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(西南大學(xué)食品科學(xué)學(xué)院,重慶 400716)

卵磷脂,生物學(xué)名磷脂酰膽堿(PC),由脂肪酸基團(tuán)、甘油基、磷酸基和膽堿構(gòu)成,其結(jié)構(gòu)式如圖1所示。卵磷脂作為生命的基礎(chǔ)物質(zhì),廣泛存在于每個(gè)細(xì)胞中,更多則集中分布在腦、神經(jīng)系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)、肝、心、腎等重要器官及系統(tǒng)。它不僅提供人體所需要的P元素,還是必須脂肪酸和膽堿的來源,是磷脂中起營(yíng)養(yǎng)保健作用的主要成分[1]。卵磷脂是除蛋白質(zhì)和維生素之外的“第三營(yíng)養(yǎng)素”,同樣肩負(fù)著細(xì)胞的營(yíng)養(yǎng)代謝、能量代謝、信息傳遞等功能,是生命和健康的必需物質(zhì)[2]。在我國(guó)卵磷脂被廣泛應(yīng)用于食品、醫(yī)藥、保健品、化妝品中。

圖1 卵磷脂結(jié)構(gòu)式Fig. 1 Structure of lecithin

然而,國(guó)內(nèi)外對(duì)卵磷脂的開發(fā)與研究大多集中于大豆和蛋黃[3],除蛋黃外,對(duì)動(dòng)物源卵磷脂的研究報(bào)道較少。并且由于卵磷脂的組成是高度變化的,不同來源的磷脂具有不同的特點(diǎn),導(dǎo)致出現(xiàn)數(shù)據(jù)混亂的現(xiàn)象[4]。此外,由于動(dòng)、植物間的差異性造成處理技術(shù)方法不統(tǒng)一,導(dǎo)致了對(duì)動(dòng)物卵磷脂的研究開發(fā)遠(yuǎn)遠(yuǎn)落后于對(duì)植物卵磷脂的研究開發(fā),造成動(dòng)物資源的浪費(fèi)。本文綜述了動(dòng)物源卵磷脂的的優(yōu)點(diǎn)、功效作用及其研究方法,為動(dòng)物卵磷脂的綜合利用提供一些幫助,充分提高農(nóng)副產(chǎn)品的附加值。

1 動(dòng)物磷脂與植物磷脂比較

1. 1 來源豐富

磷脂作為動(dòng)植物膜系統(tǒng)的基本結(jié)構(gòu)成分,廣泛存在于動(dòng)植物體內(nèi),但不同生物之間,磷脂含量存在著明顯的差異(見表1))。由表1可以得出,動(dòng)物源磷脂中,雞蛋磷脂含量最豐富,肝臟磷脂含量次之,其單位含量都要高于植物磷脂的含量。但無論是動(dòng)物磷脂還是植物磷脂組成,卵磷脂都是其主要成分。

表1 一些食品中的總脂和磷脂含量[5]Table 1 Total lipid and phospholipids content of specific foods[5]

注:PL(磷脂);PC(磷脂酰膽堿);PE(磷脂酰乙醇胺);PI(磷脂酰肌醇);PS(磷脂酰絲氨酸);SM(鞘磷脂); lysoPC(溶血磷脂酰膽堿); - (無)。

1. 2 營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高,易于吸收

大豆磷脂以C16∶ 0,C18∶ 1,C18∶ 2為主要組成成分,不含或很少含有二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA),不飽和程度較低,n - 3 PUFA含量較少,因此人體攝取大豆磷脂后,更多的只是利用其中的普通脂肪酸等成分。而動(dòng)物磷脂尤其是海洋動(dòng)物磷脂不但具有磷脂的一般生理功能,還與大量的EPA、DHA等不飽和脂肪酸相結(jié)合,其中與磷脂結(jié)合的脂肪酸50%以上是EPA和DHA[6],使其具有磷脂、DHA和EPA的功能特性。進(jìn)入人體后,結(jié)合有DHA或EPA的磷脂可以原封不動(dòng)地被人體細(xì)胞攝取,在細(xì)胞內(nèi)分解為DHA、EPA與磷脂,具有協(xié)同增效的作用。

