竺奇慧 張 瑞 紀(jì) 鵬 許 飛 李 莉 張國(guó)范①

(1. 海洋生態(tài)養(yǎng)殖技術(shù)國(guó)家地方聯(lián)合工程實(shí)驗(yàn)室 中國(guó)科學(xué)院海洋研究所 青島 266071;2. 中國(guó)科學(xué)院大學(xué) 北京 100049)

牡蠣是一種營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值都較高的貝類,在我國(guó)已經(jīng)有2000多年的養(yǎng)殖歷史。它們呈世界性分布, 各臨海國(guó)家和地區(qū)幾乎都產(chǎn)牡蠣, 也是目前我國(guó)乃至全球產(chǎn)量最大的經(jīng)濟(jì)貝類(王如才等, 2008)。作為濾食性貝類, 牡蠣主要分布在潮間帶, 營(yíng)固著和群聚生活, 是海洋生態(tài)系統(tǒng)的重要成員, 對(duì)其生活的內(nèi)灣和近海水域環(huán)境起重要調(diào)控作用。海洋酸化是指由于吸收大氣中過量二氧化碳(CO2)而導(dǎo)致的海水逐漸變酸的現(xiàn)象。調(diào)查顯示, 大多數(shù)中低緯度陸架海近岸海域表層CO2分壓明顯高于海區(qū)中部區(qū)域(薛亮等,2011), 也就是說, 相對(duì)其他海洋區(qū)域而言, 牡蠣所生活的近岸海域是最先也是最容易受到海洋酸化影響的海域。而牡蠣在貝殼形成的過程中, 能將餌料中攝取的有機(jī)碳以無機(jī)碳酸鈣的形式固化, 從而為減少溫室效應(yīng)以及海洋酸化作出積極貢獻(xiàn)。

貝殼的形成是一個(gè)有機(jī)和無機(jī)分子之間相互識(shí)別的過程, 即有機(jī)分子控制無機(jī)凝聚態(tài)納米結(jié)構(gòu)材料形成的過程(Bermanet al, 1993)。同時(shí), 貝殼也是牡蠣抵抗外界環(huán)境變化和保護(hù)自身安全的第一道防線,例如貝類在遭遇低鹽等滲透壓壓力的脅迫時(shí), 它們首先啟動(dòng)的是閉殼反應(yīng), 以隔絕軟體部與環(huán)境的交流(Hoyauxet al, 1976)。而牡蠣所處的潮間帶, 由于介于海陸之間, 交替露空和浸水, 對(duì)所處的生物在溫度、鹽度、缺氧等環(huán)境因素適應(yīng)性上有較高的要求。因此, 貝殼的硬度、厚度及密度等物理性質(zhì)與牡蠣適應(yīng)潮間帶惡劣環(huán)境之間有很大的相關(guān)性, 但是國(guó)內(nèi)外卻鮮見與之相關(guān)的研究報(bào)道。Zhang等(2012)從基因組及轉(zhuǎn)錄組的角度分析了牡蠣貝殼形成的機(jī)制,對(duì)于牡蠣貝殼研究奠定了重要的組學(xué)基礎(chǔ); 有研究者還發(fā)現(xiàn)了一些與長(zhǎng)牡蠣貝殼形成相關(guān)的基因和蛋白(Wanget al, 2013; Songet al, 2014)。除此之外, 不同海區(qū)的餌料結(jié)構(gòu)、水溫變化、鹽度變化以及潮汐海浪等環(huán)境因素也會(huì)作用于牡蠣的貝殼生長(zhǎng), 可能會(huì)影響牡蠣貝殼的密度。為此, 本研究采用排水稱重法對(duì)來自于不同海區(qū)26個(gè)站點(diǎn)的1100個(gè)樣品進(jìn)行了測(cè)定分析, 旨在初步解析環(huán)境效應(yīng)對(duì)牡蠣貝殼密度的影響, 為牡蠣貝殼形成機(jī)制以及溫度、鹽度和海洋酸化等環(huán)境因素對(duì)牡蠣貝殼形成的影響等研究提供實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和參考。

