)常見(jiàn)指標(biāo)的差異。通過(guò)使用免疫熒光雙套染法并結(jié)合激光共聚焦顯微鏡檢測(cè)IgA免疫復(fù)合物在不同腎病腎小球的沉積量,比較并分析其相關(guān)因素。此外,采用化學(xué)二步法檢測(cè)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1和Smad7蛋白的表達(dá),并比較不同表達(dá)情況與腎小球沉積量的關(guān)系。結(jié)果 IgA腎病腎組織除E0/1外,其余臨床指標(biāo)之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);血清IgA濃度組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),腎組織IgA沉積量差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1和Smad7蛋白表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論 IgA腎病病理可以反映病變指標(biāo);血清濃度高低并不一定能決定IgA腎病是否發(fā)作,但沉積的IgA復(fù)合物可能過(guò)量聚積造成腎小球硬化;轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1和Smad7蛋白很可能是過(guò)量聚積的重要原因并造成腎小球硬化。
IgA腎病病理;臨床指標(biāo);轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因β1;Smad7蛋白
1.1 一般資料
1.2 排除標(biāo)準(zhǔn)
①患者患有狼瘡腎炎、乙肝相關(guān)性腎炎等繼發(fā)性腎??;②患者患有腎小管間質(zhì)病變或動(dòng)脈病變等[1-2];③患者每例腎穿組織內(nèi)腎小球數(shù)量≥8個(gè),且新月體占55%以下;④臨床24 h檢測(cè)患者尿蛋白定量超過(guò)0.5 g/d;⑤臨床估計(jì)患者eGFR超過(guò)30 mL/min(1.73 m2)。
1.3 方法
收集100例患者臨床資料,估算患者腎小球?yàn)V過(guò)率(eGFR)和平均動(dòng)脈壓(MAP)。對(duì)所有患者進(jìn)行腎病理學(xué)檢查。
1.3.1 光鏡 對(duì)患者進(jìn)行穿刺處理以獲得患者腎組織,以福爾馬林固定并用石蠟進(jìn)行包埋,將其處理成為厚度大約為4 μm的切片,并對(duì)切片分別進(jìn)行PAS、Msson、HE和PASM染色。腎組織病理指標(biāo)應(yīng)當(dāng)包括球性硬化、新月體、內(nèi)皮細(xì)胞增生、壞死等方面。
1.3.2 電鏡 使用濃度為2.5%~3%的戊二醛 (稀戊二醛溶液:國(guó)藥準(zhǔn)字H44021172)初固定腎穿組織,之后用1%濃度的鋨酸(CAS號(hào)20816-12-0)后固定,對(duì)其按照常規(guī)方式進(jìn)行制片,將其處理成為1 μm厚度的切片并用醋酸鈾-檸檬酸鉛 (醋酸鈾:CAS號(hào)541-09-3;檸檬酸鉛:CAS號(hào)512-26-5)染色。在電鏡下觀察腎小球基底膜厚度變化及其結(jié)構(gòu)變化,細(xì)胞器變化及上皮細(xì)胞足突的形態(tài)特征等。
1.3.3 腎組織病理學(xué)觀察及分型 在光鏡視野下,根據(jù)IgA腎病的牛津分型,分別對(duì)M0/1、S0/1、E0/1、T0/1/2進(jìn)行評(píng)分并整理組合,見(jiàn)表1。
表1 I gA腎病分型中不同病理參數(shù)及其意義
通過(guò)使用規(guī)定的PAS染色切片對(duì)系膜細(xì)胞增生進(jìn)行評(píng)分,將符合條件的小球數(shù)量記錄為X。并將所有小球評(píng)分分值相加的總數(shù)記為Y。Y/X所得即為系膜細(xì)胞增生的評(píng)分。
標(biāo)準(zhǔn)明確規(guī)定了尼龍絹袋集卵孵化法檢測(cè)人體糞便中日本血吸蟲(chóng)毛蚴的技術(shù)規(guī)范,適用于各級(jí)疾病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)和醫(yī)療機(jī)構(gòu)對(duì)日本血吸蟲(chóng)毛蚴的檢測(cè)。引用《病原微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全通用準(zhǔn)則(WS 233—2017)》。
表2 100例IgA腎病病理與臨床指數(shù)差異
表2 100例IgA腎病病理與臨床指數(shù)差異
病理參數(shù)MAP(mmHg)P EGFR(mL/min/1.73 m2)P 24 hpb(g/d) P M0(n=40)M1(n=60)S0(n=46)S1(n=54)E0(n=43)E1(n=57)T0(n=60)T1(n=27)T2(n=13)97±19 95±18 95±12 102±14 99±12 98±20 92±18 101±18 109±22 P>0.05P>0.05P<0.05 P>0.05P<0.05P>0.05 P>0.05P>0.05P>0.05 P<0.001 100.9±43.9 101.6±60.3 104.8±59.9 98.0±48.2 99.7±48.4 101.2±57.9 115.1±51.3 101.4±45.1 46.5±38.9 P<0.001 1.8±2.4 2.9±3.7 2.0±2.5 2.3±3.1 2.4±1.9 2.2±2.8 2.0±3.1 1.8±1.9 3.4±3.9 P<0.05
1.3.4 免疫熒光檢查 選取腎穿新鮮的組織并進(jìn)行冰凍切片,采用厚度約為2~3 μm的免疫熒光進(jìn)行染色,并使用FITC分別采用直接免疫熒光染色和簡(jiǎn)潔熒光法進(jìn)行標(biāo)記和檢測(cè)。在顯微鏡下對(duì)其進(jìn)行熒光觀察。采用化學(xué)二步法檢測(cè)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1和Smad7蛋白的表達(dá),并比較不同表達(dá)情況與腎小球沉積量的關(guān)系。