相比于植物源磷脂,動(dòng)物源磷脂可能含有特殊的生物活性成分,這是因?yàn)閯?dòng)物肝臟中存在特異的磷脂合成途徑,使其含有植物源磷脂中所沒有的功能分子[7]。此外,動(dòng)物源磷脂血溶性要優(yōu)于植物源磷脂,易于被人體吸收。

1. 3 更高的開發(fā)價(jià)值

大豆磷脂具有許多功效作用,在保健食品和藥品中被廣泛的應(yīng)用。動(dòng)物來源的磷脂不僅具有類似大豆磷脂的功效作用,還具有其獨(dú)特的價(jià)值,不同來源的動(dòng)物磷脂結(jié)構(gòu)不同,呈現(xiàn)出不同的功效作用,如烏骨雞磷脂同烏骨雞一樣具有滋陰降火作用[8],從而具有更高的開發(fā)價(jià)值。

2 卵磷脂功效作用

卵磷脂作為生命的基礎(chǔ)物質(zhì),不僅具有重要的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值,還具有重要的功效作用,在機(jī)體正常運(yùn)作過程中具有不可替代的作用。目前,對(duì)卵磷脂功效作用的研究主要集中在大豆磷脂,但越來越多的研究表明動(dòng)物源卵磷脂同樣具有重要的功效作用,除具有抗氧化、抗衰老等功效外,在一些疾病的預(yù)防和治療中也發(fā)揮著關(guān)鍵作用。

2. 1 卵磷脂與氧化衰老

自由基是外層軌道上具有不成對(duì)電子的原子或基團(tuán),氧自由基是人體內(nèi)的主要自由基。在正常狀態(tài)下,機(jī)體自身的防御體系和修復(fù)體系能夠維持體內(nèi)自由基的平衡,但當(dāng)人體發(fā)生病變、年齡增長(zhǎng)或者受到一些外來的物理化學(xué)因素影響時(shí),人體機(jī)體清除自由基的能力就會(huì)下降,導(dǎo)致體內(nèi)出現(xiàn)自由基含量過剩的現(xiàn)象,這些多余的自由基會(huì)攻擊人體的生物膜系統(tǒng)而造成膜系統(tǒng)的損傷。人體衰老和人類大部分的疾病都與自由基積累有關(guān)系。卵磷脂含有豐富的不飽和脂肪酸,能夠首先與體內(nèi)自由基發(fā)生反應(yīng),起到清除自由基的作用,并且能夠修復(fù)損傷的生物膜系統(tǒng)。張麗[9]對(duì)鰹魚腦磷脂進(jìn)行體外抗氧化實(shí)驗(yàn),其實(shí)驗(yàn)表明,鰹魚腦磷脂具有一定的抗氧化活性,在在大豆油和橄欖油中起到一定的抗氧化作用。趙靜[10]研究了南極磷蝦磷脂的抗衰老作用,其結(jié)果表明,南極磷蝦磷脂能夠顯著降低小鼠體內(nèi)的MDA水平,同時(shí)升高CAT、GSH - PX和SOD指標(biāo)至正常水平,從而具有延緩衰老作用。

2. 2 卵磷脂與炎癥

炎癥是機(jī)體對(duì)來自外界和自身產(chǎn)生的損傷因子(病原體和受損細(xì)胞等)所作出的防御反應(yīng),卵磷脂對(duì)炎癥的抑制具有一定的作用,磷脂及其代謝產(chǎn)物可以使誘發(fā)組織損傷和破壞細(xì)胞膜的藥物(例如NSAIDs)和一些天然毒性損傷劑(如膽汁酸,內(nèi)毒素)在體內(nèi)的含量下降[11]。Hartmann等[12]以大鼠做為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,探討了卵磷脂對(duì)角叉菜膠性大鼠關(guān)節(jié)炎的作用,其研究發(fā)現(xiàn)在補(bǔ)充外源性卵磷脂后,炎癥發(fā)展得到顯著緩解。Gabor Er?s[13]等用富含卵磷脂的食物對(duì)膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎的小鼠進(jìn)行處理,發(fā)現(xiàn)卵磷脂可能對(duì)慢性關(guān)節(jié)炎的形態(tài)功能和微循環(huán)特征產(chǎn)生有利的影響。Morizawa K等[14]研究發(fā)現(xiàn)從魚卵中提取的DHA磷脂對(duì)2,4 - 二硝基 - 1 - 氟代苯誘發(fā)的小鼠炎癥具有顯著的抑制作用。