1 材料與方法

1.1 材料

本研究對(duì)不同海區(qū)牡蠣的貝殼密度進(jìn)行了測(cè)量及比較分析, 樣品取自國(guó)內(nèi)22個(gè)不同海域(圖1), 以及4個(gè)國(guó)外血統(tǒng)牡蠣群體: 23號(hào)來自日本、24號(hào)來自韓國(guó)、25號(hào)來自加拿大、26號(hào)來自南非, 它們均為引種國(guó)內(nèi)后的選育群體。

國(guó)內(nèi)取樣點(diǎn)以渤海近岸及黃海近岸為主, 少量分布在東海近岸以及南海近岸。巨牡蠣屬在中國(guó)沿海的分布具有區(qū)域性(王海艷, 2004), 通過鑒定, 我們確認(rèn)1至19號(hào)取樣點(diǎn)所取牡蠣均為長(zhǎng)牡蠣(Crassostrea gigas), 20至22號(hào)取樣點(diǎn)所取為葡萄牙牡蠣(Crassostrea angulata)。而國(guó)外血統(tǒng)的牡蠣均為人工養(yǎng)殖的長(zhǎng)牡蠣,與野生牡蠣相比, 其受到的環(huán)境壓力相對(duì)較弱。根據(jù)牡蠣在潮間帶的垂直分布, 取樣點(diǎn)2、6、13號(hào)以及20號(hào)的牡蠣均取自潮間帶上部。

圖1 國(guó)內(nèi)取樣點(diǎn)分布圖Fig.1 The sampling sites of this study

1.2 方法

1.2.1 殼形態(tài)指數(shù) 在清除貝殼表面附著的生物和污物后, 先對(duì)牡蠣的殼長(zhǎng)(L)、殼高(H)、殼寬(W)等形態(tài)相關(guān)參數(shù)進(jìn)行測(cè)量, 其中殼長(zhǎng)、殼高、殼寬參照蔡英亞等(1995)的定義。根據(jù)許飛等(2007)報(bào)道的方法, 計(jì)算牡蠣殼形態(tài)指數(shù)(SMI值, shell morphological index), 用如下公式計(jì)算: SMI=L×W/H2。SMI值相對(duì)較大的牡蠣, 其形態(tài)更接近圓形; 而SMI值相對(duì)較小的牡蠣, 其體形較為狹長(zhǎng)。

1.2.2 排水稱重法 在對(duì)牡蠣的形態(tài)相關(guān)參數(shù)進(jìn)行測(cè)量后, 解剖牡蠣, 去除軟體部。最后用排水稱重法對(duì)牡蠣貝殼進(jìn)行測(cè)量, 操作步驟如下:

(1) 準(zhǔn)備量程600g、精度0.01g的電子天平一臺(tái),盛有蒸餾水的500mL燒杯一只, 鑷子和記號(hào)筆, 以及待測(cè)的貝殼;

(2) 用記號(hào)筆在鑷子夾物端以上2cm左右處劃一條標(biāo)線;

(3) 將燒杯置于電子天平上, 鑷子伸入液面至步驟(2)所劃標(biāo)線處, 鑷子必須懸于水中不觸壁, 打開天平并調(diào)零(圖2a);

(4) 如圖2b所示, 用鑷子夾貝殼伸入液面至步驟(2)所劃標(biāo)線處, 鑷子以及貝殼必須懸于水中不觸壁, 待電子天平穩(wěn)定后記錄讀數(shù)m(單位: g), 該讀數(shù)m的值即等于貝殼體積V(單位: cm3)(此步驟的原理見本文討論部分);

(5) 如圖2c所示, 放開鑷子, 讓貝殼沉至底部,鑷子的位置保持伸入液面至標(biāo)線不變, 待電子天平穩(wěn)定后記錄讀數(shù)M(單位: g), 該讀數(shù)M即為貝殼質(zhì)量;

(6) 根據(jù)步驟(4)記錄的貝殼體積V和步驟(5)記錄的貝殼質(zhì)量M, 計(jì)算密度ρ=M/V。

其中步驟(1)中所述電子天平可以是較為常見的量程為500g及以上、精度為0.1g或0.01g的電子天平, 燒杯的大小根據(jù)待測(cè)貝殼大小選擇, 可以是100mL至500mL不等, 加入的水量以能夠完全淹沒貝殼但不溢出為度, 鑷子是普通10cm左右長(zhǎng)的鐵質(zhì)鑷子, 記號(hào)筆是油性防水筆。

