劉志芳 馬元龍 阿拉騰楚魯 于希軍 賀 偉

MyD88、NF－κB及TNF－α在梅毒患者血清中的表達(dá)

劉志芳 馬元龍 阿拉騰楚魯 于希軍 賀 偉

目的: 檢測(cè)髓樣分化因子88(MyD88)、核因子－κB(NF－κB)及腫瘤壞死因子－α(TNF－α)在梅毒患者血清中的表達(dá)。方法: 采用ELISA方法檢測(cè)82例臨床確診的一期及二期梅毒患者與48名正常人血清MyD88、NF－κB和TNF－α水平。結(jié)果: 82例梅毒患者血清中MyD88、NF－κB及TNF－α水平均高于正常對(duì)照組，兩者比較差異均有顯著性(P＜0.001)。結(jié)論: MyD88、NF－κB和TNF－α可能與TP感染機(jī)體后的免疫應(yīng)答有關(guān)。

梅毒； 梅毒螺旋體； 髓樣分化因子88； 核因子－κB； 腫瘤壞死因子－α

Toll樣受體(Toll－like recepter，TLR)家族中的TLR2參與了免疫細(xì)胞對(duì)TP的識(shí)別和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，可通過其跨膜結(jié)構(gòu)將TP膜脂蛋白刺激信號(hào)導(dǎo)入細(xì)胞內(nèi)，產(chǎn)生復(fù)雜的級(jí)聯(lián)信號(hào)反應(yīng)，引起相應(yīng)炎癥介質(zhì)的釋放，其中髓樣分化因子88(myeloid differentiation factor 88，MyD88)是Toll樣受體超家族的重要成員，是啟動(dòng)活化核因子－κB(nuclear factor－kapaB，NF－κB)的必要銜接蛋白。1NF－κB作為信號(hào)傳導(dǎo)途徑中的樞紐，是一種重要的核轉(zhuǎn)錄因子，可通過調(diào)控TL－1、TL－6、IL－12、IL－8和TNF－α等多種重要因子的表達(dá)，在機(jī)體的免疫應(yīng)答、炎癥反應(yīng)及細(xì)胞的生長(zhǎng)調(diào)控等方面發(fā)揮重要作用，其活化也參與細(xì)胞增殖和凋亡的過程。2有研究報(bào)道TNF－α是TP感染后機(jī)體免疫應(yīng)答的重要炎癥介質(zhì)，3，4因此本實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步對(duì)TNF－α及上游調(diào)控因子MyD88、NF－κB進(jìn)行了研究。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇有典型皮膚損害的未經(jīng)治療的首診一期梅毒23例及二期梅毒59例，其中男48例，女34例，年齡17～65歲，平均37歲，均無自身免疫性疾病及其它可出現(xiàn)梅毒抗體陽性的疾病。HIV檢測(cè)陰性。所有病例均通過梅毒螺旋體乳膠凝集試驗(yàn)(TPPA)檢測(cè)為陽性，RPR(快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗(yàn))陽性，滴度在1∶8～1∶128。將患者的血清吸入EP管內(nèi)，－80℃保存待測(cè)。二期梅毒表現(xiàn)為手足紅斑21例，軀干玫瑰糠疹樣紅斑20例，銀屑病樣皮疹11例，其他少見皮疹6例。正常對(duì)照組48名來自體檢中心，病例組與對(duì)照組的年齡和性別分布無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法 將標(biāo)本取出，復(fù)溫。采用ELISA法檢測(cè)患者及正常對(duì)照組血清中MyD88、NF－κB及TNF－α水平。ELISA試劑盒購自美國RB公司，嚴(yán)格按說明書操作。主要儀器BIO－BAD680酶標(biāo)儀、BIO－BAD1575洗板機(jī)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 19.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，測(cè)得結(jié)果用ˉx±s表示，一期梅毒、二期梅毒及正常對(duì)照3組間比較采用單因素方差分析(ANOVA)，組內(nèi)比較用LSD法。

2 結(jié)果

見表1。一期、二期梅毒患者中3種因子的含量高于對(duì)照組(MyD88:F＝91.334，P＜0.001；NF－κB:F＝84.225，P＜0.001；TNF－α:F＝161.099，P＜0.001)；一期、二期梅毒患者M(jìn)yD88、NF－κB組間無顯著性差異(P＞0.05)，兩組間TNF－α有顯著性差異(P＜0.001)。