2. 3 卵磷脂與肝臟

磷脂酰膽堿(膽堿)缺乏會(huì)使血液中丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶含量升高,導(dǎo)致肝臟功能出現(xiàn)紊亂,如果長(zhǎng)期缺乏,則會(huì)導(dǎo)致脂肪肝,肝硬化等疾病的發(fā)生[15]。補(bǔ)充卵磷脂,可以提供足夠的膽堿,保證肝臟功能的正常。卵磷脂進(jìn)入人體后會(huì)在肝臟聚集,整個(gè)分子完整滲入到肝細(xì)胞膜和細(xì)胞器膜內(nèi),保護(hù)膜系統(tǒng)免受損傷或者對(duì)損傷進(jìn)行修復(fù)。卵磷脂對(duì)不同形式誘發(fā)的肝臟損傷均有一定的有利影響。張媛[16]研究發(fā)現(xiàn)肝PC對(duì)張氏肝細(xì)胞酒精性損傷的保護(hù)作用與Cav - 1密切相關(guān),肝PC能夠提高肝細(xì)胞膜的抗氧化能力,對(duì)抗酒精性損傷。Raj P V等[17]研究發(fā)現(xiàn)卵磷脂對(duì)D - 半乳糖胺誘導(dǎo)的肝損傷具有保護(hù)作用。羅娜[18]研究發(fā)現(xiàn)肝源磷脂酰膽堿對(duì)四氯化碳誘導(dǎo)的肝細(xì)胞HL7702損傷具有保護(hù)作用。

肝臟內(nèi)脂質(zhì)代謝異常,是許多肝臟疾病的初期癥狀。卵磷脂中的膽堿對(duì)脂質(zhì)有親和力,可使脂質(zhì)以磷脂形式由肝臟通過血液輸送出去,并且卵磷脂能改善線粒體功能,加速堆積在肝臟內(nèi)脂肪的燃燒,改善肝臟脂質(zhì)代謝狀況,起到防止脂肪肝形成的功效作用。Wat E[19]等用高脂肪食物和富含磷脂的牛奶提取物(15%的PE,15%PC,12%的SPM,8%的PS,4%的PI和其他成分)喂養(yǎng)小鼠,研究發(fā)現(xiàn),牛奶和奶制品中的磷脂能夠降低肝腫大和脂肪肝的可能性。Buang Y[20]等用磷脂飼喂受乳清酸誘導(dǎo)的脂肪肝SD大鼠。對(duì)比發(fā)現(xiàn)磷脂飼喂后甘油三酯的積累減少,乳清酸誘導(dǎo)的脂肪酸合酶等酶類物質(zhì)減少,同時(shí)使脂肪酸β氧化酶含量增加,從而有效地緩解肝臟脂肪變性和肝腫大癥狀。

卵磷脂在酒精性肝病和非酒精性肝病的臨床治療過程中發(fā)揮著重要的作用,應(yīng)用最廣泛的是多烯磷脂酰膽堿,它是從大豆中濃縮的一種磷脂。目前關(guān)于動(dòng)物卵磷脂用于臨床治療的研究報(bào)道還比較少見,但有研究表明肝臟PC對(duì)急性酒精肝損傷有顯著抵御作用[21]。

2. 4 卵磷脂與神經(jīng)系統(tǒng)