1.3 數(shù)據(jù)處理

圖2 排水稱重法操作示意圖Fig.2 Instructions of draining-weighing method

測(cè)量結(jié)果用Excel軟件及R語言軟件進(jìn)行分析和作圖, 其中R語言部分參照湯銀才(2008)以及薛毅等(2006)介紹的方法。除貝殼密度計(jì)算、密度均值及標(biāo)準(zhǔn)差計(jì)算等常規(guī)計(jì)算外, 對(duì)不同取樣點(diǎn)的每只牡蠣,利用配對(duì)樣本t檢驗(yàn)方法分析左右貝殼間的密度差異;對(duì)不同取樣點(diǎn)間的牡蠣貝殼密度, 用單因素方差分析法分析差異顯著性, 再利用多重t檢驗(yàn)方法, 對(duì)各取樣點(diǎn)間的均值進(jìn)行多重比較, 并用Bonferroni方法校正P值。

為了分析牡蠣外形是否影響貝殼的密度, 對(duì)不同取樣點(diǎn)牡蠣的貝殼形態(tài)參數(shù)與貝殼總密度之間又進(jìn)行了相關(guān)系數(shù)分析。相關(guān)系數(shù)的取值范圍為-1至+1之間(R表示相關(guān)系數(shù)), 相關(guān)系數(shù)的絕對(duì)值|R|越接近于1, 表示兩變量間的相關(guān)關(guān)系越密切; 越接近于0, 表示相關(guān)關(guān)系越弱; 若|R|=1, 則表示兩個(gè)變量完全相關(guān), 正數(shù)為正相關(guān), 負(fù)數(shù)為負(fù)相關(guān);R=0則表示完全不相關(guān)(李彥萍等, 2003)。

2 結(jié)果

2.1 牡蠣貝殼形態(tài)指數(shù)分析

各取樣點(diǎn)牡蠣的殼長(zhǎng)、殼高、殼寬等參數(shù)測(cè)量結(jié)果如表1所示, 大部分取樣點(diǎn)的牡蠣其SMI值在0.19至0.28之間; 而18和22號(hào)取樣點(diǎn)的牡蠣SMI值相對(duì)較大, 牡蠣形態(tài)較圓; 取樣點(diǎn)10、11和23號(hào)的牡蠣SMI值較小, 牡蠣形態(tài)較狹長(zhǎng)。

表1 不同取樣點(diǎn)牡蠣形態(tài)參數(shù)測(cè)量結(jié)果Tab.1 Morphological parameters of oysters shells from different sampling sites

2.2 不同海區(qū)牡蠣的貝殼密度

不同取樣點(diǎn)牡蠣的貝殼密度測(cè)量結(jié)果見表2。對(duì)左殼密度與右殼密度進(jìn)行比較分析, 發(fā)現(xiàn)對(duì)于大部分取樣點(diǎn)的牡蠣, 左殼與右殼之間的密度差異在統(tǒng)計(jì)上是顯著(P<0.05)甚至極顯著(P<0.01)的, 且從均值上反映出左殼密度小于右殼(配對(duì)樣本單尾t檢驗(yàn)P<0.001); 僅三個(gè)取樣點(diǎn)牡蠣的左右殼密度差異不顯著。牡蠣的左殼一般稍大, 用于固著在巖礁等固形物上, 而右殼朝外。相對(duì)于左殼而言, 右殼需要承受更多的海浪沖擊等環(huán)境壓力, 這可能是導(dǎo)致牡蠣左殼密度小于右殼密度的原因。

表2 不同取樣點(diǎn)牡蠣貝殼密度均值Tab.2 Shell density of oysters from different sampling sites

圖3 不同取樣點(diǎn)間牡蠣貝殼密度均值的差異顯著性Fig.3 The significance of difference in density of oyster shells among sampling sites

對(duì)于不同取樣點(diǎn)間牡蠣貝殼密度的差異, 我們分別對(duì)左殼密度、右殼密度以及貝殼總密度在26個(gè)取樣點(diǎn)間共1100只牡蠣進(jìn)行了單因素方差分析, 發(fā)現(xiàn)三者的P值均小于0.001, 即各取樣點(diǎn)間三者的差異都是極顯著的。再對(duì)各取樣點(diǎn)間的均值進(jìn)行多重比較, 結(jié)果見圖3。26組樣本間一共進(jìn)行了351組比較,每組又有左殼密度、右殼密度及貝殼總密度3個(gè)比較, 即一共比較1053次。其中0.01