1.4 統(tǒng)計(jì)方法
該觀察數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)應(yīng)用SPSS 17.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差形式表示,組間應(yīng)用t檢驗(yàn)進(jìn)行比較。
IgA腎病腎組織除E0/1外,其余臨床指標(biāo)之間均差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),見(jiàn)表2。
血清IgA濃度組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),腎組織IgA沉積量差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1和 Smad7蛋白表達(dá)組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表3。
表3 在病理參數(shù)內(nèi)IgA血清濃度和沉積量差別
表3 在病理參數(shù)內(nèi)IgA血清濃度和沉積量差別
病理參數(shù) 血清濃度P IgA沉積量 P M0(n=40)M1(n=60)S0(n=46)S1(n=54)E0(n=43)E1(n=57)T0(n=60)T1(n=27)T2(n=13)3.2±1.8 2.2±1.7 3.3±1.9 2.4±1.5 2.9±1.3 2.9±1.2 2.9±1.9 3.2±1.7 2.6±1.7 P>0.05P<0.05 P<0.05P>0.05 P>0.05P>0.05 P>0.05 14.8±16.4 16.4±14.2 15.8±16.4 16.0±14.4 14.6±17.6 15.9±11.3 15.7±16.8 16.1±10.9 13.5±16.7 P>0.05
IgAN組織學(xué)的病理變化多種多樣,在顯微鏡下,輕則腎小球、腎小管正常;重則腎小球嚴(yán)重病變,形成各類新月體;晚期患者多為腎小球硬化、腎小管萎縮或發(fā)生間質(zhì)纖維化。自從Berger在1968年第一次報(bào)道IgAN后,臨床上出現(xiàn)過(guò)許多種分類、分型標(biāo)準(zhǔn),但由于這些標(biāo)準(zhǔn)大多缺乏病理參數(shù)系統(tǒng)定義,同時(shí)并不具備重復(fù)檢測(cè)性,因此多數(shù)教授并沒(méi)有接受這些分類[1]。
該次研究選用了國(guó)際腎臟病理協(xié)會(huì)在2004年組織制定的I gAN牛津病理分型,其具有良好的重復(fù)性和可預(yù)測(cè)性,加上選用最為被廣泛接受的MAO、eGFR等指標(biāo),通過(guò)單變量分析法對(duì)不同系膜細(xì)胞增生進(jìn)行評(píng)分,以此來(lái)判定其相關(guān)性。先前學(xué)者對(duì)血清IgA濃度、腎組織IgA沉積量和IgA腎病關(guān)系的看法各不相同[2-4]。該次研究中單變量分析結(jié)果表明不同系膜細(xì)胞增生評(píng)分、腎小管萎縮評(píng)分、腎小球節(jié)段性硬化評(píng)分等對(duì)于血清IgA濃度產(chǎn)生的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。而對(duì)于腎組織IgA免疫復(fù)合物沉積量和IgA腎病之間的關(guān)系探討,以往學(xué)者通常是采用半定量法。而該次研究中則通過(guò)借助激光共聚焦顯微鏡可以定量不同熒光標(biāo)記物來(lái)研究腎病IgA沉積量和各病理參數(shù)之間的關(guān)系[5-7]。
此外,對(duì)于轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1、Smad蛋白在IgA腎病中的表達(dá)及其意義,從該次研究中看來(lái),Smad7蛋白的表達(dá)和系膜細(xì)胞增生評(píng)分呈現(xiàn)出正相關(guān)的趨勢(shì),Smad7的高表達(dá)很可能會(huì)改變轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1內(nèi)的病理生理平衡。同時(shí)還發(fā)現(xiàn),轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1的表達(dá)和IgA沉積量存在一定關(guān)聯(lián)且Smad7蛋白的表達(dá)和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1也存在一定相關(guān)性。通過(guò)本次研究,我們認(rèn)為IgA腎病患者沉積的IgA免疫復(fù)合物很可能會(huì)造成轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1蛋白表達(dá)的提高,且Smad7很可能參與到了病變腎小球細(xì)胞外基質(zhì)的過(guò)量積聚中去。這些研究結(jié)果與以前的研究是一致的[8-10]。
綜上所述,通過(guò)對(duì)血清IgA濃度、沉積量和IgAN之間的關(guān)系進(jìn)行探討和分析,以及觀察轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1和Smad7蛋白在不同IgA腎小球內(nèi)的表達(dá)及其與沉積量之間的關(guān)系發(fā)現(xiàn),IgA腎病病理可以反映病變指標(biāo);血清濃度高低并不一定能決定IgA腎病是否發(fā)作,但沉積的IgA復(fù)合物可能過(guò)量聚積造成腎小球硬化;轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1和Smad7蛋白很可能是過(guò)量聚積的重要原因并造成腎小球硬化。
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R69
A
1674-0742(2014)11(b)-0044-03
郭鵬威(1979.7-),男,廣西扶綏人,研究生,主治醫(yī)師,研究方向:腎小球疾病,血液凈化。