人腦細(xì)胞間是通過乙酰膽堿來實(shí)現(xiàn)信息傳遞的,隨著年齡的生長(zhǎng),血液以及人腦中的膽堿含量會(huì)逐漸減少,從而導(dǎo)致行動(dòng)遲緩,記憶里衰退,智力下降,甚至發(fā)生老年癡呆。磷脂酰膽堿作為乙酰膽堿的前體物質(zhì),從體外攝入可以有效的提高血液以及大腦中的膽堿含量,促進(jìn)乙酰膽堿的合成,從而起到健腦益智的效果。Thal[22]通過對(duì)8例阿爾茨海默氏癥早期患者口服卵磷脂的研究發(fā)現(xiàn),其結(jié)果表明,卵磷脂和扁豆堿混合對(duì)治療阿爾茨海默氏癥具有一定的療效。陳現(xiàn)偉[23]研究了蛋黃卵磷脂對(duì)小鼠的影響,其結(jié)果發(fā)現(xiàn),蛋黃卵磷脂可提高小鼠記憶功能,促進(jìn)大腦發(fā)育。楊驥等[24]研究了肝源性磷脂對(duì)小鼠學(xué)習(xí)記憶及海馬窖蛋白 - 1 表達(dá)的影響,其研究結(jié)果表明,肝源性磷脂可以通過激活Caveolin - 1蛋白和PKCα蛋白的表達(dá)增強(qiáng)小鼠的學(xué)習(xí)和記憶能力。

2. 5 卵磷脂與腫瘤

目前,關(guān)于磷脂對(duì)腫瘤抑制作用的機(jī)理仍然沒有弄清楚,但由于很多腫瘤發(fā)生的直接原因是體內(nèi)自由基過多,卵磷脂對(duì)清除自由基具有重要的作用,越來越多的研究發(fā)現(xiàn),磷脂對(duì)腫瘤具有一定的抑制作用。Taylor[25]等通過臨床實(shí)驗(yàn)確認(rèn),腫瘤患者每天服用1. 5克的海洋磷脂口服補(bǔ)充劑可緩解與腫瘤相關(guān)的體重下降并顯著改善病人的生活和身體運(yùn)動(dòng)質(zhì)量。Sakakima[26]等通過體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)磷脂酰膽堿可以抑制癌細(xì)胞的生長(zhǎng),并且磷脂酰膽堿和4 - 甲萘醌可能表現(xiàn)出保護(hù)肝的協(xié)同作用。

2. 6 卵磷脂與免疫

磷脂是生物膜的重要組成成分,隨著年齡的增長(zhǎng),細(xì)胞膜中的膽固醇/磷脂(C/PL)會(huì)升高,這種變化對(duì)細(xì)胞膜的功能和性質(zhì)造成極大的影響。例如,在淋巴細(xì)胞中,C/PL的升高預(yù)示著機(jī)體免疫功能的下降,外源性磷脂的攝入,不僅可以降低膽固醇,還能使磷脂含量升高。馬琴[27]探討了DHA - PC對(duì)荷瘤小鼠的免疫調(diào)節(jié)作用,其結(jié)果提示,DHA - PC能全面調(diào)節(jié)機(jī)體的特異性和非特異性免疫功能。Maczek[28]研究發(fā)現(xiàn),淋巴細(xì)胞膜粘度可以通過恢復(fù)C/PL來實(shí)現(xiàn)調(diào)節(jié),因此增加淋巴細(xì)胞細(xì)胞膜的PL含量可以使老年人免疫功能恢復(fù)。因此,外源性磷脂的攝入對(duì)免疫功能的提升具有重要的意義。

2. 7 卵磷脂與心腦血管疾病

高脂血癥是許多心腦血管疾病的危險(xiǎn)因素。卵磷脂分子同時(shí)具有親水基團(tuán)和疏水基團(tuán),是良好的表面活性劑,能夠形成水包油(O/W)型乳劑,對(duì)膽固醇和脂肪的運(yùn)輸和沉積具有較大的影響作用。卵磷脂可以減少脂肪在血管內(nèi)停留時(shí)間并乳化血管壁附著的脂類物質(zhì),清除沉積在血管壁上的膽固醇,促進(jìn)動(dòng)脈硬化斑的擴(kuò)散,同時(shí)多不飽和脂肪酸可以阻斷小腸對(duì)膽固醇的吸收,使血漿中膽固醇水平降低,并且能夠提高血漿中高密度脂蛋白膽固醇水平,從而起到降低血液膽固醇,調(diào)節(jié)血脂,減小心腦血管疾病發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。鄧衛(wèi)明[29]將受試者按血脂水平隨機(jī)分為卵磷脂試食組和安慰劑對(duì)照組,以雙盲法進(jìn)行實(shí)驗(yàn),其結(jié)果表明卵磷脂實(shí)驗(yàn)組試食后總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)與試食前比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0. 05),且試食后TC、TG與試食前比較分別。下降10. 58%、21. 77%,試食后試食組TC、TG與對(duì)照組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0. 05)。王玉明[30]等研究了攝食牛乳磷脂、大豆磷脂和蛋黃磷脂對(duì)大鼠脂質(zhì)代謝影響,其研究表明,3種磷脂均有降血脂、肝脂作用。