雖然牡蠣的左殼密度一般小于右殼, 對(duì)于不同海區(qū)間的牡蠣群體, 左殼密度差異、右殼密度差異以及貝殼總密度差異三者相比, 變化趨勢(shì)是相似的(圖4)。而地理位置相近的海區(qū)間的牡蠣群體間, 殼密度也有相近趨勢(shì)。例如, 取樣點(diǎn)2號(hào)、3號(hào)及4號(hào)密度相近, 7號(hào)與8號(hào)密度相近, 9號(hào)、10號(hào)及11號(hào)密度相近, 而它們之間的地理位置也相對(duì)較近。圖3的差異顯著性分析, 也佐證了兩者間這一聯(lián)系。推測(cè)原因?yàn)橄嘟蛴邢嗨频乃疁刈兓?、餌料結(jié)構(gòu), 牡蠣基因的差異也相對(duì)較小。

圖4 不同取樣點(diǎn)牡蠣的左殼(a)、右殼(b)及左右殼總和(c)的密度分布箱線圖Fig.4 Box plot of oysters left-shell (a), right-shell (b) and all-shells (c) density in different sampling sites

相對(duì)于養(yǎng)殖牡蠣以及潮間帶中下部所取牡蠣,取自潮間帶上部的牡蠣密度相對(duì)較大。本研究中, 取樣點(diǎn)2、6、13號(hào)及20號(hào)的牡蠣取自潮間帶的上部, 相比其他組, 它們的貝殼密度顯著較大。而比較取樣點(diǎn)20、21號(hào)及22號(hào)的牡蠣, 它們均為葡萄牙牡蠣, 但是在潮間帶上部生長(zhǎng)的20號(hào)取樣點(diǎn)牡蠣擁有相對(duì)較大的貝殼密度。一般認(rèn)為, 處于潮間帶的上部的牡蠣,會(huì)經(jīng)受較長(zhǎng)時(shí)間的海浪沖擊, 暴露在空氣中的時(shí)間也相對(duì)較長(zhǎng), 這也導(dǎo)致它們所攝食的餌料較少, 且溫度、鹽度等環(huán)境因子的變化在四季之間甚至一日之內(nèi)都非常劇烈。潮間帶上部這種惡劣的生長(zhǎng)環(huán)境, 足以導(dǎo)致貝殼生長(zhǎng)緩慢, 從而使生物和非生物物質(zhì)在貝殼內(nèi)慢慢累積, 這可能是它們的貝殼密度相對(duì)較大的原因。

對(duì)于不同取樣點(diǎn)牡蠣的貝殼形態(tài)參數(shù)與貝殼總密度之間相關(guān)系數(shù)的分析結(jié)果見表3。對(duì)于大部分取樣點(diǎn)的牡蠣, 貝殼形態(tài)參數(shù)與貝殼總密度之間的相關(guān)性很弱(|R|<0.4); 僅少數(shù)幾個(gè)取樣點(diǎn)的牡蠣, 某些形態(tài)參數(shù)與貝殼總密度有顯著相關(guān)(|R|>0.6); 而SMI值在大部分取樣點(diǎn)的牡蠣中與貝殼總密度都相關(guān)性很弱, 說明牡蠣外形長(zhǎng)或圓與貝殼密度的大小基本沒有關(guān)系。

表3 不同取樣點(diǎn)牡蠣的貝殼形態(tài)參數(shù)與貝殼總密度相關(guān)系數(shù)Tab.3 The correlation coefficient between shell morphological parameters and density of all oysters shells in different sites

3 討論

3.1 排水稱重法的原理

本研究首次提出了采用排水稱重法測(cè)量貝殼的質(zhì)量和體積。在該方法的步驟(2)中用記號(hào)筆在鑷子夾物端以上2cm左右處劃一條標(biāo)線, 且后續(xù)步驟中鑷子均伸入液面至此標(biāo)線處, 這樣可以使每次伸入液面下鑷子的體積基本一致, 以盡量消除該部分體積的變化對(duì)測(cè)量準(zhǔn)確度的影響。而步驟(3)和(4)中均提及鑷子或貝殼必須懸于水中不觸壁, 這是為了不使鑷子或貝殼的重力直接作用于燒杯而影響測(cè)量的準(zhǔn)確度。