表1 3組血清MyD－88、NF－κB及TNF－α的檢測(cè)結(jié)果

3 討論

MyD－88是Toll樣受體轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中關(guān)鍵的轉(zhuǎn)接分子，是信號(hào)向下游轉(zhuǎn)導(dǎo)的關(guān)鍵靶分子，被稱為萬能銜接蛋白。5TP具有膜脂蛋白，與脂多糖結(jié)合蛋白CD14和TLR相互作用。一些糖脂可以導(dǎo)致強(qiáng)烈的直接免疫應(yīng)答，其他一些可能作為強(qiáng)有力的抗原，誘導(dǎo)適應(yīng)性免疫反應(yīng)。6因此推斷，梅毒螺旋體侵入皮膚黏膜后，其膜脂蛋白作為最重要的病原相關(guān)分子模式(PAMP)，被單核細(xì)胞膜上的TLR2識(shí)別，在CD4協(xié)同下將信號(hào)由胞區(qū)外傳至胞漿TLR區(qū)域，主要經(jīng)MyD88途徑活化NF－κB，NF－κB移至細(xì)胞核內(nèi)，并結(jié)合啟動(dòng)子和前炎性基因增強(qiáng)子上的IκK－β位點(diǎn)，開始轉(zhuǎn)錄過程。7NF－κB作為信號(hào)傳導(dǎo)途徑中的樞紐，是一種重要的核轉(zhuǎn)錄因子，可誘導(dǎo)TL－1、TL－6、IL－12、IL－8和TNF－α等炎癥因子的釋放，8而TNF－α是一種具有介導(dǎo)炎癥、免疫應(yīng)答和凋亡等多種生物效應(yīng)的細(xì)胞因子，主要由單核－巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和角質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生，能夠增強(qiáng)中性粒細(xì)胞的趨化性，協(xié)助炎癥性細(xì)胞穿透血管壁，導(dǎo)致炎癥細(xì)胞的活化，誘發(fā)炎癥反應(yīng)，促使單核細(xì)胞，淋巴細(xì)胞聚集形成局部炎癥，利于清除TP，同時(shí)造成組織學(xué)上典型的血管炎和細(xì)胞浸潤(rùn)。9

有研究報(bào)道TNF－α在梅毒的免疫中發(fā)揮著重要作用。10本研究結(jié)果顯示，一期及二期梅毒患者血清中MyD88，NF－κB及TNF－α水平明顯高于對(duì)照組(P＜0.001)，說明MyD88，NF－κB可能在TP感染人體后的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中起重要作用，在其誘導(dǎo)下產(chǎn)生重要的炎癥因子TNF－α。朱慧蘭等3研究發(fā)現(xiàn)，與正常對(duì)照組相比，一期、二期和潛伏梅毒患者血清TNF－α水平明顯增高，在一定程度上表明TNF－α是TP感染后機(jī)體免疫應(yīng)答的重要炎癥介質(zhì)，參與了TP感染后機(jī)體的病理反應(yīng)。曹雙林等4研究認(rèn)為TNF－α可能與二期梅毒銀屑病樣皮疹的產(chǎn)生有關(guān)，但本組樣本未觀察銀屑病樣皮疹與其它類型皮疹之間TNF－α的差異，TNF－α是否與其他類型皮疹的發(fā)生有關(guān)有待于進(jìn)一步研究。本研究結(jié)果顯示二期梅毒血清中TNF－α水平高于一期梅毒(P＜0.001)，推測(cè)可能是由于隨著梅毒病程的進(jìn)展，梅毒螺旋體由淋巴系統(tǒng)進(jìn)入血液循環(huán)，形成菌血癥散播全身，導(dǎo)致梅毒螺旋體膜脂蛋白刺激信號(hào)持續(xù)存在，通過MyD88、NF－κB途徑不斷向下游轉(zhuǎn)導(dǎo)，使其誘導(dǎo)產(chǎn)生的TNF－α在二期梅毒患者血中高表達(dá)，而TNF－α在體內(nèi)的大量釋放可造成機(jī)體的多種病理損傷。

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(收稿:2013－09－24 修回:2013－10－22)

Expression of M yD－88，NF－κB and TNF－αin the patientswith syphilis

LIU Zhi-fang，MAYuan-long，ALATENGChu-lu，etal.Department ofDermatology，the Affiliated Hospital of InnerMongolia Medicol University，InnerMongolia Hohehot，010050

Objective:Tomeasure the expression of MyD－88，NF－κB and TNF－αin the sera of patients with syphilis.Methods:Eighty－two patients with syphilis and forty eight healthy controls were recruited into the study.The expression of MyD－88，NF－κB and TNF－αweremeasured with ELISA.Results:The levels of MyD88，NF－κB and TNF－αin patients with syphilis were significantly higher than those in healthy controls (P＜0.001).Conclusion:MyD88 and NF－κB may play a part of role in the immune response to treponema pallidum infection.

syphilis；treponema pallidum；MyD88；NF－κB；TNF－α

內(nèi)蒙古自治區(qū)自然科學(xué)基金(編號(hào):2010MS1153)

內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院皮膚性病科，內(nèi)蒙古呼和浩特，010050