2. 8 卵磷脂與其他

卵磷脂在很多疾病的治療過程中得到應(yīng)用,如Seidman[31]等發(fā)現(xiàn)卵磷脂可以增強(qiáng)耳蝸線粒體的功能并對(duì)與年齡老化有關(guān)的聽力損傷有保護(hù)作用。卵磷脂在皮膚保健中也具有重要的作用,它對(duì)皮膚角質(zhì)層水分含量和角質(zhì)細(xì)胞脂褐素含量有重要影響,在國(guó)外有使用卵磷脂作為藥物治療牛皮癬的專利[32]等。卵磷脂還具有降血糖的作用,徐雷雷[33]研究發(fā)現(xiàn)海參EPA - PC能夠通過修復(fù)糖尿病大鼠受損的胰島β細(xì)胞,恢復(fù)胰島素的分泌,促進(jìn)肝糖原和肌糖原的合成,起到降血糖的作用。

3 卵磷脂的提取方法

磷脂提取時(shí),原料不同所采用的提取方法也不同,對(duì)于動(dòng)物磷脂來說,與大豆磷脂的提取方法具有相似性,兩者都是先要獲取粗脂肪,然后再純化獲得磷脂。目前,磷脂提取常用的方法有溶劑提取法、超臨界流體萃取法、酶提取法、固相萃取法等。

3. 1 溶劑提取法

溶劑提取法是根據(jù)在特定溶劑中卵磷脂與其他組分溶解度不同而達(dá)到分離提取的目的,是目前國(guó)內(nèi)外學(xué)者研究卵磷脂常用的提取方法。該法的關(guān)鍵是找到一個(gè)合理的溶劑系統(tǒng),該溶劑系統(tǒng)滿足對(duì)卵磷脂具有良好的選擇性和溶解性。常用的溶劑有氯仿、乙酸、正己烷及一些低級(jí)醇。目前對(duì)動(dòng)物卵磷脂研究最多的是對(duì)蛋黃磷脂的提取,對(duì)動(dòng)物肝臟和腦組織磷脂的提取也逐漸成為人們研究的熱點(diǎn),提取時(shí)大多采用經(jīng)典的Folch溶劑提取法[34]獲得粗脂肪,但人們對(duì)該方法進(jìn)行了不斷的完善改進(jìn)[35 - 36]。

由于Folch法中使用的氯仿、甲醇的毒性和刺激性較高,對(duì)操作者健康構(gòu)成危害,所以人們一直在尋求一種更為安全有效的替代方法,國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)動(dòng)物源卵磷脂的提取工藝不斷進(jìn)行優(yōu)化[37 - 38]。

溶劑提取法制備磷脂時(shí)的優(yōu)點(diǎn)在于其生產(chǎn)能力強(qiáng),生產(chǎn)周期短,便于連續(xù)操作。其缺點(diǎn)在于原料消耗多,提取效率低,不能夠從磷脂復(fù)合物中得到純度較高的卵磷脂,并且存在對(duì)環(huán)境污染嚴(yán)重以及提取的磷脂中往往殘留有機(jī)溶劑超標(biāo)等問題,限制磷脂的使用,因此該方法被廣泛應(yīng)用于實(shí)驗(yàn)室中,在工業(yè)生產(chǎn)中則很少使用。