由于步驟(4)中(圖2b)貝殼沒有觸壁, 故所測(cè)得的質(zhì)量m等于液面升高的水的質(zhì)量, 根據(jù)密度公式,該液面升高的水的體積v=ρ×m, 而蒸餾水的密度ρ在常溫下為1.0g/cm3, 故有v=m; 而根據(jù)阿基米德定律,該液面升高的水的體積v即等于所測(cè)的貝殼體積V,于是有V=v=m, 故得出m的值等于貝殼體積V的值。

貝殼在步驟(5)中(圖2c)沉入水底, 其重量直接作用于燒杯底部。若將所有燒杯內(nèi)各物體考慮為一個(gè)整體系統(tǒng), 與步驟(3)比較, 此時(shí)該系統(tǒng)中只增加了貝殼的重量。水作用于貝殼的浮力及貝殼對(duì)水的反作用力, 均屬于該系統(tǒng)內(nèi)部的力, 而對(duì)于燒杯外的電子天平而言, 只增加了貝殼的重力, 故讀數(shù)M即為貝殼質(zhì)量。

3.2 排水稱重法的優(yōu)勢(shì)

牡蠣殼形極不規(guī)則且殼表粗糙, 各種環(huán)境因子比如風(fēng)浪沖擊、其他生物的固著或附著以及固著物的形狀和種類, 都會(huì)影響到牡蠣貝殼形狀(王如才等,2008)。傳統(tǒng)的不規(guī)則物體的體積測(cè)量方法有排液法、稱重法和排氣法等(遲善武, 1996), 而測(cè)量牡蠣貝殼體積一般用排水法和稱重法(許飛等, 2007)。

其中排水法是在量筒中加入蒸餾水并記錄水位刻度, 將貝殼浸沒于水中, 再次讀取水位刻度, 兩個(gè)水位刻度差即貝殼體積。該方法中, 誤差主要源于操作者對(duì)牡蠣浸沒前后量筒中的水位進(jìn)行讀數(shù)時(shí)的人為誤差和由于量筒刻度不夠精細(xì)所帶來的誤差, 這種誤差的絕對(duì)值隨量筒的量程增大而增加。由于量筒相對(duì)燒杯來說是細(xì)長(zhǎng)型容器, 口徑較小, 所以牡蠣的殼尺寸決定了使用量筒的量程, 比如500mL的量筒只能適用于殼長(zhǎng)小于4.5cm的牡蠣。又由于量筒的刻度不夠精細(xì), 比如500mL的量筒最小刻度為10mL,而牡蠣貝殼的體積一般小于10cm3, 故貝殼體積測(cè)量值只能是估計(jì)數(shù), 系統(tǒng)誤差較大。

稱重法是在燒杯中加入蒸餾水至足夠浸沒貝殼,并標(biāo)記水位刻度, 再測(cè)出4個(gè)數(shù)據(jù): 空燒杯的質(zhì)量(W0)、空燒杯加牡蠣貝殼的質(zhì)量(W1)、空燒杯加水至標(biāo)記水位處后的總質(zhì)量(W2)、以及空燒杯內(nèi)放入牡蠣貝殼, 然后加水至標(biāo)記水位處后的總質(zhì)量(W3)。把4個(gè)數(shù)值代入公式計(jì)算貝殼體積。這種方法的誤差主要也來源于操作者對(duì)燒杯中水位的辨別, 由于燒杯內(nèi)徑較大, 所以標(biāo)定水位時(shí)的誤差也較大; 且對(duì)于體積較小的牡蠣貝殼, 排水所造成的液面上升不明顯, 測(cè)量準(zhǔn)確度低。

相比這兩種方法, 本研究提出的排水稱重法更加簡(jiǎn)單、快速而準(zhǔn)確, 其優(yōu)點(diǎn)有: 操作簡(jiǎn)單, 一次操作即可以準(zhǔn)確得到牡蠣貝殼的體積, 且無需如稱重法中所述的繁瑣計(jì)算步驟; 測(cè)量結(jié)果準(zhǔn)確, 該方法中人工標(biāo)定的過程只涉及控制鑷子伸入液面的高度,不易出現(xiàn)大誤差; 適用于所有牡蠣貝殼的測(cè)量, 即使對(duì)小體積的牡蠣貝殼也能進(jìn)行準(zhǔn)確測(cè)量。

雙殼貝類中常用肥滿指數(shù)(也稱條件指數(shù))作為育種的重要指標(biāo), 它是指肉質(zhì)部的肥瘦程度(張福綏等, 1986), 可以用來確定適宜的采收時(shí)期、進(jìn)行采苗預(yù)報(bào), 并對(duì)其開展增養(yǎng)殖工作具有重要指導(dǎo)意義。而牡蠣一般以軟體部干質(zhì)量與殼腔容積的比值計(jì)算肥滿度(Massapinaet al, 1999; Huanget al, 2006)。利用排水稱重法, 可以方便快捷地測(cè)量和計(jì)算出牡蠣的殼腔容積, 只需測(cè)量牡蠣個(gè)體體積及其貝殼體積, 兩者相減即為殼腔容積。

3.3 貝殼密度與環(huán)境效應(yīng)關(guān)系

生物與其所處環(huán)境總是相互影響、密不可分的,尤其是對(duì)于像蠣這樣營(yíng)固著生活的物種, 其環(huán)境效應(yīng)更不可忽視。在物理因子方面, 有研究表明牡蠣的生長(zhǎng)效率在20°C左右最高(周一兵等, 2000), 在此溫度下所攝入的能量用于生長(zhǎng)的部分最高, 而較快的生長(zhǎng)速度可能會(huì)引起牡蠣在貝殼上的積累減少, 導(dǎo)致貝殼密度相對(duì)較小; 另一個(gè)影響牡蠣貝殼密度的顯而易見的因素是海浪沖擊, 在受到海浪沖擊較嚴(yán)重的海域, 牡蠣往往需要更堅(jiān)硬的外殼保護(hù)自己。在化學(xué)因子方面, 海水的pH值是對(duì)牡蠣貝殼密度影響較大的因素。海洋酸化所導(dǎo)致最嚴(yán)重的結(jié)果是破壞碳酸鹽在水中的電離平衡, 使海水中的碳酸根離子濃度降低, 引起海洋中碳酸鹽的不斷溶解,這將影響具有碳酸鈣外殼的貝類的生物礦化過程。已有的許多研究表明, 海洋pH值降低對(duì)海灣扇貝、文蛤、櫛孔扇貝及馬氏珠母貝等多種貝類的貝殼形成過程有顯著的影響(Talmageet al, 2010; 何盛毅等, 2011;Van Colenet al, 2012)。在生物因子方面, 牡蠣餌料的種類與數(shù)量會(huì)影響貝殼的生長(zhǎng); 而牡蠣所處海域如捕食牡蠣、寄生于牡蠣的敵害生物也會(huì)影響牡蠣貝殼密度的大小。

不同海區(qū)間牡蠣的貝殼密度的差異以及相同海區(qū)牡蠣的左右殼密度差異, 是牡蠣適應(yīng)環(huán)境的結(jié)果。一方面, 在全球變暖、海洋酸化等惡劣環(huán)境因子日益加重的背景下, 牡蠣無論是內(nèi)在生理還是外在貝殼都遭受到更加嚴(yán)峻的環(huán)境壓力; 另一方便, 環(huán)境給予牡蠣的選擇壓力, 迫使牡蠣調(diào)整自身, 以適應(yīng)環(huán)境。因此, 不同海區(qū)的牡蠣貝殼密度的差異, 是牡蠣基因?qū)用娴倪z傳特性以及環(huán)境因子如溫度、鹽度以及餌料等綜合作用的結(jié)果, 也是牡蠣適應(yīng)性進(jìn)化的外在表現(xiàn)。

致謝 本研究樣本的采集、解剖和測(cè)量等工作量較大, 華中科技大學(xué)王夢(mèng)娜同學(xué)全程參與了貝殼密度的測(cè)量工作, 中國(guó)海洋大學(xué)的李琪教授提供了韓國(guó)和日本血統(tǒng)的牡蠣樣本, 本實(shí)驗(yàn)室其他同仁參與了牡蠣的解剖, 在此一并感謝。

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