在實(shí)際操作過程中,為了提高效率,經(jīng)常用超聲波和微波來輔助傳統(tǒng)的溶劑提取。超聲波輔助萃取是充分利用超聲波輻射壓強(qiáng)產(chǎn)生的強(qiáng)烈擾動(dòng)效應(yīng)、高加速度、擊碎和攪拌作用等效應(yīng),使物質(zhì)分子運(yùn)動(dòng)頻率和速度增大,增加溶劑穿透力,從而使目標(biāo)成分進(jìn)入溶劑的速度加快,促進(jìn)提取的進(jìn)行。微波輔助萃取是指用微波能對(duì)與樣品相接觸的溶劑加熱,使磷脂從樣品基體中分離出來并進(jìn)入溶劑,是在傳統(tǒng)萃取工藝的基礎(chǔ)上強(qiáng)化傳熱、傳質(zhì)的一個(gè)過程。岳喜慶等[39]探索超聲波輔助提取牛骨髓中卵磷脂的工藝條件,得出卵磷脂提取的最佳條件為料液比1∶ 5(mL),乙醇濃度90%,超聲時(shí)間30min。

3. 2 超臨界流體萃取

超臨界流體萃取(SC - CO2)是利用超臨界流體兼有液體與氣體的雙重性質(zhì),通過控制體系壓力和溫度,實(shí)現(xiàn)分離提取的目的。在磷脂萃取中,常常應(yīng)用的是添加夾帶劑乙醇的SC - CO2萃取磷脂。Shah等[40]以乙醇作為夾帶劑,通過兩次超臨界CO2萃取,從雞蛋中成功分離純化磷脂。

超臨界CO2流體萃取可在低溫下提取卵磷脂,有效防止卵磷脂的氧化,并且提取后無溶劑殘留,對(duì)卵磷脂和環(huán)境都不會(huì)造成污染,此外萃取劑CO2無毒無害,無殘留,價(jià)格便宜并可以循環(huán)使用,能有效節(jié)約能源。其主要缺點(diǎn)是溶劑選擇范圍較窄,需要在較高的壓力下進(jìn)行操作,并且對(duì)設(shè)備要求較高,費(fèi)用昂貴,在實(shí)際生產(chǎn)中,建立大規(guī)模提取生產(chǎn)線存在一定難度。

3. 3 酶提取法

酶法提取磷脂包括酶水解法和酶催化精致法兩種。酶水解法是利用酶的水解作用,使與脂質(zhì)結(jié)合的糖類和蛋白類物質(zhì)水解,從而使脂質(zhì)釋放出來,提高卵磷脂的得率。該法的主要優(yōu)勢(shì)在于在提取磷脂的同時(shí)還可能會(huì)獲取一些具有生物活性的水解蛋白,并且該法無溶劑殘留現(xiàn)象,對(duì)環(huán)境無污染。其主要缺點(diǎn)是提高了成本。程秋菊[41]在超聲輔助提取的基礎(chǔ)上,加入蛋白酶,對(duì)鴨肝中脂蛋白進(jìn)行水解,可使鴨肝中卵磷脂提取率從76. 47%升高到87. 51%。

酶催化精致法是在粗磷脂中利用磷脂酶磷脂酰肌醇、磷脂酰乙醇胺等轉(zhuǎn)化成卵磷脂,從而大大提高卵磷脂的產(chǎn)量。該法的優(yōu)勢(shì)在于可以提高有效成分的純度。有研究報(bào)道,利用酶催化法可將蛋黃磷脂中的卵磷脂含量由75%提高到100%[42]。

3. 4 固相萃取(SFE)

SFE以固相物質(zhì)作為萃取劑將帶分離物質(zhì)和雜質(zhì)吸附于萃取柱上,雜質(zhì)由特定溶劑除去,再將分離物洗脫的方法。固相萃取法從動(dòng)物組織中提取磷脂的操作較常見[43 - 44]。

SFE的優(yōu)點(diǎn)是不會(huì)出現(xiàn)乳化現(xiàn)象,能夠提高磷脂的分離效率,并且樣品不易被氧化。其主要缺點(diǎn)是只能分離保留性質(zhì)差別較大的物質(zhì)。

4 卵磷脂的分析方法

磷脂分析常用的方法有重量法、比色法、薄層色譜法(TLC)、高效液相色譜(HPLC),其中前兩種方法用于總磷脂的測(cè)定,不適合對(duì)各磷脂組分進(jìn)行分析,因此不同磷脂組分的分析方法主要有TLC和HPLC。

4. 1 薄層色譜法

TLC是分離測(cè)定磷脂組分較為原始的方法,它是以活化的堿性硅膠板作為載體,將磷脂樣品與標(biāo)準(zhǔn)品在同樣條件下展開,通過顯色劑來實(shí)現(xiàn)不同磷脂組分的分離。

該法的優(yōu)點(diǎn)是方便、快速、靈敏度高和分離效果好,對(duì)吸附劑和展開劑的選擇比較靈活,分析結(jié)果直觀等;主要缺點(diǎn)是干擾因素較多、重復(fù)性較差。

4. 2 高效液相色譜法

高效液相色譜法利用各種磷脂組分之間極性頭部所帶的官能團(tuán)和電荷各不相同,從而將各組分分離。高效液相色譜法經(jīng)常與其他方法聯(lián)合起來應(yīng)用,從而快速準(zhǔn)確的分析不同磷脂組分。Narváez -Rivas Mónica等[43]使用高效液相色譜 - 蒸發(fā)光散射檢測(cè)法(HPLC/ELSD)對(duì)伊比從利亞豬樣品的皮下脂肪中提取的磷脂混合物進(jìn)行精確分析,能夠快速,靈敏和高重現(xiàn)性的分離和定量的不同類別的磷脂。Wang等[44]通過固相萃取對(duì)高郵鴨肌內(nèi)磷脂進(jìn)行純化后,通過正相高效液相色譜法結(jié)合紫外蒸發(fā)光散射檢測(cè)器對(duì)磷脂進(jìn)行定性和定量,并通過高效液相色譜法 - 蒸發(fā)光散射 - 電噴霧電離質(zhì)譜法對(duì)PC和PE分子種類進(jìn)行了定量測(cè)定。Hayakwa 等[45]通過液相色譜 - 質(zhì)譜聯(lián)用,分離出兔子組織中PG、PI、PE、PC、SM、LPC成分,并進(jìn)行了定量,實(shí)現(xiàn)磷脂分子的定量分析。

HPLC的優(yōu)點(diǎn)是能使具有難揮發(fā)性和熱敏性性質(zhì)的磷脂在常溫下得到分離,并且其封閉系統(tǒng)能減少磷脂在分析過程中被氧化的可能性,從而確保磷脂快速、靈敏、準(zhǔn)確的定量分析。該法的主要缺點(diǎn)是要求樣品中磷脂含量較高,所用的溶劑必須精制,設(shè)備要求也較高,推廣有難度。

除TLC和HPLC外,目前一些新興的方法,如核磁共振波譜法(NMR)和熒光分光光度法(FS)[46]也得到了廣泛應(yīng)用。

5 結(jié)論與展望

動(dòng)物源卵磷脂來源豐富且營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高,不僅具有植物卵磷脂所具有的功效作用,還表現(xiàn)出更高的開發(fā)價(jià)值。當(dāng)前,面對(duì)大豆卵磷脂純度低、市場(chǎng)卵磷脂供不應(yīng)求的現(xiàn)狀,動(dòng)物可作為商品卵磷脂的來源,不僅可以豐富市售卵磷脂的種類,還能提高農(nóng)產(chǎn)品的附加值,帶來可觀的經(jīng)濟(jì)效益。

目前我國(guó)對(duì)動(dòng)物卵磷脂的研究仍然處于起步階段,關(guān)于動(dòng)物卵磷脂的功效作用、提取和分析方法的研究都還不夠成熟,這嚴(yán)重限制了動(dòng)物源卵磷脂的發(fā)展。科研工作者應(yīng)加大對(duì)其研究力度,對(duì)動(dòng)物卵磷脂的功效作用進(jìn)行深入研究,并對(duì)其提取、分離和分析檢測(cè)方法進(jìn)行不斷的優(yōu)化,尋求能夠付諸于工業(yè)化生產(chǎn)的有效方法,推動(dòng)動(dòng)物卵磷脂的發(fā)展,提高動(dòng)物副產(chǎn)品的價(jià)值。

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